重組豬表皮生長因子對仔豬糖皮質(zhì)激素水平的影響

(深圳市寶安區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東 深圳 518101)

0 引言

為提高母豬的繁殖力和母豬的利用率，減少母豬傳染疾病給仔豬，仔豬早期斷奶技術(shù)（21～27d）現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用。但斷奶仔豬受到營養(yǎng)、環(huán)境、心理、豬群結(jié)構(gòu)等方面的應(yīng)激，造成早期斷奶仔豬營養(yǎng)供給急劇降低，不僅影響到短期內(nèi)日增重，而且會影響到斷奶后2W的日增重，甚至平均推遲出欄達(dá)8d，給養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟(jì)效益帶來重大影響[1]。因此，如何減少早期斷奶仔豬心理應(yīng)激，促進(jìn)仔豬的生長，成為早期斷奶仔豬護(hù)理上的一個重大問題。

EGF在促進(jìn)腸道粘膜上皮細(xì)胞的增殖和分化，減輕多種因素對胃腸道結(jié)構(gòu)的損害，維持胃腸道結(jié)構(gòu)和功能的完整等方面，均表現(xiàn)出良好的效果{2-3]。同時EGF可降低早期斷奶仔豬的血漿中皮質(zhì)醇的含量，促進(jìn)GH含量和IGF-I含量的分泌和合成，這些均有利于仔豬的生長。

由早期斷奶導(dǎo)致的應(yīng)激會使仔豬的內(nèi)分泌和免疫功能發(fā)生劇烈變化，對仔豬的生長極為不利。當(dāng)皮質(zhì)醇濃度升高時，表明機(jī)體受到的應(yīng)激較大。過多的皮質(zhì)醇可能會抑制生長激素和甲狀腺素等的分泌，使斷奶仔豬基礎(chǔ)代謝降低，生長受阻。

胰島素樣生長因子（IGF）是生長激素（GH）誘導(dǎo)靶細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有促生長作用的肽類物質(zhì)，IGF家族由IGF-I和IGF-II 2個單鏈多肽類生長因子組成。IGF-I主要對出生后的動物生長發(fā)育有十分重要的作用。

生長激素（GH）是一種調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝的重要激素，它主要作用是促進(jìn)肝臟釋放葡萄糖，促進(jìn)脂肪分解和氧化，促進(jìn)蛋白質(zhì)和核酸的合成，通過多種生理過程促進(jìn)組織對循環(huán)系統(tǒng)中氨基酸的攝取和利用，使較多的養(yǎng)分用于組織中蛋白質(zhì)的合成，減少脂肪合成，刺激顱骨、下頜骨增大及軟骨肥大、骨骺軟骨增生，刺激泌乳。生產(chǎn)實踐中，GH對動物體的影響主要表現(xiàn)為能提高生長速度，促進(jìn)肌肉生長，降低脂肪含量。

1 材料與方法

1.1 實驗動物的選擇及分組

表1 媽咪妙基礎(chǔ)日糧營養(yǎng)配方

媽咪妙試驗分組處理情況：

A:EGF活菌+上清液

B:EGF滅菌+上清液

C:M17培養(yǎng)液

其中活菌數(shù)為30億/ml,上清液含游離的EGF4ug/ml。

添加量為全價日糧的1%。

1.2 試驗日糧與飼養(yǎng)管理

按照豬場常規(guī)飼養(yǎng)，各欄自由釆食，少量多餐，充足飲水，每日進(jìn)餐2次，給藥是在進(jìn)餐前，仔豬饑餓狀態(tài)下，第1周給予實驗計60ml，第2周改為80ml，每天收集撒料，回收余料。按照本場免疫程序規(guī)定操作。

1.3 記錄及測定指標(biāo)

1.3.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)

記錄試驗過程仔豬的釆食量、試驗初始重、試驗終末重、釆食量（每日釆食量及總釆食量）、增重（總增重及平均日增重）、料肉比。

釆食量：投料量-剩余飼料量;日釆食量：（投料量-剩余飼料量）/試驗天數(shù)。

總增重：試驗初始重-試驗終末重；日增重：（試驗初始重-試驗終末重）/試驗天數(shù)。

料重比：日釆食量/日增重。

1.3.2 腹瀉率及病死率（記錄糞便顏色及狀態(tài)）

腹瀉率%=(腹瀉總頭次/總頭次)×100

（總頭次：試驗天數(shù)×試驗豬總頭數(shù)；腹瀉總頭次：試驗期間每組每日腹瀉頭次總和）

1.3.3 觀察豬只皮毛、糞便外觀

試驗前和試驗結(jié)束時分別對豬的外觀評分：皮毛指數(shù)=皮膚紅潤程度+毛色亮度+毛順程度（表2）。

1.4 血液的采集

在仔豬14日齡時，各組仔豬中隨機(jī)選取5頭，苯巴比妥鈉40% 生理鹽溶液耳緣靜脈注射麻醉，宰殺，采集血液5ml，肝素抗凝，2000r/min離心10min分離血漿，保存于-20℃待測。

1.5 血漿中糖皮質(zhì)激素水平的測定方法

表2 仔豬皮毛指數(shù)

采用放射免疫分析法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的步驟進(jìn)行測定（試劑盒購自研域（上海）化學(xué)試劑有限公司），其中批內(nèi)變異系數(shù)＜7.5%，批間變異系數(shù)＜9.5%。

1.6 血漿中IGF-I水平的測定方法

采用放射免疫分析法，嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的步驟進(jìn)行測定（天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司），其中批內(nèi)變異系數(shù)＜5.8%，批間變異系數(shù)＜9.3%。

1.7 血漿中生長激素水平的測定方法

原理：[125I]標(biāo)記抗原（*Ag）與未標(biāo)記抗原（Ag）競爭限量抗體（Ab）上的結(jié)合位點。Ag濃度和*Ag-Ab復(fù)合物呈負(fù)相關(guān)的函數(shù)關(guān)系，并表現(xiàn)在劑量反應(yīng)曲線上，以該曲線為依據(jù)即可對樣品進(jìn)行定量。分離劑用于游離相和結(jié)合相的分離。

采用液相平衡競爭放射免疫分析法（RIA），嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的步驟進(jìn)行測定。

1.8 數(shù)據(jù)處理于統(tǒng)計分析

采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，采用t檢驗方法，試驗結(jié)果數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示.

2 結(jié)果

2.1 試驗仔豬糞便情況的結(jié)果

試驗仔豬糞便情況（表3）是根據(jù)表2仔豬皮毛指數(shù)統(tǒng)計的結(jié)果。

2.2 試驗仔豬血漿中糖皮質(zhì)激素水平結(jié)果

注：經(jīng)方差分析，臨界值F0.05(2,15)=3.68,F0.01（2,15）=6.36，因為各組間的F值為10.64大于F0.01(2，15)，P小于0.01，

表3 3組各4欄仔豬糞便計分情況（14d）

表4 試驗仔豬料重比的結(jié)果

2.3 試驗仔豬血漿生長激素和胰島素水平結(jié)果

3 討論與分析

3.1 重組豬表皮生長因子對仔豬糖皮質(zhì)激素水平的影響

由早期斷奶導(dǎo)致的應(yīng)激會使仔豬的內(nèi)分泌和免疫功能發(fā)生劇烈變化，對仔豬的生長極為不利。糖皮質(zhì)激素是由腎上腺皮質(zhì)束狀帶分泌，對糖代謝、蛋白質(zhì)代謝有重要影響。當(dāng)糖皮質(zhì)質(zhì)醇濃度升高時，表明機(jī)體受到的應(yīng)激較大，仔豬受到斷奶應(yīng)激。過多的糖皮質(zhì)激素可能會抑制生長激素和甲狀腺素等的分泌，使斷奶仔豬基礎(chǔ)代謝降低，生長受阻。急性短期高溫和持續(xù)日變高溫，使豬血漿糖皮質(zhì)激素濃度升高。而對早期斷奶仔豬血漿中糖皮質(zhì)皮含量的研究鮮有報道。21日齡斷奶仔豬血漿中糖皮質(zhì)含量在斷奶后1周左右均處于較高水平，直到第2周仔豬的血漿皮質(zhì)醇含量仍顯著高于斷奶前。本試驗中，A組（EGF-LL活菌）仔豬血漿在抽樣中發(fā)現(xiàn)明顯低于B組（EGF-LL滅活）和C組（空白對照），方差分析顯示各組間差異極顯著。過多的糖皮質(zhì)激素可能抑制了生長激素、甲狀腺素等的合成與分泌，使斷奶仔豬基礎(chǔ)代謝降低，生長受阻。導(dǎo)致仔豬生長性能不良，消化吸收功能受到應(yīng)急的影響，日糧營養(yǎng)沒有充分吸收，腹瀉率偏高，仔豬腸道受到刺激影響生長期。A組與C組和B組與C組數(shù)據(jù)對比表明重組組表皮生長因子對斷奶仔豬血漿中國糖皮質(zhì)激素水平起到了影響。A組與C組對比表明使用EGF-LL活菌與使用失活菌對糖皮質(zhì)激素的影響明顯，其中使用EGF-LL活菌可使斷奶仔豬血漿中糖皮質(zhì)激素水平降低，大大減小了仔豬的斷奶應(yīng)激。B組與C組仔豬的生長狀況數(shù)據(jù)比A組相差很多，其中A組仔豬生長性能數(shù)據(jù)有利于仔豬的生長發(fā)育，斷奶應(yīng)激少，仔豬消化吸收良好，降低養(yǎng)殖成本到達(dá)良好效益。進(jìn)而表明A組通過EHG-LL（活菌）這種途徑在一定程度上能減少斷奶仔豬血漿中糖皮質(zhì)激素水平，降低了斷奶仔豬的應(yīng)急，達(dá)到增長養(yǎng)殖效益目的。

表6 試驗仔豬血漿中GH和IGF水平結(jié)果

3.2 重組豬表皮生長因子對血漿中IGF和GH水平的影響

胰島素樣生長因子（IGF）是生長激素（GH）誘導(dǎo)靶細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有促生長作用的肽類物質(zhì)。IGF-I主要對出生后的動物生長發(fā)育有十分重要的作用。

生長激素是由腦垂體前葉嗜酸性細(xì)胞分泌的一種單一肽鏈的蛋白質(zhì)激素。它主要作用是促進(jìn)肝臟釋放葡萄糖，促進(jìn)脂肪分解和氧化，促進(jìn)蛋白質(zhì)和核酸的合成，通過多種生理過程促進(jìn)組織對循環(huán)系統(tǒng)中氨基酸的攝取和利用，使較多的養(yǎng)分用于組織中蛋白質(zhì)的合成，減少脂肪合成，刺激顱骨、下頜骨增大及軟骨肥大、骨骺軟骨增生，刺激泌乳。生產(chǎn)實踐中，GH對動物體的影響主要表現(xiàn)為能提高生長速度，促進(jìn)肌肉生長，降低脂肪含量。

本試驗結(jié)果表明A組（EGF-LL活菌）仔豬血漿中GH和IGF的含量明顯高于其他2組，進(jìn)一步證明在A組仔豬血漿中糖皮質(zhì)激素含量明顯低于其他2組，收到糖皮質(zhì)含量激素的影響，A組仔豬的生長狀況最為良好，仔豬受斷奶應(yīng)激少，消化吸收功能良好，仔豬可有效利用日糧養(yǎng)分，料重比在所有試驗組中為最?。?.26）。

4 小結(jié)

綜上所述，本試驗結(jié)果表明重組豬表皮生長因子對早期斷奶仔豬血漿中糖皮質(zhì)醇水平、IGF水平和GH激素水平有影響。其中血漿中糖皮質(zhì)醇水平降低，而IGF水平和GH激素水平均有所上升，促進(jìn)了斷奶仔豬的生長。

[1]李巨浪.提高早期斷奶仔豬生產(chǎn)性能的生物技術(shù)研究[R].加拿大哥爾夫大學(xué)，2012.

[2]范志勇,王康寧,周定剛.EGF、Gln和pGRF基因質(zhì)粒對早期斷奶仔豬腸道發(fā)育的影響[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2006 ,37(5):457-463.

[3]Becker BA,Ni enaber JA,Christ enson RK.1985. Peripheral concent rat ions of cortisol as an indicator of stress in the pig [J].Am .J.Vet.Res.46 (5):1034- 1038.