血必凈聯(lián)合鹽酸氨溴索在急性百草枯中毒所致肺損傷大鼠中的應(yīng)用

楊 昱 周 慎 羅 城 李桂云

貴陽市第二人民醫(yī)院急診科，貴州貴陽 550081

百草枯（PQ）是一種有機雜環(huán)類除草劑，其除草效能高，對環(huán)境危害較小，因而在多個國家中得到非常廣泛的應(yīng)用[1]。但PQ對人畜具有較強的毒性，日常生活中由于誤服等因素造成的PQ中毒較為常見。PQ中毒患者多死于多臟器功能衰竭或呼吸衰竭，以肺臟毒性最為突出，其病死率在60.0%～81.6%[2]。多項研究表明，PQ中毒后，機體內(nèi)部氧化應(yīng)激反應(yīng)指標與炎癥反應(yīng)水平升高，過量的氧自由基與促炎因子具有較強的致病作用，可引起細胞﹑組織等產(chǎn)生損傷[3]。血必凈具有清除氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，抗氧化性損傷以及調(diào)節(jié)炎性因子等效用；另有相關(guān)研究表明，鹽酸氨溴索能夠保護PQ中毒大鼠肺功能[4-6]。本研究探討血必凈與鹽酸氨溴索聯(lián)合使用對PQ中毒所致急性肺損傷大鼠中的應(yīng)用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選取50只健康成年的雄性SPF級SD大鼠，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，體重35～60g，日齡20～25d。實驗藥品：PQ溶液（生產(chǎn)廠家：山東三元工貿(mào)有限公司），血必凈注射液（天津紅日藥業(yè)股份有限公司，Z20040033，規(guī)格：10mL/支），鹽酸氨溴索（浙江康恩貝制藥股份有限公司，H20103773，規(guī)格：2mL ∶ 15mg）。

實驗儀器與試劑：離心機（上海精密儀器儀表有限公司，型號：TGL-16B）；超氧化物歧化酶（SOD）﹑丙二醛（MDA）以及谷胱甘肽（GSH）測定試劑盒等均由上海源葉生物科技有限公司提供。

1.2 實驗方法

選取的50只健康成年雄性SPF級SD大鼠，隨機分為五組：空白組（A組）﹑單純PQ中毒組（B組）﹑PQ中毒+血必凈治療組（C組）﹑PQ中毒+鹽酸氨溴索治療組（D組），PQ中毒+血必凈聯(lián)合鹽酸氨溴索治療組（E組），每組10只；A組大鼠僅按25mg/kg的劑量于腹腔注射生理鹽水，余下四組大鼠均于腹腔一次性注射25mg/kg，20%PQ溶液，建立大鼠急性PQ中毒模型；大鼠PQ中毒模型完成之后，B組大鼠僅于腹腔注射10mL/kg生理鹽水；C組大鼠于腹腔給予10mL/kg血必凈注射液；D組大鼠在腹腔注射10mL/kg鹽酸氨溴索注射液；E組大鼠腹腔注射10mL/kg鹽酸氨溴索注射液+10mL/kg血必凈注射液。五組均連續(xù)給藥培養(yǎng)7d，除上述給藥情況不同外，五組大鼠喂養(yǎng)環(huán)境﹑飼料等其他因素均一致。

1.3 檢測方法

取大鼠右肺，并放置于體積重量為4%多聚甲醛溶液中固定。取大鼠右肺上葉稱重記為濕重，接著將其置于烤箱中，在70℃下烘烤，至恒重后記為干重，計算肺組織濕重/干重比（W/D）值。

取大鼠腹主動脈血，3500r/min離心15min，分離血清，采用ELISA法測定大鼠白細胞介素-6（IL-6）﹑腫瘤壞死因子（TNF-α）水平；取大鼠左肺組織勻漿后，以3000r/min的速度離心10min，取上清液，檢測SOD﹑MDA以及GSH含量，SOD﹑MDA及GSH的檢測嚴格按照試劑盒規(guī)定的方法進行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS17.0對本研究所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以（±s）表示，多組計量資料比較采用F檢驗，多樣本間的兩兩比較采用SNK-q檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 五組大鼠炎性指標比較

五組大鼠中，A組大鼠IL-6﹑TNF-α水平均均明顯低于其他四組，B組IL-6﹑TNF-α水平均明顯高于其他四組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；C組﹑E組IL-6﹑TNF-α水平均低于D組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），C組IL-6﹑TNF-α水平高于E組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 五組大鼠炎性指標比較（± s ，pg/mL）

表1 五組大鼠炎性指標比較（± s ，pg/mL）

注：與A組比較aP＜0.05；與B組比較bP＜0.05

組別 IL-6 TNF-α A組 10.56±4.31 70.27±10.16 B組 591.75±5.63a 637.86±5.90a C組 126.36±4.59ab 105.91±4.38ab D組 325.81±3.76ab 190.46±6.42ab E組 102.33±4.17ab 87.76±5.12ab F 225.16 215.88 P＜0.05 ＜0.05

2.2 五組大鼠氧化應(yīng)激指標比較

五組大鼠中，A組W/D值﹑MDA水平均低于其他四組，SOD﹑GSH水平均高于其他四組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；B組W/D值﹑MDA水平均高于其他四組，SOD﹑GSH水平均低于其他四組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；E組W/D值低于C組﹑D組，SOD水平高于C組﹑D組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；D組SOD水平顯著低于C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；C組﹑D組W/D值比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；C組﹑D組﹑E組MDA水平﹑GSH水平兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

3 討論

血必凈注射液是由紅花﹑赤芍等活血化瘀藥物組成，具有改善微循環(huán)﹑增加血管血流量﹑減少血小板凝聚的作用，同時可降低患者炎性反應(yīng)時毛細血管通透性﹑減少炎性滲出﹑促進炎癥吸收[7-8]；此外，血必凈還具有清除過剩氧自由基，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，抗氧化性損傷等作用，可穩(wěn)定細胞膜結(jié)構(gòu)﹑降低內(nèi)毒素﹑保護血管內(nèi)皮細胞，減輕PQ中毒情況下的臟器功能受損[9-10]。鹽酸氨溴索具有抗氧化﹑減少肺損傷時自由基量的作用，能夠促進肺表面活性蛋白-A的合成與分泌，對減輕PQ中毒所致急性肺損傷有一定作用[11-12]。相關(guān)研究表示，鹽酸氨溴索和血必凈兩者聯(lián)合使用能夠發(fā)揮協(xié)同作用的效果，與各單獨使用比較，抗炎作用更強，更為顯著地逆轉(zhuǎn)體外循環(huán)術(shù)后的急性肺損傷，對肺功能起到明顯的保護作用[13-14]。

表2 五組大鼠氧化應(yīng)激指標比較（± s）

表2 五組大鼠氧化應(yīng)激指標比較（± s）

注：a與A組比較aP＜0.05；與B組比較bP＜0.05。

組別W/D SOD（kU/g） MDA（mmol/g） GSH（mg/g）A組 2.26±0.18 210.96±6.34 1.78±0.16 1.33±0.03 B組 6.06±0.65a 98.72±4.35a 3.11±0.50a 0.69±0.02a C組 4.32±0.62ab 184.20±5.61ab 2.02±0.22ab 1.13±0.02ab D組 3.93±0.51ab 161.73±4.38ab 2.12±0.20ab 1.11±0.04ab E組 3.45±0.43ab 192.24±4.1ab 1.96±0.18ab 1.14±0.03ab F 69.69 671.17 78.58 547.76 P＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

肺組織W/D值的變化可以反映機體肺間質(zhì)與肺泡血管通透性的改變，SOD﹑MDA和GSH是自由基損傷的觀察指標，可反映機體自由基清除能力與抗脂質(zhì)過氧化損傷的能力[15]。由本研究結(jié)果得，C組﹑E組IL-6﹑TNF-α水平均低于D組，且C組IL-6﹑TNF-α水平高于E組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；表示血必凈﹑血必凈聯(lián)合鹽酸氨溴索對重度大鼠炎性反應(yīng)及內(nèi)皮細胞的保護作用強于鹽酸氨溴索單獨給藥，且血必凈效果優(yōu)于鹽酸氨溴索。E組W/D值低于C組﹑D組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；說明血必凈與鹽酸氨溴索兩者聯(lián)合使用對血管通透性的改善效果較兩者單獨使用佳；E組SOD水平高于C組﹑D組，且D組SOD水平顯著低于C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），說明血必凈單獨或者聯(lián)合鹽酸氨溴索均能使中毒大鼠SOD活性得以提高，有利于清除機體自由基并消除過度氧化應(yīng)激造成的損傷，且血必凈應(yīng)用效果優(yōu)于鹽酸氨溴索；C組﹑D組﹑E組MDA水平﹑GSH水平兩兩比較，差異不明顯，則表示血必凈﹑鹽酸氨溴索或兩者聯(lián)合使用對改善中毒大鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的效果相近。

綜上所述，血必凈與鹽酸氨溴索聯(lián)合治療可以明顯降低PQ中毒所致急性肺損傷大鼠的應(yīng)激反應(yīng)與炎癥反應(yīng)，對PQ中毒引起的急性肺損傷大鼠具有明顯的保護作用。但目前臨床上對于兩者聯(lián)合治療PQ中毒人體的研究較為匱乏，還需繼續(xù)深入觀察研究。

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