DYRK 1 B蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義

劉偉靚，曹士紅

鄭州人民醫(yī)院1產(chǎn)科，2婦產(chǎn)科，鄭州4500030

宮頸癌是一種發(fā)生在宮頸、陰道或移行帶鱗‐柱交界處的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤[1]。引發(fā)宮頸癌的病因有很多，過早地發(fā)生性生活、性生活頻繁、與多人性交、過早分娩、16型和18型人乳頭狀病毒（HPV）的感染[2‐4]以及癌基因的激活與抑癌基因的失活[5‐6]均可導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生。目前，治療宮頸癌的方法有很多，并且均具有不同的療效，臨床上常見的治療方法以化療和放療為主[7]，但由于其骨髓抑制、皮膚黏膜周圍神經(jīng)損傷以及脫發(fā)等不良反應(yīng)而引起宮頸癌患者出現(xiàn)嘔吐、厭食，從而使患者難以承受化療帶來的不良反應(yīng)而被迫終止治療。故從分子角度研究宮頸癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制對及時(shí)診斷并治療宮頸癌，提高宮頸癌患者的生存率尤為重要，本研究探討了雙特異性酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)激酶1B（dual specificity tyrosinephosphorylation regulated kinase 1B，DYRK1B）蛋白表達(dá)與宮頸癌的相關(guān)性，為宮頸癌病理機(jī)制的研究提供了新而有效的研究方向，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月至2016年1月鄭州人民醫(yī)院收集的84例宮頸癌病理組織標(biāo)本（宮頸癌組）、同期收集的40例宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CⅠN）組織標(biāo)本（CⅠN組）、40例正常宮頸組織標(biāo)本（對照組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸癌、CⅠN組組織標(biāo)本均來源于手術(shù)后病理學(xué)標(biāo)本，對照組組織標(biāo)本來源于病檢結(jié)果正常的宮頸組織；②年齡為18～65歲；③獲取患者宮頸癌患者標(biāo)本前，患者未接受放化療或免疫治療；④患者的臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性宮頸癌；②既往具有放化療、免疫治療病史；③患者的臨床資料不完整；④未經(jīng)病理學(xué)證實(shí)；⑤合并卵巢及其他婦科惡性腫瘤疾病。宮頸癌組中，患者年齡32～63歲，平均（48.4±11.0）歲；＞50歲35例，≤50歲49例；組織學(xué)分級：高分化16例，中分化23例，低分化45例；病理學(xué)類型：鱗癌75例，腺癌9例；國際婦產(chǎn)聯(lián)盟（FⅠGO）分期：Ⅰ期37例，Ⅱ期47例；腫瘤浸潤深度：≥1/2者34例，＜1/2者50例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例。CⅠN組中，患者年齡29～57歲，平均（47.0±10.4）歲；CⅠN分級：1級12例，2級22例，3級6例。對照組中，患者年齡31～60歲，平均（49.7±12.4）歲。3組研究對象的年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 試劑及免疫組化檢測方法

試劑：二甲苯、檸檬酸修復(fù)液（PH6）、PBS緩沖液（PH7.4）、3%氧化氫、一抗、Max Vision試劑、蘇木紫。以上試劑均購自蘇州露水生物科技有限公司。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測DYRK1B蛋白的表達(dá)情況。取2 μl厚度的石蠟組織切片，60℃烤片；用常規(guī)二甲苯洗去石蠟，梯度乙醇水化后用自來水沖洗；PH為6的檸檬酸修復(fù)液修復(fù)2 min后，用PH為7.4的PBS緩沖液沖洗3次，每次沖洗時(shí)間為3 min；用3%的氧化氫室溫下孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性；PBS緩沖液沖洗3次，每次沖洗時(shí)間為3 min；滴加濃度為1∶50的一抗100 μl，1 h后，PBS緩沖液沖洗3次；向切片中滴加Max Vision試劑，DAB染色，蘇木紫復(fù)染，自來水處理后反藍(lán)，梯度乙醇脫色，滴加二甲苯后切片呈現(xiàn)透明。用中性塑膠封存標(biāo)本。

薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)（thin‐cytologic test，TCT）診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2004年子宮頸細(xì)胞學(xué)Bethesda報(bào)告系統(tǒng)（the bethesda system for reporting cervical cytology，TBS）提出的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級[8]：意義不明的不典型鱗狀細(xì)胞（atypicalsquamouscells undetermined significance，ASC‐US）、不除外上皮內(nèi)高度病變的不典型鱗狀細(xì)胞（atypical squamous cells of high lesion，ASC‐H）、低度鱗狀上皮內(nèi)病變（low degree squamous intraepithelial lesion，LSⅠL）、高度鱗狀上皮內(nèi)病變（high squamous intraepithelial lesion，HSⅠL）、鱗狀細(xì)胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）。

1.3 免疫組化結(jié)果判定

DYRK1B蛋白陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：DYRK1B蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。根據(jù)著色強(qiáng)度評分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色；根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例評分：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。兩項(xiàng)積分相乘，＜3分為陰性表達(dá)（－），3～5分為弱陽性表達(dá)（+），6～9分為中陽性表達(dá)（++）；＞9分為強(qiáng)陽性表達(dá)（+++）。對于免疫組化結(jié)果為（+）、（++）、（+++）的患者認(rèn)定為DYRK1B蛋白表達(dá)陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件-對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同類型宮頸組織中DYRK 1 B蛋白表達(dá)情況的比較

3組宮頸組織中DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=50.967，P＜0.01）。宮頸癌組中DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率為72.62%，高于CⅠN組中的22.50%和對照組的12.50%（P＜0.05）；CⅠN組和對照組中的DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表1、圖1）。

表1 DYRK 1 B蛋白在不同類型宮頸組織中的表達(dá)情況

圖1 DYRK 1 B蛋白在不同類型宮頸組織中的免疫組化染色結(jié)果（免疫組化染色，×200）

2.2 宮頸癌組織中DYRK 1 B蛋白陽性表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

不同臨床分期、組織浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的宮頸癌組織中DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而不同年齡、病理學(xué)類型的宮頸癌組織中DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）。

3 討論

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率較高，僅次于乳腺癌。宮頸癌的發(fā)病率在年齡中呈現(xiàn)雙峰狀，1/3的宮頸癌患者死于宮頸癌轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)；其轉(zhuǎn)移途徑有很多，直接蔓延到癌組織形成局部浸潤，繼而侵襲鄰近的組織和器官。宮頸癌早期就出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，由宮頸旁的腫瘤轉(zhuǎn)移至盆腔部，再進(jìn)入腹主動(dòng)脈，最后侵襲全身，嚴(yán)重威脅宮頸癌患者的身心健康。其高轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)率為宮頸癌的治療提出了新的挑戰(zhàn)。臨床常用的治療方法為化療和放療，但由于其皮膚黏膜周圍神經(jīng)損傷致患者治療后易出現(xiàn)嚴(yán)重嘔吐、乏力、抵抗力下降等不良反應(yīng)，使得此種療法的推廣受到限制。從分子角度研究宮頸癌的發(fā)展機(jī)制，其主要原因是各種相關(guān)蛋白調(diào)控異常引起原癌基因的激活和抑癌基因的失活。本研究闡述了DYRK1B的表達(dá)情況與宮頸癌的關(guān)系。

表2 宮頸癌組織中DYRK 1 B蛋白表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

DYRK1B又稱MⅠRK，是一種絲氨酸或酪氨酸蛋白激酶[9‐10]，作為DYRK家族的新成員，位于人類19號染色體上。DYRK1B一般只在腦組織或肌肉組織中高表達(dá)，在其他正常組織中呈低表達(dá)或不表達(dá)。其在穩(wěn)定蛋白質(zhì)的正常調(diào)節(jié)、維持骨骼肌的生長發(fā)育和正常細(xì)胞的增殖分化方面起著非常重要的作用。有研究報(bào)道，DYRK1B在如宮頸癌、非小細(xì)胞肺癌等腫瘤患者體內(nèi)呈高表達(dá)。下調(diào)DYRK1B能誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡，維持正常細(xì)胞的生長[11]。其機(jī)制可能是DYRK1B磷酸化阻斷細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶（cyclin‐dependent kinases，CDK）所調(diào)控的抑制因子P27的退化，使腫瘤細(xì)胞處于靜止期，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖分化。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組織中DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率為72.62%，高于CⅠN組中的22.50%和對照組的12.50%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CⅠN組和對照組中的DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與已有的報(bào)道和文獻(xiàn)結(jié)果一致[12]。此外，有研究報(bào)道，敲除DYRK1B基因不會(huì)導(dǎo)致胚胎的死亡，說明該基因不是正常細(xì)胞生長分化所必需的。換言之，敲除DYRK1B基因不會(huì)影響正常細(xì)胞，這就為宮頸癌的靶向治療提供了很好的思路。

將DYRK1B基因敲除會(huì)改變調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖分化的相關(guān)蛋白如PRAP、bcl‐2的結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)發(fā)生變化，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞增殖、分化，誘導(dǎo)其凋亡[13‐14]。本研究結(jié)果顯示，宮頸癌組中，不同臨床分期、組織浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的宮頸癌組織中DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而不同年齡、病理學(xué)類型的宮頸癌組織中DYRK1B蛋白的陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明DYRK1B蛋白表達(dá)與宮頸癌患者的臨床特征有關(guān)，與其他研究結(jié)果相一致[15]。

綜上所述，DYRK1B在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá)，臨床分期、組織浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不同，DYRK1B蛋白的表達(dá)水平不同，為宮頸癌發(fā)生發(fā)展及惡變程度提供了參考依據(jù)。本研究的創(chuàng)新之處在于從分子水平闡述宮頸癌的病理機(jī)制，探討了DYRK1B蛋白表達(dá)的影響因素及與宮頸癌的關(guān)系，為宮頸癌的診斷提供了無創(chuàng)、有效、科學(xué)的辦法，且為宮頸癌的靶向治療提供了新的研究方向。

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