連翹花中連翹苷的超聲提取工藝△

高首勤，雒慧娟，陳芳

(1.山西中醫學院 中藥學院，山西 晉中 030619；2.山西醫科大學 基礎醫學院，山西 太原 030001)

連翹(Forsythia suspense)為木犀科連翹屬的落葉灌木，在我國分布廣泛，主要產地有山西、陜西、河南、山東等，而且其他各地幾乎均有栽培。連翹的傳統入藥部位是果實，是經常使用的中藥[1]。連翹最早記載于《神農本草經》，具有清熱解毒、散結消腫之功能，主治癰疽、乳癰、瘰疬、癰瘍腫毒、丹毒、高熱煩渴、風熱感冒、神昏發斑以及熱淋尿閉等癥[2]。近些年來，關于連翹果實與連翹葉的研究很多，包括有效成分和藥理作用等方面。研究表明，連翹果實與連翹葉所含的化合物非常相似，均含有苯乙醇苷類、木脂素類、黃酮類以及三萜類等化學成分[3]，而且都具有降血脂、保肝、抗氧化、抗疲勞和抗腫瘤等作用[4]。然而相比之下，對連翹花的研究文獻卻甚少，連翹每年的花期為3—4月份，花期長、花量大，花色鮮黃且長時間不褪色，是一類及其豐富的資源，可以將其收集起來加以開發和利用。連翹苷是從連翹中提取分離出的一種活性成分，難溶于水，易溶于甲醇等有機溶劑[5]，具有良好的抗菌、抗炎、保肝、抗病毒和降血脂等功能[6-8]。根據宋小俊等[9]的報道，連翹花中也含有連翹苷且含量高于傳統入藥部位。但是目前關于連翹花中連翹苷的提取工藝研究報道卻很少。

超聲波提取法由于其具有費時短、低耗能、高效率、不破壞有效成分等優點，在中藥化學成分的提取中表現出顯著的優勢。為了更加全面地開發和利用連翹花資源，本文采用正交試驗法對連翹花中連翹苷的超聲提取工藝展開了研究，為更有效地開發和合理利用連翹花資源提供依據。文獻中提取的溶劑常用的有水、甲醇、乙醇等，其中對連翹花和葉的提取用甲醇的比較多，所以本文選取甲醇作為提取劑，當然提取成分用于藥用要考慮到甲醇的毒性。

1 儀器和試劑

1.1 儀器

CP214電子天平(奧豪斯儀器有限公司)；UV-61005紫外可見分光光度計(上海元析儀器有限公司)；SB-5200DTDN型超聲清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；DE-200g萬能高速粉碎機﹙浙江紅景天工貿有限公司﹚。

1.2 試劑與藥品

連翹花采于山西中醫學院榆次校區本草園內，洗凈，40 ℃烘干，粉碎備用；連翹苷對照品(上海融禾醫藥科技有限公司，批號：160403)；無水甲醇為國產分析純試劑。

2 方法與結果

2.1 連翹花中連翹苷的提取

取新鮮連翹花，洗凈，40 ℃烘干，粉碎，備用。準確稱取連翹花粉末1.0 g，置于100 mL錐形瓶中，加入20 mL甲醇，浸泡1 h，超聲波提取30 min，過濾，將濾液置于100 mL容量瓶中，定容，搖勻，作為樣品溶液，備用。

2.2 連翹花中連翹苷的測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的連翹苷對照品5.00 mg，置于10 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，定容，搖勻，得質量濃度為0.500 mg·mL-1的連翹苷對照品溶液。

2.2.2 檢測波長的選擇 取2.2.1項中制備好的對照品溶液，在200～400 nm波長范圍內進行掃描，在290 nm波長處有最大吸收且干擾小，故選擇290 nm為測定波長。

2.2.3 標準曲線的繪制 精密吸取對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL置于10 mL容量瓶中，定容，搖勻，以甲醇為空白對照溶液，在290 nm波長處測定吸光度，以連翹苷對照品濃度(X)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標得到回歸方程：Y=8.476 2X+0.002 1，r=0.996 9，表明連翹苷對照品在0.01～0.07 mg·mL-1呈良好的線性關系。

2.2.4 精密度試驗 取配置好的對照品溶液在290 nm波長處測定吸光度值，平行操作6次，算得RSD值為1.05%，說明此儀器精密度良好。

2.2.5 穩定性試驗 精密吸取連翹花供試品溶液2 mL，定容到10 mL容量瓶中，在290 nm波長下分別間隔0、10、20、30、40、50、60 min測定吸光度值，計算得RSD值為1.28%，說明供試品溶液在1 h內穩定，所得連翹苷的穩定性良好。

2.2.6 重復性試驗 稱取同一批藥材樣品，依據連翹花供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，然后分別在290 nm處測定吸光度值，計算得RSD值為1.56%，說明此方法重復性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗 分別在6份已知含量的重復性樣品中，精密移取連翹苷對照品溶液1.500 mg加入樣品中，在290 nm波長處測吸光度值，結果見表1。

表1 加樣回收率結果(n=6)

2.3 單因素試驗

在其他條件相同時，分別選取甲醇濃度、超聲時間和料液比3個影響提取效果的因素進行單因素試驗，以期為正交試驗中因素水平的設定提供參考。

2.3.1 不同甲醇濃度提取 準確稱取1.0 g連翹花粉末5份，以1∶20的料液比分別加入50%、60%、70%、80%、90%的甲醇，分別超聲提取30 min。提取液過濾后，取2 mL濾液置于10 mL容量瓶中，定容，搖勻，在290 nm處測定吸光度值并計算提取率，見圖1，使用70%的甲醇提取率最高。

2.3.2 不同時間提取 準確稱取1.0 g連翹花粉末5份，以1∶20的料液比分別加入70%的甲醇，分別超聲提取20、30、40、50、60 min。提取液過濾后，取2 mL濾液置于10 mL容量瓶中，定容，搖勻，在290 nm處測定吸光度值并計算提取率，見圖2，超聲提取30 min時，提取率最高。

2.3.3 不同料液比提取 準確稱取1.0 g連翹花粉末5份，分別以1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30的料液比加入70%的甲醇，分別超聲提取30 min。提取液過濾后，取2 mL濾液置于10 mL容量瓶中，定容，搖勻，在290 nm處測定吸光度值并計算提取率，見圖3，料液比1∶25時提取率最高。

圖1 甲醇濃度與連翹苷得率的關系

圖2 時間與連翹苷得率的關系

圖3 料液比與連翹苷得率的關系

2.4 正交試驗設計

為系統考察超聲波提取連翹花中連翹苷的提取工藝，在單因素試驗與所查文獻的基礎上，選取提取時間、甲醇濃度和料液比作為考察因素，以連翹苷提取率為指標進行正交試驗，確定連翹花中連翹苷的最佳超聲提取工藝條件，因素水平見表2。

按表2所列的工藝組合制備樣品，加甲醇后均浸泡1 h后超聲提取，提取物取2 mL置于10mL容量瓶中，定容，搖勻。在290 nm下測定吸光度值，計算連翹苷的提取率。

表2 正交試驗因素水平表

2.5 正交試驗結果

按表3所列的工藝組合制備樣品，加甲醇后均浸泡1 h后超聲提取，提取物取2 mL置于10 mL容量瓶中，定容，搖勻。在290 nm下測定吸光度值，計算連翹苷的得率。正交試驗結果與直觀分析見表3，方差分析見表4。

表3 正交試驗結果和直觀分析

表4 方差分析

由結果分析可知，影響連翹苷得率的主次因素為：料液比>提取時間>甲醇濃度，其中最顯著的影響因素為料液比，并且確定最佳提取方案為A2B2C3，即用25倍量的70%甲醇，超聲提取40 min，提取的質量分數為4.822 mg·g-1。

3 討論

采用超聲提取法對連翹花中連翹苷的提取工藝進行研究，并通過正交試驗確定了最佳的超聲波提取工藝，即用25倍量70%的甲醇，超聲提取40 min，提取率為4.822 mg·g-1。這個提取工藝的確定不但為連翹花資源的合理開發和利用提供了可靠的參考，而且擴大了連翹苷的藥用來源。

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