鵝金黃色葡萄球菌感染診斷與治療

陳永霞 徐志偉 吳益備 經圣勇 郭 蘋*

（1.句容市動物疫病預防控制中心，江蘇句容 212400；2.江蘇丘陵地區鎮江農業科學研究所，江蘇句容 212400；3.句容市郭莊畜牧獸醫站，江蘇句容 212431）

2017年4月，句容市郭莊鎮李福祥鵝場購進雛鵝2500只，上午9點運進育雛舍，下午5點發現死亡36只，原以為是運輸不當，在飲水中加入青霉素、葡萄糖，任其自由飲水，第2d又死亡一百多只，又在飼料中加入諾氟沙星，雛鵝病狀未見好轉，到第3d早上，已出現癥狀雛鵝538只，發病率達到21.52%，臨床癥狀表現為精神沉郁，羽毛粗亂無光，伏地不愿走動，關節腫大，腳掌發燙，手輕觸摸皮膚有時會破皮。翅下有斑點出血，拉稀，眼瞼腫脹，眼半閉呈嗜睡狀態，有大量膿性分泌物玷污眼周，有些鵝鼻流黏液，頭頸高舉伸出，嘴張開，多數發病后1～3d死亡，為了確診本病，經剖檢及細菌形態觀察、培養特性、生化及致病性鑒定等試驗，確定為金黃色葡萄球菌感染所致。

1 材料

1.1 病鵝

病理解剖病死鵝10只，瀕死鵝5只，分三個批次，A批4只，B批4只，C批7只。

1.2 培養基及試劑

麥康凱培養基、巧克力培養基、LB固體培養基、LB液體培養基（Takala）、氯化鈉、三氯甲烷、3%過氧化氫、藥敏紙片、氧化酶試劑、細菌微量生化發酵管、生理鹽水。

2 診斷方法

2.1 臨床診斷

2.1.1 病理解剖

對病死鵝、瀕死鵝進行解剖，檢查病鵝全身器官狀態找到病變部位觀察病變情況。

2.1.2 病原分離和培養

（1）細菌的初代分離

病料采集與培養[1]

①無菌環境下取病死鵝心血、肝臟、脾臟、腦；

②分別接種于麥康凱培養基37℃恒溫培養24h、巧克力培養基37℃恒溫培養24h、巧克力培養基37℃燭缸培養24h，觀察菌落形態；

③將不同形態的菌落在LB培養基上劃線接種，37℃培養24h，觀察細菌的培養特性。

（2）細菌鑒別制備血清[2]

①分別取8只未發病鵝，20只發病鵝的血樣，翅靜脈采血，每只采血樣2 ～3ml；

②37℃溫育1h，然后再自然放置4℃冰箱里過夜；

③析出血清后，將血清移到1ml小塑料離心管中，每管裝量不超過300μl，加一滴氯仿作防腐劑，緊蓋瓶塞，封口，編號并貼好標簽，4℃低溫保存。

平板凝集試驗[3]

①用無菌接種環取一環血清，置干凈載玻片一端，另一端取生理鹽水一環做對照；

②用無菌接種環釣取被檢細菌少許混勻于血清中，將接種環滅菌后冷卻，釣取被檢菌少許混勻于生理鹽水，經10～30s后觀察是否出現肉眼可見的凝集塊；

③按同樣的方法依次檢測各血清與不同形態疑似菌是否出現凝集反應，記錄陽性率，確定陽性菌。

2.2 實驗室診斷

2.2.1 生化試驗[4]

①將LB培養基上的純化菌落接種并穿刺明膠培養基，37℃培育24h，靜置冰箱30min，觀察其是否被細菌液化；

②挑取分離純化細菌接種乳糖、葡萄糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖微量發酵管中，置37℃溫箱培育24h觀察結果。

2.2.2 血漿凝固酶試驗[5]

無菌情況下，取肉湯培養物0.3ml和0.5ml兔血漿在試管中充分融合，置37℃培育，定期觀察是否生成凝塊，至少觀察6h，以內容物完全凝固，使試管傾斜或倒置時不流動者為陽性。

3 結果與分析

3.1 病理變化

A批鵝，肝臟暗紅，有出血點，表面覆蓋有黃白色的纖維素性滲出物，心包膜增厚、心臟外包黃色纖維素性滲出物，見圖1-a。B批鵝，腹腔有難聞的腐敗氣味，肝臟腫大，呈紫紅色，腹腔積有少量膠凍狀黃色滲出物，2只鵝氣管內黏液增多，見圖1-b、圖1-f。C批鵝，心包膜增厚，肝臟腫大、瘀血、暗紅色，有大量出血點，1只鵝氣囊膜混濁變厚，肺充血，有少量氣泡，見圖1-c、圖1-e。鏡檢肺部病灶，見圖1-d。

3.2 細菌鑒定

3.2.1 初代培養特性

A批鵝，麥康凱培養基不生長，巧克力培養基生長出光滑、圓形、邊緣整齊、針尖大小的暗灰色菌落，見圖2-a。B批鵝，麥康凱培養基不生長，巧克力培養基生長出三種菌落，且三種菌落均在腸道組織接種部位：XJY42呈圓形、凸起、表面光滑、濕潤、微帶淺黃色（菌3），XJY43呈圓形、光滑、濕潤、針尖大小菌落，有溶血現象（菌4），見圖2-b。C批鵝，麥康凱培養基不生長，巧克力培養基生長出光滑、圓形、邊緣整齊、針尖大小的灰白色菌落，見圖2-c。

圖1 病死鵝病理變化

圖2 菌落形態

3.2.2 凝集試驗

確定XJY42為陽性菌株。

3.3 生化試驗

XJY42能發酵葡萄糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、甘露醇，產酸不產氣[6]；血漿凝固酶試驗、過氧化氫酶試驗均陽性；可液化明膠（表1）。

表1 XJY42生化特性

3.4 藥物敏感試驗

3.4.1 藥敏試驗方法

對分離菌株進行藥敏試驗，采用紙片法：

①取一接種環被檢菌液，均勻涂在LB培養基上；

②稍干后用無菌鑷子貼上藥敏紙片，各紙片中心相距至少24mm，并用鑷子輕壓紙片使之緊貼瓊脂表面；

③37℃培育24h后測量抑菌圈直徑，根據抑菌圈直徑大小判定細菌對藥物的敏感性。

抗菌效果判定：

青霉素G對葡萄球菌的抑菌圈直徑≥29mm為敏感，≤28mm為不敏感；其他藥物抑菌圈直徑〉20mm為高敏，15～20mm為中敏，〈15mm為不敏感[7]。

3.4.2 實驗結果

XJY42對慶大霉素、阿莫西林、呋喃妥因、頭孢菌素VI、頭孢噻肟、奧復星、萬古霉素、氨芐西林高度敏感（表2）。

表2 不同抗生素對XJY42菌株藥敏試驗結果

經病理變化分析、細菌鑒定、生化試驗等方法，鑒定為金黃色葡萄球菌感染。藥敏試驗結果表明，XJY42株對阿莫西林、頭孢菌素VI、氨芐西林等高度敏感。

4 治療與預防

4.1 治療方法

①20%阿莫西林，15-20kg飲水混入25g，連續3～5d；

②氨芐西林，每只雛鵝1萬單位，中鵝3萬～5萬單位，肌肉注射，每天3次。也可以10%氨芐西林拌料或飲水，50g氨芐西林拌料100kg或兌水80-150kg現配現用，每日兩次，連續3-5d；

③呋喃妥因，按0.01%～0.02%的比例拌料服用，每日一次，連續3～5d；

④妥布霉素針劑，0.3～1.1μg/ml，肌肉注射。

經上述藥物綜合治療后，痊愈452只，治愈率達到84%。

4.2 預防措施

①一定要重視孵化室、種蛋及各種器材用具的衛生問題，定期需要消毒殺菌，防止感染；

②剛出生的雛鵝需要服用抗菌藥預防感染，如用氨芐西林飲水，用量為1g藥物加2kg水，連用3d；

③飼料內加入土霉素，按照0.1%的比例拌飼料，連用3-5d。

5 討論

金黃色葡萄球菌無處不在，作為常見病原，大部分存在于呼吸道里和皮膚表面上。金黃色葡萄球菌感染一年四季都可能發生，尤其是氣候多變季節和潮濕的下雨季節更為多發；各種年齡段的禽類都容易感染，但以幼禽[8]更加敏感，多見于40～80日齡中雛。

金黃色葡萄球菌是禽類化膿性感染中最為多見的病原菌，會導致各種感染，也可能引起肺炎、心包炎、偽膜性腸炎，甚至引起膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌是皮膚表面的常在菌，在大部分情況下是不會入侵體內，但當皮膚和黏膜受到損傷，如注射疫苗、網刺、刮傷等可成為本病發生的因素。

近年來各種實驗研究發現，金黃色葡萄球菌粘黏在黏膜表面是感染的最先要條件。細菌粘黏是細菌膜上的黏附素蛋白與機體內胞外基質（互相反應作用的結果。雖然機體內胞外基質通常不暴露出來，但在組織受到破壞后，機體內胞外基質就暴露出來，金黃色葡萄球菌就會引起感染。

感染初期出現癥狀，體熱，關節腫脹，精神狀態低沉，不愿意動。發病初期食欲正常，之后食欲降低，瘦弱，最后因營養不良死亡。解剖檢驗可以看見關節處有漿性到干酪樣的滲出物；肝大，充血。鏡檢下可以看見關節滑膜纖維增生壞死；肝臟細胞病變壞死，血管周圍的單核細胞和易染性白細胞數量增加。

金黃色葡萄球菌所導致感染的疾病病死率高、耐藥性強，治療困難。植入疫苗是預防感染的方法，目前疫苗主要分為四種：以金黃色葡萄球菌全菌或部分菌體為疫苗、針對莢膜和黏附因子的疫苗、針對毒素和酶的疫苗、針對毒力因子的疫苗[9]。金黃色葡萄球菌為兼性厭氧菌，對于營養方面的需求不高，在普通培養基上就可以生長繁殖，革蘭氏陽性。

金黃色葡萄球菌的耐藥性逐日增強，所以應該采集病樣快速分析出病菌種類，通過藥物敏感試驗后，選取最適宜的藥物，拌在飼料和日常飲用水中，對全部禽類進行治療，這是大量飼養禽類下發病之后的首要控制治療措施。金黃色葡萄球菌感染發病率與所在環境中球菌的含量成正比，病死鵝的排泄物加大了環境中金黃色葡萄球菌的含量，更加加速了病情的惡化。在飼養管理過程中，應完善防疫設施，注意環境衛生，并進行定期消毒。由于抗生素的大量使用，金黃色葡萄球菌出現大量耐藥菌株，特別是耐甲氧西林葡萄球菌的出現使得金黃色葡萄球菌成為世界感染頑疾之一。

微生物的檢測正向著更迅速、更簡單、更精確的趨勢發展，法國梅里埃公司和美國3M公司的2種快速鑒別金黃色葡萄球菌的培養基。可以比日前普遍的檢測方式減短一半的時間，完全適合用在實驗室的快速檢測，尤其是在設施缺乏的實驗室中，更加能顯示出操作使用的方便性。聚合酶鏈式反應法是檢測耐甲氧西林菌株的最適宜方法，雖然存在容易引起污染、假性陰性等困擾，但是因為可快捷擴增DNA片段和目的基因，因此在檢測行業有著不可小覷的實用價值。多種檢測方式[10]相互結合可以相較以往很大的提升檢測金黃色葡萄球菌的敏感度[11]，是檢測病菌的發展趨勢。

[1] 王紅寧，朱慶.養禽與禽病防治新進展[M].中國農業出版社，1997：207-211.

[2] 張生勇.淺談畜禽采血與血清制備[J].畜牧市場，2005，（3）：68.

[3] 姚火春.獸醫微生物學實驗指導[M].中國農業出版社，2002：36-37.

[4] 廖延雄.獸醫微生物實驗室診斷手冊[M].中國農業出版社，1995：81-93.

[5] 盤寶進，謝永平，汪文龍，等.鵝金黃色葡萄球菌的分離與鑒定[J].廣西畜牧獸醫，2004，20（1）：6-8.

[6] Buchanan R，Gibbons N.伯杰細菌鑒定手冊[M].科學出版社，1984：598-599，667-672.

[7] 羅君毅，程池.酶制劑抗菌活性檢測標準菌株的藥敏性分析[J].食品與發酵工業，2009，（1）：17-22.

[8] 梁毅珊.金黃色葡萄球菌腸毒素及其檢測方法的研究進展[J].中國熱帶醫學，2008，8（9）：1658-1659.

[9] 李毅.金黃色葡萄球菌及其腸毒素研究進展[J].中國衛生檢驗雜志，2004，（4）：86-88.

[10] 龍軍，陳清，俞守義.PCR-ELISA法檢測葡萄球菌腸毒素A[J].中國公共衛生，2004，20（11）：1340-1341.

[11] 黃韜睿，李玉鋒，王鑫.PCR和ELISA在食源性致病菌檢測中的應用[J].現代農業科技，2008，（9）：182-184.