女萎質量標準研究

朱琳，周謐，楚楚

(1.南通市食品藥品監督檢驗中心，江蘇 南通 226006；2.浙江工業大學 藥學院，浙江 杭州 310032)

女萎為毛茛科植物女萎ClematisapiifoliaDC.的干燥地上部分，生于海拔150～1000 m的山野林邊。在我國分布于江蘇南部、浙江、安徽大別山以南、江西、福建，朝鮮、日本亦有產出[1]。女萎始載于《神農本草經》[2]，列為草部上品。唐《新修本草》中將女萎列為草部中品，謂：“其葉似白蘞，蔓生，花白，子細。荊襄之間名為女萎，亦名蔓楚”[3]。女萎具有舒筋活血、祛風止痛、消食止痢、利尿的功效，用于筋骨疼痛、牙痛、喉痛、瀉痢脫肛、驚癇寒熱、妊婦浮腫[4]。女萎藥材為《江蘇省中藥材標準》1989版收載品種，是江蘇省習慣用藥。原有的標準檢驗項目較少，不能科學評價和全面控制女萎的質量。為了完善該標準，提高藥材質量，保證中醫臨床用藥的安全有效，本實驗對5批不同產地女萎的藥材性狀、顯微特征、薄層鑒別及各項檢查進行了深入研究，完善了女萎的質量控制方法，為女萎藥材質量標準的提高提供參考。

1 儀器與試藥

奧林巴斯BX51光學顯微鏡(日本Olympus 公司)；BT125D電子天平(德國賽多利斯公司)；CAMAG ATS4全自動點樣儀(瑞士CAMAG公司)；ZF-7型暗箱三用紫外線分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)；UN55通用烘箱(德國Memmert公司)；M110馬弗爐(美國Thermofisher公司)。

槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100081-200907，使用前不需干燥處理，供HPLC法測定用，按C15H10O7計，純度為96.5%)；硅膠G預制板(德國Merck公司)；水為超純水，其余試劑均為分析純。

5批女萎樣品均收集自產地，經江蘇省食品藥品監督檢驗研究院胡浩彬主任中藥師鑒定為毛茛科植物女萎ClematisapiifoliaDC.的地上部分，晾干，樣品信息見表1。

表1 采集的女萎樣品信息表

2 方法與結果

2.1 藥材性狀

老莖呈類方形，嫩莖呈類圓形，長達數米，直徑1～5 mm。表面灰綠色或棕綠色，通常有6條較明顯的縱棱，被白色柔毛；質脆易斷，斷面不平坦，木部黃白色，可見多數細導管孔，髓部疏松。葉對生，為三出復葉，葉片多皺縮破碎；完整葉片展平后呈卵形或寬卵形，頂生小葉片較兩側小葉片大，通常有不明顯的3淺裂，邊緣有缺刻狀粗鋸齒，暗綠色，兩面有短白毛。總葉柄長2～9 cm，常扭曲。有的帶有花果。氣微，味微苦、澀。

2.2 顯微特征

粉末灰綠色。葉上表皮細胞表面觀呈類多角形或不規則形，垂周壁微彎曲或較平直；下表皮細胞垂周壁波狀彎曲，氣孔不定式，副衛細胞4～6個。非腺毛多見，單細胞，長約170～520 μm，壁較厚，基部略膨大。螺紋導管及具緣紋孔導管多見。花粉粒淡黃色，呈類圓形，直徑18～25 μm，外壁表面有細顆粒狀雕紋，具3個萌發孔。結果見圖1。

注：A.葉上表皮細胞；B.葉下表皮細胞；C.非腺毛；D.花粉粒；E.螺紋導管；F.具緣紋孔導管。圖1 女萎粉末顯微特征圖

2.3 薄層色譜鑒別

取本品粉末1 g，加80%甲醇50 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水-乙醚(1∶1)混合溶液60 mL使溶解，靜置分層，棄去乙醚液，水液加乙醚提取2次，每次20 mL，棄去乙醚液，水液加鹽酸5 mL，置水浴中水解1 h，取出，迅速冷卻，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，用水30 mL洗滌，棄去水液，乙醚液揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取槲皮素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則502)試驗，吸取供試品溶液及對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(25∶20∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105 ℃加熱數分鐘，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖2。

注：S.槲皮素；1～5.女萎供試品。圖2 女萎薄層色譜圖(12 ℃，相對濕度：50%)

2.4 檢查及浸出物

按《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則對5批樣品進行水分、總灰分和浸出物測定，結果見表2。

表2 不同批次女萎水分、總灰分和浸出物的測定結果(n=2) %

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別

實驗研究中，對不同提取方式(鹽酸水解后乙酸乙酯萃取、甲醇提取后鹽酸水解)進行了考察，確定了最佳樣品前處理方法。經考察，供試品溶液在24 h內穩定，所得薄層色譜斑點清晰、一致。

另對不同展開系統[甲苯-乙酸乙酯-甲酸(25∶20∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)的上層溶液、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(7∶5∶0.8)]、不同薄層板(默克硅膠G薄層板、自制硅膠G薄層板)等薄層色譜條件進行考察，結果表明，按上述2.3項下描述的薄層色譜條件實驗，分離效果佳，重現性好，斑點顯色穩定、清晰一致。本實驗還考察了不同溫、濕度條件(10 ℃，相對濕度：70%；19℃，相對濕度：70%；19 ℃，相對濕度：20%)的展開效果，結果表明本薄層實驗的耐藥性很好。

3.2 浸出物的測定

文獻調研表明，女萎化學成分報道較少，僅《中藥大辭典》第二版中簡要提及到根含乙酰齊墩果酸(acetyl oleanolic acid)、齊墩果酸(oleanolic acid)、常春藤皂苷元(hederagenin)、豆甾醇(stigmasterol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)等成分，花、葉含槲皮素(quercetin)、山柰酚(kaempferol)等黃酮類化合物[5]。另含棕櫚酸、植醇、9(Z)，12(Z)-十八碳二烯酸、亞麻酸等揮發性成分[6]。綜合上述化學成分的特性，建立浸出物檢查項作為控制藥品質量的指標之一。本實驗考察了不同浸出方法(熱浸法、冷浸法)、不同溶劑(水、乙醇)，結果表明各種溶劑采用熱浸法浸出量均高于冷浸法，水和乙醇兩種溶劑熱浸法的浸出量無明顯差異，但考慮到女萎有效化學成分的特性，因此，確定以乙醇為溶劑，采用熱浸法測定女萎的浸出物。

[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志：第28卷[M].北京：科學出版社，1980：193.

[2] 孫星衍，孫馮翼.神農本草經[M].輯佚本.太原：山西科學技術出版社，1991：14-15.

[3] 蘇敬.新修本草[M].輯復本.合肥：安徽科學技術出版社，1981：225.

[4] 江蘇省衛生廳.江蘇省中藥材標準[M].南京：江蘇科學技術出版社，1989：96.

[5] 南京中醫藥大學.中藥大辭典：上冊[M].2版.上海：上海科學技術出版社，2006：320-321.

[6] 宋龍，張雯，吳靳榮，等.女萎揮發油成分分析[J].上海中醫藥大學學報，2006，20(4)：83-84.