角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人牙齦上皮細(xì)胞遷移的影響

劉延豐

（廣東省江門市口腔醫(yī)院 江門 529000）

角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子是一種特異性的高效促上皮細(xì)胞增殖的生長(zhǎng)因子，在損傷修復(fù)的過(guò)程中存在重要作用。角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子最初是從人胚胎肺成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)上清中分離并純化的，是成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族中的一員[1]。本研究旨在探討角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人牙齦上皮細(xì)胞遷移中的影響。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 材料收集和分離 選取1例下頜阻生牙拔除患者手術(shù)切除的健康牙齦組織，分為9塊重復(fù)試驗(yàn)3次。經(jīng)磷酸緩沖鹽溶液沖洗后，置于中性蛋白酶（分散酶）中，于4℃壞境下過(guò)夜；收集皮片，置入0.25%胰酶與0.02%乙二胺四乙酸（比例為1∶1）混合液中，37℃環(huán)境中放置10～15 min，經(jīng)吹打、過(guò)濾后收集單細(xì)胞懸液，并加入SKF上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中，以10×104/ml的密度接種于培養(yǎng)瓶中；細(xì)胞鋪滿80%的培養(yǎng)瓶時(shí)，采用0.25%胰酶消化后接種傳代。本研究選擇第2～3代細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) 于6孔板中接種牙齦上皮細(xì)胞，細(xì)胞鋪滿后，制備一個(gè)80 μm寬的劃痕并標(biāo)記，作為細(xì)胞遷移基點(diǎn)。用磷酸緩沖鹽溶液清洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入培養(yǎng)基，觀察組培養(yǎng)基中加入角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子15 ng/ml，對(duì)照組不添加。兩組培養(yǎng)基均置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

1.3 觀察指標(biāo) 于48 h、96 h、144 h后，每組取10個(gè)遷移距離最大的不同點(diǎn)進(jìn)行測(cè)量，以平均值作為牙齦上皮細(xì)胞遷移距離。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)處理采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果分析 原代培養(yǎng)人牙齦上皮細(xì)胞3～5 d后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞展開(kāi)后為多角形，呈典型鋪路石樣，上皮細(xì)胞的培養(yǎng)特征較為明顯。

2.2 兩組人牙齦上皮細(xì)胞遷移距離比較 觀察組在48 h、96 h、144 h后的人牙齦上皮細(xì)胞遷移距離均大于對(duì)照組，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 兩組人牙齦上皮細(xì)胞遷移距離比較（μm，x±s）

3 討論

劃痕實(shí)驗(yàn)是體外試驗(yàn)中最常用的一種檢測(cè)創(chuàng)傷愈合的模型，能夠有效模擬創(chuàng)傷愈合初期由細(xì)胞伸展、增殖、遷移覆蓋創(chuàng)面的過(guò)程[2]。因此本研究選擇劃痕實(shí)驗(yàn)觀察角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)人牙齦上皮細(xì)胞遷移中的影響。

角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有促進(jìn)小鼠角質(zhì)細(xì)胞有絲分裂的作用，因此被定名為角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子[3]。此外，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子具有肝素結(jié)合特性，經(jīng)基因測(cè)序證實(shí)為成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子家族的第七個(gè)成員，因此被稱作為FGF-7，其受體主要分布于上皮細(xì)胞。研究證實(shí)[4～5]，胚胎、新生兒及成人上皮細(xì)胞起源的成纖維細(xì)胞和來(lái)自皮膚、角膜、肺、乳腺、肝、腎、胃腸道、膀胱、卵巢、前列腺等器官的間質(zhì)細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞均可表達(dá)角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子，但單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞不表達(dá)[5]。楊云[6]研究顯示，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子可有效促進(jìn)表皮細(xì)胞遷移、增殖，利于皮膚創(chuàng)傷愈合。

本研究結(jié)果顯示，原代培養(yǎng)人牙齦上皮細(xì)胞3～5 d后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞展開(kāi)后為多角形，呈典型鋪路石樣，上皮細(xì)胞的培養(yǎng)特征較為明顯；觀察組在48 h、96 h、144 h后的人牙齦上皮細(xì)胞遷移距離均大于對(duì)照組（P＜0.05）。綜上所述，角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子可促進(jìn)人牙齦上皮細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)，但目前對(duì)于角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子促進(jìn)細(xì)胞遷移的機(jī)制尚未明確，有待進(jìn)一步研究。

[1]Katsirntaki K,Mauritz C,Olmer R,et al.Bronchoalveolar sublineage specification of pluripotent stem cells:effect of dexamethasone plus cAMP-elevating agents and keratinocyte growth factor[J].Tissue Eng Part A,2015,21(3-4):669-682

[2]白燕青,徐倩,曾通旭,等.攜帶低氧誘導(dǎo)因子-1α及角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子的減毒沙門菌TPHK的構(gòu)建及其在低氧應(yīng)激大鼠胃腸組織中的表達(dá)[J].中國(guó)生物制品學(xué)雜志,2017,30(2):137-140

[3]邱其周,程貴輝,熊偉,等.角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)吸入高體積分?jǐn)?shù)氧新生大鼠肺轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1表達(dá)的影響[J].中華實(shí)用兒科臨床雜志,2015,30(14):1080-1082

[4]宗憲磊,陸海濱,祁佐良,等.合成角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子活性短肽促進(jìn)表皮細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究[J].組織工程與重建外科雜志,2016,12(1):1-5

[5]楊婷.KGF-2體外促角膜上皮細(xì)胞和角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖及遷移作用研究[A].中國(guó)生物工程學(xué)會(huì)2014年學(xué)術(shù)年會(huì)暨全國(guó)生物技術(shù)大會(huì)論文集[C].浙江:中國(guó)生物工程學(xué)會(huì),2014

[6]楊云.角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子促進(jìn)表皮細(xì)胞遷移研究[J].衛(wèi)生職業(yè)教育,2016,34(13):98-100