黃體酮對大鼠外傷性腦損傷模型中18kDa轉運蛋白表達的影響

包卿+卞曉星+龔幸春+王存祖

[摘要] 目的 觀察和探討黃體酮干預對大鼠外傷性腦損傷（TBI）后線粒體膜18kDa轉運蛋白（TSPO）的表達變化。 方法 2017年1—7月該院選取雄性清潔型的SD大鼠共72只用作實驗動物，72只SD雄性大鼠隨機分為假手術組、腦損傷對照組，黃體酮治療組。采用Feeneys自由落體打擊法制作腦外傷模型，治療組傷后給予腹腔注射黃體酮16 mg/kg，對照組給予等量生理鹽水。免疫組化法檢測損傷腦組織中TSPO、OX-42表達。 結果 黃體酮治療組傷后12 h、傷后24 h、傷后3 d、傷后7 d的TSPO分別是（32.88±2.95）、（33.50±3.34）、（21.88±3.04）、（19.75±2.25），黃體酮治療組傷后12 h、傷后24 h、傷后3 d、傷后7 d的OX-42分別是（42.13±3.84）、（38.25±4.13）、（28.25±2.49）、（26.25±1.04），黃體酮治療組中除7 d組外，TSPO、OX-42與外傷對照組明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論TBI后早期應用外源性黃體酮，可抑制TSPO的表達及抑制小膠質細胞的活化增殖。

[關鍵詞] 外傷性腦損傷；黃體酮；18kDa轉運蛋白；小膠質細胞

[中圖分類號] R651 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）12（c）-0044-03

[Abstract] Objective This paper tries to explore the effect on the expression of translocator protein after traumatic brain injury by using progesterone. Methods From January to July 2017， a total of 72 male clean SD rats were selected as experimental animals and were randomly divided into two groups： sham group， trauma control group and progesterone treatment group. Rat models with contusion and laceration of brain were established by Feeneys impact with free falling. Treatment group was given progesterone 16 mg/kg after injury， the control group were injected with equivalent saline. Expression of TSPO， OX-42 in brain injury region were detected by immunosihtochemistry. Results Progestin treatment group of 12 h， 24 h after injury， 3 d， 7 d after injury of the TSPO were （32.88±2.95）， （33.50±3.34）， （21.88±3.04）， （19.75±2.25）， progestin treatment group 12 h， 24 h after injury， 3 d， 7 d after injury of OX-42 （42.13±3.84）， （38.25±4.13）， （28.25±2.49）， （26.25±1.04）. Except 7 d group of progesterone treatment group， OX-42， TSPO decreased which compared with trauma control group， and there was statistical significance（P<0.05）. Conclusion By using exogenous progesterone early after TBI may inhibite the expression of TSPO， and then inhibite the activation proliferation of microglia.

[Key words] Traumatic brain injury； Progesterone； 18 kDa translocator protein； Microglia cell

近幾年來，較多臨床資料表示，線粒體膜相關轉運蛋白對神經損傷、神經膠質細胞的活性會產生一定的反應，也是其敏感指標之一[1]。另外，黃體酮能夠有效促使外傷性腦損傷之后出現的相關炎癥反應降低，進而具備一定的腦保護效果，不過，其是否和線粒體膜相關轉運蛋白具備一定的相關關系尚不明確。筆者2017年1—7月該院選取雄性清潔型的SD大鼠共72只對大鼠TBI模型進行構建，對行黃體酮治療之后的傷側相關腦組織內TSPO水平和OX-42水平情況進行測定，分析黃體酮用于治療TBI的分子學相關機制。

1 材料與方法

1.1 大鼠TBI模型制作

該文實驗資料是雄性清潔型的SD大鼠共72只，其體重是（220±30）g，隨機將其分成假手術組、腦損傷對照組和黃體酮治療組，并將對照組和治療組再次分為12 h、24 h、3 d、7 d，區分成9組，一組8只大鼠。Feeneys自由落體相關硬膜外撞擊方法將大鼠TBI模型構建。予以大鼠麻醉處理之后使其固定在立體的定向儀上面，采取40 g砝碼在25 cm的高度進行落下對其產生重度的損傷，保證打擊力是1 000 g/cm。對于假手術組大鼠只顱骨開窗，并不引發其出現腦損傷情況。另外，治療組在1 h給予黃體酮（16 mg/kg）進行治療，主要是采取腹腔注射的方法進行治療，之后還需要在6 h、24 h、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d進行皮下注射，而對照組則采取等量生理鹽水進行注射。endprint

1.2 標本采集及檢測

按時間點取腦損傷區域的腦組織。經4%多聚甲醛固定后石蠟包埋，切取4 μm厚的腦組織切片，嚴格按照SABC免疫組化試劑盒步驟操作顯色后封片。

1.3 統計方法

采用SPSS 16.0統計學軟件計算大鼠數據，TSPO水平和OX-42表達水平等用均數±標準差（x±s）表示，予以t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TSPO水平改變

TSPO于3組大鼠的腦組織內都存在表達現象，不同時間點的假手術組相對比，差異有統計學意義（P<0.01）；黃體酮治療組的不同時間中除了傷后7d之外，不同時間點的TSPO水平比較于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 OX-42表達變化

假手術組0X-42表達較少，黃體酮治療組、外傷對照組大鼠的0X-42水平比較于假手術組大鼠，差異有統計學意義（P<0.01）；黃體酮治療組的不同時間中除了傷后7 d之外，不同時間點的0X-42水平比較于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

3 討論

黃體酮具備一定的腦保護作用，而且其在臨床上或者是對動物實驗均具備腦保護作用，但是其確切機理還不明確。近幾年來，TSPO由于參與到中樞神經系統相關病變中逐漸受到重視，一般情況下， TBI之后，其TSPO水平會出現明顯提升，于小膠質細胞中出現明顯提升，和其活化以及增殖的狀態具備密切相關關系[1]。黃體酮可以抑制TBI后小膠質細胞的活性，減輕炎癥[2]。將腦內相關類固醇含量提升，對于TSPO含量具備降低作用，說明早期的TSPO產生提升，對于小膠質細胞的活化具備促進效果，將甾體激素增多，對增殖進行適宜調節，于后期的時候，因為甾體類激素含量存在明顯提升，通過反饋作用導致TSPO的產生減少[3-6]，而且，類固醇還具備抗炎效果，導致炎癥得到有效緩解[7-9]。

筆者實驗結果呈現，黃體酮治療組傷后12 h、傷后24 h、傷后3 d、傷后7 d的TSPO分別是（32.88±2.95）、（33.50±3.34）、（21.88±3.04）、（19.75±2.25），黃體酮治療組傷后12 h、傷后24 h、傷后3 d、傷后7 d的OX-42分別是（42.13±3.84）、（38.25±4.13）、（28.25±2.49）、（26.25±1.04），黃體酮治療組中除7d組外，TSPO、OX-42與外傷對照組明顯降低，TBI之后的小膠質細胞出現活化以及增殖現象，其OX-42水平以及TSPO水平均出現明顯提升，和小膠質細胞的活化以及增殖也具有一定的關系；在進行黃體酮相關治療后，早期的OX-42水平和TSPO水平都得到顯著降低。包卿等[10]實驗中，正常組大鼠和假手術組大鼠的TSPO水平相對比較少，重型組大鼠0 h、12 h、24 h、3 d、7 d的TSPO水平是（0.94±0.19）、（4.08±0.47）、（3.77±0.27）、（2.71±0.23）、（1.40±0.40），輕型組大鼠0 h、12 h、24 h、3 d、7 d的TSPO水平是（0.97±0.24）、（3.06±0.18）、（3.15±0.23）、（2.35±0.21）、（1.37±0.23），和正常組相對比，輕型TBI組大鼠和重型TBI組大鼠損傷之后的TSPO水平出現顯著提升，具有顯著差異，重型組大鼠TSPO水平和輕型組大鼠TSPO水平相對比，具有顯著差異。

綜上所述，筆者將黃體酮對于TSPO產生的反饋抑制作用進行證實，外源性采取TSPO所介導產生的黃體酮用于TBI的治療中，相關機理有可能是對TSPO產生減少，對活化的小膠質細胞進行明顯減少，對于炎癥具有緩解效果，對于腦保護作用具備重要影響作用。不過，對于黃體酮具體的作用通路和TSPO相關作用情況尚不明確，需要予以進一步實驗探究。

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（收稿日期：2017-09-21）endprint