2014～2016年江蘇省部分地區(qū)及監(jiān)控點(diǎn)山羊的藍(lán)舌病血清學(xué)調(diào)查

楊蕾蕾，李文良，毛 立，許寶軍，唐朝忠，楊 恒，郝 飛，張紋紋，邵 坤，李華春，江杰元*

藍(lán)舌病是由藍(lán)舌病病毒（Bluetongue Virus，BTV）引起的一種通過(guò)媒介昆蟲（如庫(kù)蠓、伊蚊等）傳播的非接觸性病毒性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物傳染病［1］。BTV屬于呼腸弧病毒環(huán)狀病毒屬病毒，目前已確認(rèn)存在至少27種血清型［2－3］，主要感染綿羊、山羊和牛等，反芻動(dòng)物亦能呈現(xiàn)隱性感染。其以庫(kù)蠓為媒介進(jìn)行傳播，能傳播該病的庫(kù)蠓在我國(guó)有4種，主要分布在北緯40°以南的大部分省區(qū)，云南、廣東、廣西、湖北、安徽、四川、內(nèi)蒙古、河北、江蘇和遼寧等省均檢出BTV血清學(xué)陽(yáng)性動(dòng)物［4－9］。隨著全球氣候的變化、生態(tài)環(huán)境的改變和國(guó)際動(dòng)物貿(mào)易的逐年增加，藍(lán)舌病在全球范圍內(nèi)有擴(kuò)大流行的趨勢(shì)，對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)發(fā)展構(gòu)成威脅。

江蘇處在亞熱帶和暖溫帶的氣候過(guò)渡地帶，夏季炎熱多雨、地勢(shì)低平、河湖眾多，適合庫(kù)蠓等多種吸血媒介昆蟲的滋生和藍(lán)舌病的傳播。但是，自1989年報(bào)道該病病例以來(lái)，尚未有藍(lán)舌病病例和病原分離的報(bào)道。為了解BTV在江蘇的流行情況，筆者在之前的研究中對(duì)江蘇部分地區(qū)牛、羊血清樣品進(jìn)行BTV抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)在江蘇某些縣市存在較高的抗體陽(yáng)性率，并通過(guò)設(shè)置陰性小牛作為監(jiān)控動(dòng)物監(jiān)測(cè)血清學(xué)抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)的試驗(yàn)證明BTV感染的存在［8］。本研究在此基礎(chǔ)上，繼續(xù)對(duì)2014～2016年江蘇省部分地區(qū)羊血清進(jìn)行BTV抗體檢測(cè)，并統(tǒng)計(jì)流行病學(xué)數(shù)據(jù)，并在監(jiān)測(cè)監(jiān)控點(diǎn)設(shè)置陰性羊作為監(jiān)控動(dòng)物，同時(shí)采用燈光誘捕法捕捉監(jiān)測(cè)點(diǎn)蚊蠓，監(jiān)測(cè)2014～2016年度BTV抗體和蚊蠓數(shù)量的變化趨勢(shì)，以進(jìn)一步了解江蘇省藍(lán)舌病血清學(xué)流行情況，為該病的預(yù)警預(yù)報(bào)及防控提供科學(xué)資料。

1 材料與方法

1.1 血清樣品

羊血清樣品隨機(jī)采自江蘇省9個(gè)市的規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)及農(nóng)村散養(yǎng)戶，共419份，置于－20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩２杉瘯r(shí)間為2014～2016年。

1.2 檢測(cè)方法

血清樣品用云南省熱帶亞熱帶動(dòng)物病毒病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供的BTV C－ELISA試劑盒，按照說(shuō)明書進(jìn)行抗體檢測(cè)。

1.3 監(jiān)控點(diǎn)選擇和感染監(jiān)測(cè)

根據(jù)之前的血清學(xué)調(diào)查和分析，選擇盱眙縣桂五鎮(zhèn)某養(yǎng)殖戶作為監(jiān)控點(diǎn)，投放BTV陰性山羊5只，與監(jiān)控點(diǎn)養(yǎng)殖戶羊混群放牧，不使用殺蟲藥。分別于2014～2015年、2015～2016年、2016～2017年 3個(gè)年度，每年5～10月每周采血1次，11月～次年4月每月采血1次，收集血清，采用1.2所述方法檢測(cè)學(xué)血清中BTV抗體，根據(jù)監(jiān)測(cè)結(jié)果分析BTV感染的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。

1.4 捕捉蚊蠓方法

采用燈光誘捕法捕捉蚊蠓。利用國(guó)產(chǎn)“蚊博士”牌捕蚊器進(jìn)行改造，加一個(gè)蠓籠防止庫(kù)蠓飛出。將改造好的捕蚊器掛在羊圈的合適位置。庫(kù)蠓和蚊的成蟲往往在日出前和日落后的活動(dòng)最頻繁，故將捕蚊器的工作時(shí)間段設(shè)置為日落前1 h至日出后1 h。收集蟲盒內(nèi)的蟲子時(shí)，先拔掉電源插頭，然后將蟲盒旋轉(zhuǎn)擰下，將蟲盒放入－20℃冰箱20 min，將蟲子凍僵，再倒入平皿內(nèi)置于4℃冰箱中，待運(yùn)輸分揀。捕捉蚊蠓時(shí)間自2014～2016年的5～8月份，共計(jì)12個(gè)月。

2 結(jié)果與分析

2.1 血清學(xué)檢測(cè)

采用BTV C－ELISA抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)9個(gè)地區(qū)共419份血清BTV樣品，總體陽(yáng)性率為7.2%（30／419）。統(tǒng)計(jì)分析各地陽(yáng)性樣品數(shù)量和比例（表1），發(fā)現(xiàn)徐州、淮安、宿遷、揚(yáng)州均能檢到BTV抗體，其中淮安市陽(yáng)性率最高，為24.6%（16／65），其次為徐州和宿遷。此結(jié)果與之前的檢測(cè)結(jié)果基本相符［8］，從地理上判斷，發(fā)現(xiàn)BTV抗體陽(yáng)性地區(qū)主要集中在江蘇中北部。

表1 江蘇省部分地區(qū)BTV抗體檢測(cè)

2.2 監(jiān)控點(diǎn)羊群BTV抗體檢測(cè)及分析

BTV C－ELISA試劑盒檢測(cè)監(jiān)控點(diǎn)采集的山羊血清，檢測(cè)結(jié)果見圖1。2015～2016年度和2016～2017年度，每年自6月開始，羊BTV抗體檢測(cè)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，至12月，監(jiān)控羊群檢測(cè)全為BTV抗體陽(yáng)性，且BTV抗體水平穩(wěn)定直至監(jiān)測(cè)結(jié)束。只有2014～2015年度，直至次年1月份才有一只羊轉(zhuǎn)陽(yáng)。

2.3 監(jiān)控點(diǎn)蚊蠓的捕捉與分類統(tǒng)計(jì)

采用燈光誘捕法在監(jiān)控點(diǎn)捕捉蚊蠓，分類統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。每年6月份開始蚊蠓數(shù)量開始激增，7月份蚊蠓量達(dá)到高峰。2014年蚊蠓數(shù)量明顯偏少。江蘇省2014年6～9月份的氣溫持續(xù)偏低，尤其是8月6日～9月16日出現(xiàn)持續(xù)低溫陰雨天氣。這些氣候因素可能影響了蚊蠓的活動(dòng)。

3 討論

我國(guó)對(duì)動(dòng)物蟲媒病毒包括BTV的研究相對(duì)滯后，對(duì)BTV的分布、流行情況及變化規(guī)律缺乏系統(tǒng)的研究。自1979年張念祖等在中國(guó)云南省師宗縣首次發(fā)現(xiàn)藍(lán)舌病并成功分離到病毒后，在1983～1993年間，湖北、安徽、廣西、四川、山西等地先后報(bào)道了該病，但之后鮮有研究報(bào)道。受全球氣候變化及畜產(chǎn)品貿(mào)易增長(zhǎng)的影響，藍(lán)舌病呈現(xiàn)出向北方、高緯度蔓延的流行趨勢(shì)。因此，有必要對(duì)BTV流行分布情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

圖1 監(jiān)控動(dòng)物抗體消長(zhǎng)曲線

表2 監(jiān)控點(diǎn)蚊蠓捕捉數(shù)統(tǒng)計(jì) 只

江蘇省地處亞熱帶和暖溫帶的氣候過(guò)渡地帶，氣候溫暖潮濕，適合蟲媒滋生和疾病傳播。本研究針對(duì)江蘇省內(nèi)9個(gè)市現(xiàn)有羊群進(jìn)行藍(lán)舌病感染血清學(xué)調(diào)查。調(diào)查的羊群未接種過(guò)BTV疫苗，所以血清陽(yáng)性率能夠反映其自然感染情況。調(diào)查結(jié)果顯示，江蘇省9個(gè)地區(qū)共419份血清樣品中BTV樣品陽(yáng)性率為0～24.6%，總體陽(yáng)性率為7.2%（30／419）。此結(jié)果基本與之前的檢測(cè)結(jié)果相符［8］，這說(shuō)明部分地區(qū)存在BTV感染，但感染程度有差異。從地理上判斷，發(fā)現(xiàn)BTV抗體陽(yáng)性地區(qū)主要集中在江蘇中北部。

根據(jù)先前的調(diào)查結(jié)果，選擇陽(yáng)性率高的盱眙縣某養(yǎng)殖戶作為監(jiān)控點(diǎn)，該地為丘陵山區(qū)，靠近洪澤湖，且附近有水庫(kù)，有利于蟲媒病毒的傳播。牛、綿羊、山羊感染BTV多為持續(xù)性或隱性感染，往往不表現(xiàn)特征性臨床癥狀，這給BTV流行病學(xué)監(jiān)測(cè)與防控帶來(lái)困難。在高陽(yáng)性率地區(qū)投入BTV抗體陰性動(dòng)物作為“監(jiān)控動(dòng)物”或“哨兵動(dòng)物”，通過(guò)監(jiān)測(cè)監(jiān)控動(dòng)物感染情況可以評(píng)價(jià)BTV流行情況。本研究發(fā)現(xiàn)2015～2016年度和2016～2017年度，每年自6月開始，羊BTV抗體檢測(cè)出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，至12月監(jiān)控羊群檢測(cè)全為BTV抗體陽(yáng)性，且BTV抗體水平穩(wěn)定直至監(jiān)測(cè)結(jié)束。BTV主要通過(guò)媒介昆蟲——庫(kù)蠓傳播，庫(kù)蠓的活動(dòng)季節(jié)大致在5～10月間，其生活史正與監(jiān)控羊群BTV抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)的時(shí)間相吻合。監(jiān)控動(dòng)物BTV抗體全部轉(zhuǎn)陽(yáng)，而且BTV抗體抑制率趨近穩(wěn)定，說(shuō)明了該地區(qū)存在BTV感染，且通過(guò)媒介昆蟲互相傳播流行普遍，這也與血清學(xué)調(diào)查結(jié)果相符。只有2014～2015年度，直至次年1月份才有1只羊轉(zhuǎn)陽(yáng)。同時(shí)通過(guò)對(duì)監(jiān)控點(diǎn)蚊蠓的捕捉和分類，發(fā)現(xiàn)2014年蚊蠓數(shù)量明顯偏少。庫(kù)蠓的孳生常常受環(huán)境因素的影響，特別是溫度、濕度、降雨量等。庫(kù)蠓成蟲平時(shí)隱蔽于或者多棲息于樹叢、雜草等避風(fēng)、避光處，下雨時(shí)不活動(dòng)。當(dāng)溫度、光照適合且無(wú)風(fēng)時(shí)，成蟲即成群飛出［10］。江蘇省2014年6月到9月份的氣溫持續(xù)偏低，尤其是8月6日～9月16日出現(xiàn)持續(xù)低溫陰雨天氣，這些氣候因素可能干擾了庫(kù)蠓的活動(dòng)，從而影響了藍(lán)舌病的發(fā)生。

本研究在之前工作的基礎(chǔ)上，繼續(xù)對(duì)2014～2016年江蘇省部分地區(qū)羊血清進(jìn)行BTV抗體檢測(cè)并統(tǒng)計(jì)流行病學(xué)數(shù)據(jù)，獲得了可信的流行病學(xué)資料，在一定程度上反映了羊藍(lán)舌病近年來(lái)在江蘇的流行情況。并于2014～2017上半年度在監(jiān)控點(diǎn)對(duì)監(jiān)控動(dòng)物的BTV感染情況進(jìn)行定點(diǎn)監(jiān)控，發(fā)現(xiàn)在庫(kù)蠓活動(dòng)高峰時(shí)期的持續(xù)低溫陰雨天氣，對(duì)BTV的感染可能有嚴(yán)重干擾，為進(jìn)一步研究和防治藍(lán)舌病等蟲媒病提供科學(xué)依據(jù)。

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