黃芪、甘草和茯苓對(duì)施氏鱘熱應(yīng)激狀態(tài)下生長(zhǎng)及血液生化指標(biāo)的影響

線婷，王荻，劉紅柏

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070；（2.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)無錫漁業(yè)學(xué)院，江蘇 無錫214081）

鱘是世界上最古老的原始大中型經(jīng)濟(jì)魚類，生活在億萬年前的白堊紀(jì)時(shí)期，被稱為“活化石”。多數(shù)種類個(gè)體大，為亞冷水性魚類，喜棲息于寒帶和溫帶鹽度較低的水體中[1]。施氏鱘Acipenser schrenckii肉質(zhì)白而嫩，味道鮮美[2]，是我國(guó)黑龍江流域的大型經(jīng)濟(jì)魚類。

鱘作為一種名優(yōu)經(jīng)濟(jì)魚類，養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)飛速發(fā)展，但運(yùn)輸和高溫應(yīng)激等對(duì)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展有不利影響[3]。鱘的生存溫度最高為30℃，水溫高于28℃時(shí)生長(zhǎng)與攝食減緩甚至停止[4]。而施氏鱘的最適水溫為15～27℃[5]，高溫會(huì)抑制其非特異性免疫功能[6]，進(jìn)而大批死亡。長(zhǎng)期使用抗熱應(yīng)激藥物，會(huì)出現(xiàn)藥物殘留和對(duì)人體有害的副作用。目前，越來越多的研究致力于研發(fā)安全有效的抗熱應(yīng)激藥物。

天然中草藥含有有機(jī)酸、鞣質(zhì)、生物堿、黃酮、苷類、無機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)活性物質(zhì)，能促使機(jī)體代謝和蛋白質(zhì)的合成，改善肌肉品質(zhì)，提高免疫力和抗應(yīng)激能力[7,8]。中草藥還可促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物攝食，提高增重率，集營(yíng)養(yǎng)性與藥物性于一身，受到廣泛關(guān)注[9]。

據(jù)報(bào)道，攝食添加1%黃芪飼料的銀鯽Carassius auratus gibelio的增重率比對(duì)照組高7.36%[10]，飼料中添加適量的黃芪能顯著促進(jìn)銀鯽血清溶菌酶和超氧物歧化酶（SOD）的活性[11]。張洪玉等[12]的研究表明，甘草可有效促進(jìn)鱘的增長(zhǎng)。陳忻等[13]的研究表明，飼料中加入甘草提取物可有效提高魚體抗病能力。茯苓多糖具有調(diào)節(jié)動(dòng)物的非特異性免疫功能和抗腫瘤等多種功效[14]。由茯苓、黨參等藥用植物配伍而成的中藥復(fù)方可增強(qiáng)施氏鱘的抗熱應(yīng)激能力[3]。本試驗(yàn)通過檢測(cè)黃芪、甘草和茯苓三種中草藥對(duì)施氏鱘的生長(zhǎng)以及高溫?zé)岽碳ず笱荷笜?biāo)的變化，以探索能有效地提高施氏鱘生長(zhǎng)和抗熱應(yīng)激能力的中草藥制劑。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院鱘魚繁育技術(shù)工程中心提供的健康非免疫1＋齡施氏鱘，平均體質(zhì)量為0.09～0.10 kg。試驗(yàn)用中藥購(gòu)自哈藥集團(tuán)世一堂藥店，烘干粉碎后備用。

1.2 方法

1.2.1 中藥方劑及藥液的制備

稱取黃芪、甘草和茯苓三種中藥各100g，放入砂鍋中加水浸泡30min，第1次熬45min，將藥汁倒出，加水后再熬30min，過濾，將2次藥汁合并濃縮成100mL。1mL藥液相當(dāng)于1g方劑的水煎劑，經(jīng)高壓滅菌后存放于4℃冰箱中備用。

1.2.2 施氏鱘的飼養(yǎng)及樣品采集

在水溫22℃下，將施氏鱘在室內(nèi)0.90m×0.50m×0.45m水族箱中預(yù)飼2周。每天按魚體質(zhì)量的2.0%投喂全價(jià)基礎(chǔ)飼料。試驗(yàn)期間，每天給施氏鱘口灌黃芪、甘草和茯苓單方藥液，劑量分別為0.3g/kg、0.24g/kg和0.3g/kg體質(zhì)量，連續(xù)給藥21d。給藥結(jié)束后，取半數(shù)魚放入30℃控溫水族箱中熱刺激2 h，然后與在正常水溫22℃下飼養(yǎng)的施氏鱘一同尾靜脈采血，低溫靜置30min，4 000 r/min離心15min，收集上層血清，保存在-80℃冰箱中備用。

1.3 各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定

給藥第 7d、10d、14d、21d 時(shí)分別測(cè)定施氏鱘的體質(zhì)量，計(jì)算其增重率。

1.3.2 生化指標(biāo)的檢測(cè)

采用Beckman公司生產(chǎn)的SYNCHRONCX4 PRO全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、谷丙/谷草、堿性磷酸酶的活性和總膽紅素、甘油三脂、總膽固醇、尿素氮、肌酐、尿素氮/肌酐、尿酸的含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

各項(xiàng)酶活性數(shù)據(jù)采用SPSS軟件最小顯著差數(shù)法（LSD）進(jìn)行處理。生化指標(biāo)采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件中的單因子方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用鄧肯氏法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 施氏鱘增重率變化

由表1可知，茯苓組施氏鱘的平均末體質(zhì)量明顯高于其他各組。在7d、10d、14d、21d時(shí)，茯苓組施氏鱘的增重率最高，分別為（14.33±5.33）%、（18.33±5.28）%、（31.92±7.87）%和（38.67±9.16）%。而在7d、10d、14d時(shí)黃芪組施氏鱘的增重率最低。10d時(shí)黃芪組有所增長(zhǎng)為（8.67±6.27）%，比其他組低。14d時(shí)黃芪組略低于甘草組，而21d時(shí)對(duì)照組、黃芪組與甘草組幾乎持平。在10d時(shí)茯苓組與對(duì)照組持平，其他時(shí)間均高于其他各組。各中藥單方組施氏鱘平均末體質(zhì)量均高于對(duì)照組。

2.2 血清中4種酶活性的變化

對(duì)照組及試驗(yàn)組施氏鱘血清中堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性及谷丙谷草比值見表2。由表2可知，施氏鱘血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性甘草常溫組最高[（133.25±64.36）IU/L]，對(duì)照高溫組最低[（68.25±29.33）IU/L]，甘草常溫組和高溫組施氏鱘均顯著高于對(duì)照高溫組（P＜0.05），茯苓常溫組也顯著高于對(duì)照高溫組（P＜0.05）。谷草轉(zhuǎn)氨酶活性對(duì)照高溫組最大[（1 176.67±245.42）IU/L]，黃芪常溫組最小[（697.50±81.39）IU/L]，對(duì)照高溫組顯著高于對(duì)照常溫組（P＜0.05），黃芪高溫組與常溫組均顯著低于對(duì)照高溫組（P＜0.05）。施氏鱘血清中谷丙谷草比值對(duì)照常溫組最低[（6.91±3.04）IU/L]，對(duì)照高溫組最高[（15.79±10.67）IU/L]，對(duì)照高溫組顯著高于對(duì)照常溫組（P＜0.05），黃芪常溫組與高溫組均顯著低于對(duì)照高溫組（P＜0.05），茯苓常溫組顯著低于對(duì)照高溫組（P＜0.05）。施氏鱘血清中堿性磷酸酶活性甘草高溫組最高[（234.25±51.47）IU/L]，黃芪高溫組最低[（123.75±28.36）IU/L]，甘草高溫組顯著高于對(duì)照常溫組和黃芪高溫、常溫組（P＜0.05）、茯苓高溫組顯著高于對(duì)照常溫組（P＜0.05）和黃芪高溫、常溫組。施氏鱘血清中乳酸脫氫酶活性甘草高溫組最高[（2 355.00±629.33）IU/L]，黃芪常溫組最低[（1225.00±133.79）IU/L]，其中黃芪常溫組、黃芪高溫組均顯著低于對(duì)照高溫組（P＜0.05），甘草常溫組與高溫組均顯著高于黃芪常溫組、黃芪高溫組（P＜0.05），茯苓高溫組顯著高于黃芪常溫組（P＜0.05）。

2.3 血清中各種活性物質(zhì)含量的變化

對(duì)照組及試驗(yàn)組施氏鱘血清中總膽紅素、甘油三脂、總膽固醇、尿素氮、肌酐尿酸含量及尿素氮與肌酐含量比值見表3。由表3可知，鱘血清中總膽紅素值黃芪常溫組最高，對(duì)照常溫組最低。甘油三酯含量對(duì)照常溫組最高，茯苓高溫組最低。總膽固醇黃芪高溫組最高，黃芪常溫組最低。施氏鱘血清中尿素氮含量茯苓高溫組最高，黃芪常溫組最低，茯苓高溫組顯著高于黃芪常溫組（P＜0.05）。施氏鱘血清中肌酐含量茯苓高溫組最高，黃芪常溫組最低。施氏鱘血清中尿酸含量黃芪常溫組最高，對(duì)照常溫組最低，黃芪常溫組顯著高于其他各組（P＜0.05）。施氏鱘血清中尿素氮與肌酐比值黃芪常溫組最大，對(duì)照常溫組最小。

表1 灌服中草藥后不同時(shí)間施氏鱘的增重Tab.1 Weight gain in Amur sturgeon administrated orally by the Chinese herb medicines at different time

表2 灌服中草藥21d對(duì)施氏鱘血清中堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性及谷丙谷草比值的影響Tab.2 The activities of alkaline phosphatase,lactate dehydrogenase,glutamic-pyruvic transaminase（GPT）and glutamicoxalacetic transaminase （GOT）and GPT/GOT ratio in the serum of Amur sturgeon administrated orally by Chinese herbal medicines for 21 days

表3 灌服中草藥后施氏鱘血清中總膽紅素、甘油三脂、總膽固醇、尿素氮、肌酐含量及尿素氮與肌酐含量比值Tab.3 Contents of total bilirubin,triglyceride,total cholesterol,urea nitrogen and creatinine and ratio of urea nitrogen to creatinine content in serum of Amur sturgeon administrated orally by Chinese herbal medicines

3 討論

3.1 中藥方劑對(duì)施氏鱘生長(zhǎng)的影響

中草藥制劑不僅能提高水產(chǎn)動(dòng)物的抵抗力，防治疾病，還能促進(jìn)魚類生長(zhǎng)，兼具藥用和營(yíng)養(yǎng)雙重作用[15]。茯苓對(duì)施氏鱘的增重效果很好，甘草略次之。黃芪促進(jìn)施氏鱘增長(zhǎng)的作用不及茯苓可能是適口性差，但在14d后增長(zhǎng)也開始逐漸增加。黃芪、甘草、茯苓組施氏鱘的終末體質(zhì)量與對(duì)照組相比均有提高，表明三種中藥單方均可促進(jìn)施氏鱘生長(zhǎng)。

3.2 中藥方劑對(duì)施氏鱘血清中酶活性的影響

血清中酶活性的變化可以反映機(jī)體代謝和物質(zhì)轉(zhuǎn)化的狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞遭受破壞或酶合成量增加時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶進(jìn)入血液中，使血清中酶的活性顯著升高[16]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，受到甘草催化的施氏鱘血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于對(duì)照高溫組；黃芪作用下谷草轉(zhuǎn)氨酶顯著低于對(duì)照高溫組。魚類主要通過聯(lián)合脫氨基作用滿足機(jī)體需要，谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶為氨基酸代謝中的關(guān)鍵酶，其活力體現(xiàn)了氨基酸代謝程度[17]，在蛋白質(zhì)代謝中起重要作用。他們的活性變化也可以反映肝細(xì)胞受損傷的程度。正常情況下，血清中轉(zhuǎn)氨酶活性較小,當(dāng)組織發(fā)生病變或者受到損傷，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶濃度顯著提高。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，甘草常溫高溫組和茯苓常溫組施氏鱘谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性顯著高于對(duì)照高溫組。在高溫刺激后，高溫對(duì)照組施氏鱘血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶顯著升高，而黃芪常溫組低于對(duì)照常溫組，高溫組顯著低于對(duì)照高溫組。甘草茯苓常溫組施氏鱘血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性高于對(duì)照常溫組，而經(jīng)過熱刺激后，數(shù)值仍在升高。這表明黃芪對(duì)肝臟有一定保護(hù)作用。而甘草和茯苓給肝臟的代謝造成一定的負(fù)擔(dān)。堿性磷酸酶是一種直接參與生物體代謝過程的磷酸單酯水解酶。它調(diào)控生物體的鈣磷比例，參與骨化和蛋白質(zhì)的合成和分泌途徑，在骨骼形成和脂類代謝中起到重要作用[18]。黃芪作用的堿性磷酸酶在經(jīng)過熱刺激后有所降低，而甘草和茯苓組則顯著高于對(duì)照組，說明甘草和茯苓可以有效促進(jìn)施氏鱘機(jī)體代謝，高溫?zé)岽碳ず鬅o明顯變化[19]。乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶，大量存在于腎臟中[20]。黃芪催化的血清中乳酸脫氫酶雖然受到熱刺激后有所升高，但顯著低于對(duì)照組，說明黃芪有保護(hù)腎臟的作用。

3.3 中藥方劑對(duì)施氏鱘血清中活性物質(zhì)含量的影響

膽紅素主要由衰老的紅細(xì)胞在肝、脾和骨髓等網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)內(nèi)破壞降解生成，通過肝腸循環(huán)排出體外。血液中總膽紅素含量的變化可指示肝的受損情況[21]。血液中尿素、尿酸和肌酐含量均可用于指示腎臟功能的受損情況[22]。血清內(nèi)尿酸濃度可在一定程度上反映藥物對(duì)動(dòng)物心血管等的影響[20]。本試驗(yàn)中，高溫刺激下，各組總膽紅素含量與對(duì)照組相比均有所下降但不顯著；尿素氮與肌酐比值呈下降趨勢(shì)，但不顯著；血清中總膽固醇和甘油三酯含量變化不明顯，說明甘草和茯苓對(duì)于肝臟和腎臟無明顯的保護(hù)效果。黃芪可有效保護(hù)魚體心血管，高溫刺激下無顯著變化。

3.4 小結(jié)

三種中藥單方均可促進(jìn)施氏鱘的生長(zhǎng)。甘草和茯苓可促進(jìn)施氏鱘機(jī)體代謝，高溫刺激下穩(wěn)定性良好，但可能給肝臟代謝造成一定負(fù)擔(dān)，用藥劑量還有待研究。黃芪能促進(jìn)魚體對(duì)熱應(yīng)激迅速做出反應(yīng)，保護(hù)肝腎免受損傷，有效保護(hù)魚體心血管，高溫刺激下無顯著變化。

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