阿勒泰羊肌肉組織的免疫組化分析

彭新榮，劉晨曦，瑪依拉，劉明軍

(新疆畜牧科學院生物技術研究所，新疆烏魯木齊 830000)

阿勒泰羊俗稱福海大尾羊，是新疆著名的肉脂兼用型地方品種，具有肉質細嫩、耐粗飼、抗病力強、適應高寒山區氣候等優點，目前已經遍布新疆各地。但是，隨著市場對低脂高蛋白羊肉需求的增加，阿勒泰羊屠宰率低，胴體脂肪含量高。Texel羊的原產地為荷蘭，為短毛型肉用綿羊品種，其瘦肉率和屠宰率均顯著高于阿勒泰羊。用Texel羊為父本，以阿勒泰羊為母本進行雜交改良后，獲得的雜交F1后代不僅保留了阿勒泰羊肉質細嫩的特點，而且顯著提高了屠宰率和瘦肉率，深受廣大牧民的喜愛，具有較高的經濟價值和推廣價值。筆者所在實驗室應用同期發情和人工受精技術分別獲得了相同出生月齡的阿勒泰羊、Texel羊和F1后代群體，并在其8月齡時集中進行了屠宰試驗，獲得了不同品種肉羊肌肉品質差異的表型數據和樣品組織。但是，目前還缺乏肉羊肌纖維類型的免疫學分析。依據肌纖維特有的4種肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain，MyHC)的異構體可以將肌纖維對應分為4種不同類型：Ⅰ型、ⅡA型、ⅡB型和ⅡX型。MyHC Ⅰ型為慢肌纖維，慢肌纖維含有更多的線粒體和肌球蛋白，因而外觀呈紅色，又稱紅肌纖維。MyHCⅡB型為快肌纖維，主要以糖酵解代謝為主，又稱白肌纖維。另外一類中間型ⅡX肌纖維，其特征介于快肌纖維和慢肌纖維中間。筆者對阿勒泰羊、Texel羊和F1后代不同肌肉組織的MyHC Ⅰ型氧化纖維含量進行了免疫組化分析。

1 材料與方法

1.1試驗材料8 月齡 Texel 羊、阿勒泰羊和雜交F1代肉羊肌肉組織樣品由新疆畜牧科學院生物技術研究所提供。每個品種隨機選取3只肉羊的肌肉組織標本，樣品采集部位分別為肉羊腿部的半腱肌和半膜肌。

1.2試驗方法將新鮮采集的肌肉組織塊放入4%中性多聚甲醛固定液內固定過夜，對固定好的組織塊進行修塊、清洗、酒精脫水和石蠟包埋。包埋好的肌肉組織塊沿著肌纖維紋理橫切，切片厚度5 μm。石蠟包埋和H.E.染色(蘇木精-伊紅染色)參照常規石蠟包埋步驟進行。免疫組化試驗參照福州邁新試劑盒(DAB Detection Kit，kit-0017)說明書進行，免疫組化染色完成后再用蘇木素復染肌纖維細胞核。免疫組化抗體選用肉羊慢肌纖維MyHC I抗體(Anti-Slow Skeletal Myosin Heavy chain antibody，ab11083)。應用顯微鏡對染色的肌肉樣本進行觀察，每張切片以肌束為單位，選定100根肌纖維為一個視野，測定每個視野中的MyHC I陽性肌纖維數，計算百分比。每張切片隨機選取3個視野，取平均值，即為每個樣品MyHCI陽性肌纖維百分比。

1.3數據處理應用Excel軟件進行數據整理，應用卡方分析分別比較阿勒泰羊半腱肌和半膜肌中MyHC I陽性肌纖維與Texel羊和F1代的差異顯著性。

2 結果與分析

2.1半腱肌H.E.染色結果對每個樣品的肌肉組織首先進行H.E.染色，以更好地觀察不同肉羊品種的肌肉組織學形態。其中，圖1a、b、c分別為阿勒泰羊、F1代和Texel羊H.E.染色結果。每種肉羊的肌纖維之間界限比較清楚，肌細胞核和肌衛星細胞均環繞在細胞膜周圍。與F1代和Texel羊相比，阿勒泰羊肌間組織更豐富，肌纖維界限明顯。

2.2MyHCI免疫組化染色結果進一步對阿勒泰羊、F1代和Texel羊的不同肌肉組織(半腱肌和半膜肌)進行MyHC I免疫組化染色，結果見圖2和圖3。從圖2和圖3可以看出，不同來源的肌肉組織中均含有一定比例的MyHC I陽性肌纖維，不同品種肉羊半膜肌中的MyHC I型肌纖維比半腱肌更豐富。

2.3半腱肌和半膜肌MyHCI含量比較對阿勒泰羊、F1代和Texel羊半腱肌和羊膜肌中MyHC I含量進行了比較，結果見圖4和圖5。從圖4可以看出，阿勒泰羊半腱肌中MyHC I含量為10.5%，與F1代和Texel羊均存在顯著差異(P<0.05)。從圖5可以看出，阿勒泰羊半膜肌MyHC I型肌纖維含量為26.0%，F1代半膜肌中MyHC I含量為17.3%，Texel羊MyHC I含量為11.2%，阿勒泰羊半膜肌MyHC I含量與F1代和Texel羊均存在顯著差異。

注：a.阿勒泰羊；b.F1代；c.Texel羊Note：a.Altay mutton sheep；b.F1 hybrid；c.Texel sheep圖1 不同品種肉羊半腱肌的H.E.染色結果(400×)Fig.1 H.E.staining results of semitendinosus in different varieties of mutton sheep(400×)

注：a.阿勒泰羊；b.F1代；c.Texel羊Note：a.Altay mutton sheep；b.F1 hybrid；c.Texel sheep圖2 不同品種肉羊半腱肌中MyHC I的免疫組化染色結果(100×)Fig.2 Immunohistochemistry staining results of MyHC I in semitendinosus in different varieties of mutton sheep(100×)

注：a.阿勒泰羊；b.F1代；c.Texel羊Note：a.Altay mutton sheep；b.F1 hybrid；c.Texel sheep圖3 不同品種肉羊半膜肌中MyHC I的免疫組化染色(100×)Fig.3 Immunohistochemistry staining results of MyHC I in the semi-membranous muscle in different varieties of mutton sheep(100×)

圖4 不同品種肉羊半腱肌中MyHC I含量的比較Fig.4 MyHC I content in the semitendinosus in different varieties of mutton sheep

圖5 不同品種肉羊半膜肌中MyHC I含量的比較 Fig.5 MyHC I content in the semi-membranous muscle in different varieties of mutton sheep

3 結論與討論

影響肌纖維形成的因素主要包括營養因素和年齡因素[1-3]。應用人工受精技術和統一屠宰就是為了獲得同一出生月齡的肉羊標本。另外，在飼養環境上采用統一標準的舍飼管理也避免了營養因素帶來的偏差。該研究結果表明阿勒泰羊與F1代和Texel羊不同肌肉組織中MyHCⅠ型含量均存在顯著差異。Texel肉羊瘦肉率和屠宰率均明顯高于阿勒泰羊。研究表明，MyHCⅠ型和Ⅱ型肌纖維在肌間脂肪含量上存在顯著差異，MyHCⅠ型肌間脂肪含量要高于Ⅱ型肌纖維，此外MyHCⅠ型肌纖維中三酰甘油高于Ⅱ型，磷脂比Ⅱ型纖維高30%[4]。改良后的F1代肉羊瘦肉率和屠宰率明顯高于阿勒泰羊，但仍較好地保留了阿勒泰羊肉質細嫩的特點。免疫組化結果表明，改良后的F1代雖然MyHCⅠ型氧化肌纖維含量降低，與阿勒泰羊差異顯著，但明顯高于Texel羊。肌肉的產量主要由肌纖維數目和肌纖維橫截面積決定，肌纖維體積適度的動物可生產出更多肉質好的肉產品[5]。大量研究表明，氧化型肌纖維有助于肌肉嫩度和多汁性的增加[6-8]，但是氧化型肌纖維橫截面積小，肌間脂肪含量高，不利于瘦肉率和屠宰率的產出。因此，在肉羊品種選育上調整肌纖維中氧化肌纖維含量對增加肌肉產量和提高肌肉品質具有重要的參考價值。

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