固相萃取—平行濃縮法測定食品中合成著色劑的研究

李素媛 喻璽 劉恒

摘要 本試驗利用PWAX混合型弱陰離子交換柱吸附食品中的合成著色劑，采用氨化甲醇溶液洗脫，結合平行濃縮儀，測定食品中的合成著色劑。與《食品中合成著色劑的測定》（GB/T 5009.35—2016）相比，該測定方法濃縮時間短、回收率高、重復性好、穩定性好，適用于大批量樣品的同時檢測。

關鍵詞 固相萃取；弱陰離子交換柱；平行濃縮儀；食品；合成色素

中圖分類號 O657.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）03-0252-02

Abstract The cleanert PWAX was used to absorb the synthetic colorants in food in this study.The mixture was eluted with ammonium methanol，and the synthetic colorants in food were determined combined with parallel concentrator.Compared with "Determination of synthetic colorants in foods" （GB/T 5009.35—2016），this determination method was suitable for its short concentration time，high recovery rate，excellent stability and reproducib-ility，for simultaneous testing of large quantiti es of samples.

Key words solid phase extraction；cleanert PWAX；parallel concentrator；food；synthetic colorant

為滿足消費者對食品的感官需求，食品著色劑在食品加工工藝中有著廣泛的應用，食品安全國家標準對允許添加的合成著色劑種類及限量有明確的規定。目前，已有多種食品中色素的檢測方法標準，《食品中合成著色劑的測定》（GB/T 5009.35—2016）中采用聚酰胺粉吸附食品中的合成著色劑，并用乙醇胺溶液進行洗脫。聚酰胺對合成色素的吸附能力受溫度的影響，試驗時需要對樣品和淋洗液進行加熱處理，而加入聚酰胺粉的樣品抽濾及乙醇胺濃縮所需時間均較長，不適合于大批量樣品同時處理。《食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）中采用層析紙色譜法檢測食品中的色素，樣品前處理較復雜，而且結果的準確性和穩定性均較差，《食品中誘惑紅、酸性紅、亮藍、日落黃的含量檢測》（SN/T 1743—2006）中也是采用聚酰胺吸附法提取，同樣不適合于大批量樣品的處理。

常見的合成著色劑大多具有苯磺本鈉結構，選用PWAX混合弱陰離子交換柱可以吸附食品中合成著色劑，再利用氨化甲醇溶液洗脫，用平行濃縮儀濃縮，可大大縮短樣品前處理時間，適用于大批量樣品的同時檢測。該方法可以同時檢測檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅8種合成色素[1-2]。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

試驗試劑包括0.02 mol/L乙酸銨溶液（稱取乙酸銨1.54 g，加水至1 000 mL，經0.45 μm微孔濾膜過濾）、甲醇-甲酸溶液（量取甲醇60 mL、甲酸40 mL，混勻）、檸檬酸溶液（稱取檸檬酸20 g，加水至100 mL溶解，混勻）、pH=6.0的水（水加檸檬酸溶液調節pH值為6.0）、pH=4.0的水（水加檸檬酸溶液，調節pH值為4.0）、2%氨化甲醇溶液（量取甲醇980 mL、氨水溶液20 mL，混勻）、92 g/L亞鐵氰化鉀溶液（稱取亞鐵氰化鉀106 g，加入適量水溶解，用水定容至1 000 mL）、183 g/L乙酸鋅溶液（稱取乙酸鋅220 g溶于少量水中，加入冰乙酸30 mL，用水定容至1 000 mL）。所用試劑均為色譜純或優級純。

儀器包括SPE小柱（Cleanert PWAX混合型弱陰離子交換柱，150 mg/6 mL）、正壓固相萃取儀（JPPM-0160-3.0）、自動平行濃縮儀（BUCHI multivapor P-12）。

1.2 試樣提取

1.2.1 碳酸飲料、果汁飲料、果汁、果酒、配制酒類。稱取樣品10 g于100 mL燒杯中，加熱去除二氧化碳或乙醇。

1.2.2 肉制品、油脂、巧克力、含油調味料、油炸食品等高油脂試樣。稱取已均質樣品10 g于50 mL離心管中，加入20 mL石油醚，渦旋2 min，離心，棄去石油醚層，殘渣吹干，加入5 mL 1%氨水溶液提取，重復提取至提取液為無色。合并上清液置于100 ℃水浴中濃縮至2 mL左右，水洗轉移至10 mL比色管中，用水定容。若試樣pH值偏高，用檸檬酸水溶液調節pH值至6左右[3-4]。

1.3 試液萃取凈化

依次用6 mL甲醇、6 mL水活化SPE小柱。加入試樣溶液10 mL，再依次用6 mL水（pH=4）、用6 mL甲醇-甲酸溶液、6 mL水（pH=6）淋洗。通入氮氣吹干小柱2 min，6 mL 2%氨化甲醇溶液洗脫，收集洗脫液于平行濃縮儀小管中，濃縮至近干，用1 mL水定容，過0.45 μm水相過濾膜，待測。需注意的是若提取液呈堿性，在過柱前要將其pH值調至6左右，保證小柱對合成色素有更好的吸附；SPE小柱在凈化洗脫過程中應控制流速在1 mL/min左右[5-6]。

1.4 試驗條件

利用C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流速為1.0 mL/min，進樣量為10 μL，波長為254 nm，溫度為35 ℃，采用流動相梯度淋洗，具體過程見表1。

2 結果與分析

色素標準液濃度與峰面積的關系如表2所示，檸檬黃、新紅、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍、酸性紅、赤蘚紅標準液濃度與峰面積的相關系數分別為0.999 7、0.999 4、0.999 5、1.000 0、1.000 0、0.999 9、0.998 9、1.000 0、0.999 9，具有良好的線性關系。色素標準溶液及果汁樣品色譜圖如圖1～2所示，果汁中色素加標回收率為89.5%～98.5%（表3）。

《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》（GB 5009.35—2016）中赤蘚紅采用的是液-液萃取的方法，而赤蘚紅為苯甲酸鈉結構，在SPE小柱上保留較弱，在淋洗階段將淋洗液改為6 mL水（pH=6）、6 mL甲醇，其他條件不變，采用PWAX混合型弱陰離子交換柱（150 mg/6 mL）可用于赤蘚紅的檢測。赤蘚紅標準溶液以及火腿腸樣品色譜圖如圖3～4所示，火腿腸加標回收率為90.5%～91.3%（表4）。

3 結論

試驗結果表明，采用PWAX混合型弱陰離子交換柱（150 mg/6 mL）固相萃取，結合平行濃縮儀，可以同時、快速、準確地檢測食品中8種合成著色劑。在淋洗階段改進后，還可以同時檢測食品中赤蘚紅的含量，該方法適用于大批量檢測食品中的合成著色劑。

4 參考文獻

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