葛根素含量測定方法的研究進展

潘麗麗

(貴州工業職業技術學院 化學與材料工程學院，貴州 貴陽 551400)

葛根素是從豆科植物葛根中提取的一種異黃酮類化合物，具有降血壓、抗心律失常、降低心肌耗氧量、增加腦血流量、抗血栓、降血糖、降血脂、解酒等作用[1]，且毒性很低。目前葛根素臨床上主要應用于治療冠心病、心絞痛、高血壓、糖尿病等疾病[2]。許多葛根及其制劑常選用葛根素的含量作為其質量控制指標，本文綜述了葛根素含量測定方法的研究進展。

1 高效液相色譜法

金麗等[3]采用漢邦Lichrospher C18 柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，甲醇-水(25∶75)為流動相，檢測波長250nm，測定鐵必復顆粒中葛根素含量，線性范圍為23.84～143.02 μg /mL，平均回收率為97.70%，RSD為0.66%。羅承鋒等[4]測定大鼠血漿中葛根素含量，選用Hypersil ODS C18柱( 4.6 mm×150 mm，5μm)，流動相為甲醇∶水(含50 mmol/ L醋酸銨)=23∶77，熒光檢測器激發波長250nm，發射波長480nm，葛根素在0.16～120 mg/ L范圍內線性良好，最低檢測限為10 μg/L。湯丹丹等[5]建立同時檢測小鼠血漿、腦勻漿中葛根素的HPLC-MS/MS法，以對羥基苯甲醛為葛根素內標物，采用Agilent Eclipse plus C18柱(100 mm×4.6 mm，3.5μm)，流動相是甲醇-10 mmol/L乙酸胺(含0.1%甲酸)=80∶20，流速0.6 mL/min，柱溫30 ℃；質譜條件：ESI源，霧化溫度為550℃，多反應監測測定模式，葛根素和對羥基苯甲醛采用負離子方式(選擇監測離子反應分別為m/z 415.0→295.0和m/z 120.9→91.8)，該方法分析時間短，僅為4 min。

2 超高效液相色譜法

趙振霞等[6]采用HPLC法和UPLC法兩種方法分別測定心可舒膠囊中葛根素，UPLC 法采用 Acquity T3 C18 (2.1 mm×100 mm，1.8μm) 色譜柱，流動相為乙腈- 0. 1%三氟乙酸水溶液，梯度洗脫，流速為0.5mL/min，檢測波長均為287 nm。葛根素在46.05～1160μg/mL范圍內線性良好，平均回收率為100.7%，RSD為1.4%，兩種方法測定心可舒膠囊的葛根素含量一致，但UPLC法梯度洗脫程序較HPLC法簡單，且分析時間、靈敏度等均優于HPLC 法。張晨寧等[7]建立超高效液相色譜串聯三重四級桿質譜法測定降脂活血片中葛根素，采用 Restek Uitra BiPh 色譜柱 ( 100mm×2.1mm，5μm) ，以乙腈 ( 含0.1%甲酸) -0.1%甲酸為流動相，梯度洗脫，流速0.4mL/min，柱溫 40℃，進樣量5 μL。質譜條件：ESI源，毛細管電壓3.8 kV，離子源溫度 150 ℃，噴霧氣N2，體積流量 1000 L/h，碰撞氣 Ar，體積流量0.16 mL/min，掃描方式為MRM。葛根素的線性范圍為4.285～1097ng/mL，檢測限為0.7ng/mL，平均回收率為100.2%。

3 分光光度法

梁文法等[8]點樣于硅膠G板上，用氯仿-無水乙醇(7∶3)為展開劑，在紫外燈365nm下定位葛根素，刮下斑點。以乙醇作空白，在251nm處測定吸光度，標準曲線法計算葛根中葛根素含量，線性范圍為1～5μg/mL，平均回收率為98.6%。賈貞[9]測定葛根素注射液中葛根素，在358nm波長激發熒光，在477nm波長處測定葛根素熒光強度。葛根素濃度在1. 0×10-7～1. 0×1 0-5mol /L范圍內與熒光強度具有良好線性關系，檢出限為2.02×1 0-8mol /L，與紫外吸收分光光度法結果相比，令人滿意。趙慧春等[10]將愈風寧心片乙醇提取液點于硅膠GF254薄層板，以乙酸乙酯-甲酸-水(48∶6∶6)為展開劑，于紫外燈254nm下觀察斑點位置，刮下斑點，用乙醇浸取，激發波長258.6 nm，發射波長477.0 nm，測定相對熒光強度。葛根素檢測限為0.042μg/mL，回收率在93.1%～109.2%，RSD<2%。

4 薄層色譜掃描法

程庚金生等[11]點樣于硅膠GF254板，以氯仿-甲醇-乙酸乙酯-水(3∶3∶4∶1)為展開劑，采用單波長掃描，檢測波長254 nm，狹縫寬度為6mm×0.3mm，測定消渴丸中葛根素含量，在2.0～10.0μg范圍內線性良好，平均回收率為101.1%，RSD=1.7 %。李云霞[12]將葛根乙醇提取液點于高效硅膠GF254薄層板，以氯仿-甲醇-水(3∶1∶0.05)第1次展開，再以氯仿-甲醇-水(5∶1∶0.05)第2 次展開，反射法雙波長鋸齒掃描，λs =254nm，λR=333nm。葛根素在0.36 ～3.60μg范圍內線性良好，平均回收率為98.72%。孫淑琴等[13]用甲醇超聲提取感冒清熱沖劑中葛根素，以氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水(8.1∶9.4∶26∶4)為展開劑，激發波長為320nm，單波長熒光反射法線性掃描測定，葛根素線性范圍是0.137～0. 685μg，平均加樣回收率為100.40%，RSD 為1.53%。

5 毛細管電泳法

王烜[14]采用高效毛細管電泳法測定感冒清熱顆粒中葛根素含量，毛細管規格為75 m×64.5cm，分離電壓20kV， 檢測波長254nm，柱溫25℃，采用壓力進樣20kPa，進樣時間5s。緩沖液是pH值為8.7的25mmol/L磷酸二氫鈉-25mmol/L硼砂溶液。葛根素在0.011～0.11mg/mL性關系良好，檢測限較低，為0.57μg/mL，加樣回收率99.69%。黃麗涵等[15]采用膠束電動色譜-質譜聯用法測定心腦康膠囊中的葛根素，石英毛細管(80cm×50μm)為分離通道，以30mmol/L月桂酸-90mmol /L氨水(pH值9.0)為緩沖溶液，50%異丙醇(含1mmol/L乙酸)為鞘液，鞘液流速 8μL/min。質譜條件：電噴霧電離源，采用選擇性離子監測，毛細管電壓為4.3 kV，噴霧氣壓力為34.3 kPa，干燥氣10L/min，溫度為325℃。葛根素的線性范圍為0.50 ～500mg/L，檢出限為0.050mg /L，回收率為96.5%，RSD為3.1%。

6 近紅外光譜法

石猛等[16]采集消渴丸干模丸的近紅外光譜，與HPLC檢測結果關聯進行化學計量學分析，結合偏最小二乘法建立干模丸中葛根素含量的定量校正模型：R2=0.9482，RMSECV=0.248，RPD=4.40。對驗證集樣品預測平均相對偏差為3.51%，模型預測性能良好。王寧等[17]建立一種快速測定心通口服液中葛根素含量的新方法，采用聲光可調濾光器-近紅外光譜分析技術，建立葛根素近紅外光譜與HPLC分析值之間的數學模型。建立的定量模型準確性好，葛根素的內部交叉驗證均方差是RMSEP=0.1371，R2=0. 9845。

7 酶聯免疫吸附測定法

單文超等[18]建立間接競爭酶聯免疫分析法測定葛根中葛根素的含量，線性范圍為15.6～500ng/mL，孔間差和板間差均不大于3.5%，平均回收率為 101.8%，并且該法檢測結果與HPLC法檢測結果一致。萬鳳[19]采用ELISA法測定人唾液中葛根素含量，葛根素的線性范圍為5～1280 ng/mL，r=0.9939，最低檢測限為2.47 ng/mL，平均回收率為95%～115%，與HPLC法測定結果的相關性良好。宋興興等[20]利用ELISA原理研制出一種簡便、快速評價葛根藥材質量的膠體金試紙，葛根素膠體金試紙的半定量限為34g /mL，適用于原料采購現場的快速檢測。

葛根素的測定方法很多，各具特點。高效液相色譜法是測定葛根素含量的常用方法，具有重復性好、結果準確的優點，但耗時、成本較高。液質聯用技術是一種分離分析復雜有機混合物的有效手段，靈敏度高、選擇性好，但儀器較昂貴，其應用還不夠普遍。超高效液相色譜法與傳統的HPLC相比，增加了分析的通量和靈敏度，能快速分離樣品，同時節省流動相，降低分析成本。近紅外光譜法具有分析速度快、對樣品無破壞性、無污染、操作簡便、結果精準等優點，可實現葛根素的快速分析和在線檢測。酶聯免疫吸附測定法具有特異性強，靈敏度高，儀器化程度低，經濟無污染等特點，特別適用于分析微量基質生物樣品中葛根素含量。筆者認為，隨著含葛根素藥物的指紋圖譜和質量標準研究的不斷發展，通過多種分析方法的聯用，能尋求到簡便快速、準確高效的測定方法，為葛根素的質量控制提供更可靠的依據。