多發(fā)性骨髓瘤患者淋巴細(xì)胞亞群變化對(duì)免疫功能的影響研究

賈海英+黃睿+王玲玲+黃國(guó)虹+楊麗瑋+余亮+王昌敏

摘 要：目的 分析多發(fā)性骨髓瘤（MM）患者外周血T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和自然殺傷（NK）細(xì)胞的變化。方法 收集69例MM患者及52例健康體檢人員的抗凝血，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)（Lym）、CD3+ T淋巴細(xì)胞、CD19+ B淋巴細(xì)胞及CD16+56+ NK細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果 與對(duì)照組比較，MM組Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+等6個(gè)項(xiàng)目差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），CD16+56+差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 MM患者在疾病進(jìn)程中與T淋巴細(xì)胞亞群及B淋巴細(xì)胞、Lym密切相關(guān)，對(duì)評(píng)價(jià)MM患者的免疫狀況、疾病進(jìn)展和療效等方面具有重要作用。

關(guān)鍵詞：多發(fā)性骨髓瘤；淋巴細(xì)胞亞群；流式細(xì)胞術(shù)

中圖分類號(hào)：R733.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.01.057

文章編號(hào)：1006-1959（2018）01-0147-02

The Effect of Lymphocyte Subgroup Changes on Immune Function in Patients with Multiple Myeloma

JIA Hai-ying1，HUANG Rui1，WANG Ling-ling1，HUANG Guo-hong1，YANG Li-wei1，YU Liang2，WANG Chang-min1

（Clinical Laboratory 1， Pediatrics 2， People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region，Urumqi830001，Xinjiang，China）

Abstract：Objective To analyze the multiple myeloma（MM）in peripheral blood of patients with T lymphocytes，B lymphocytes and natural killer （NK） cell changes.Methods Anticoagulated blood were collected from 69 MM patients and 52 cases of healthy people，with the total number of flow cytometry in peripheral blood lymphocytes（Lym），CD3+T lymphocytes，CD19+B lymphocytes and CD16+56+NK cells.Results Compared with the control group，MM group，Lym，CD3+，CD4+，CD8+，CD4+/CD8+，CD19+and other 6 projects，the differences were statistically significant（P<0.05），there was no significant difference between CD16+56+（P>0.05）.Conclusion The MM patients in disease progression and T lymphocyte subsets and B lymphocytes， closely related to Lym to evaluate the immune status of patients with MM，and has an important role in disease progression and therapeutic effect.

Key words：Multiple myeloma；Lymphocyte subgroup；Flow cytometry

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）系腫瘤性漿細(xì)胞在骨髓中多灶性惡性增生所致的一種血液系統(tǒng)疾病，其特點(diǎn)主要為血清或尿中出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白或其成分（M蛋白）、可累及全身的溶骨性損害、骨痛、貧血、高鈣血癥等，發(fā)病率位居血液系統(tǒng)惡性腫瘤的第二位[1]。目前MM發(fā)病原因及機(jī)制尚不清楚，有研究表明MM患者存在細(xì)胞免疫功能紊亂[2]。本文用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)新疆地區(qū)69例MM患者及52例健康體檢人員的淋巴細(xì)胞總數(shù)（Lym）、T淋巴細(xì)胞（CD3+）、B淋巴細(xì)胞（CD19+）和NK細(xì)胞（CD16+56+）指標(biāo)，探討其變化對(duì)MM患者機(jī)體免疫功能的影響，為進(jìn)一步深入研究MM發(fā)病機(jī)制、判斷預(yù)后及評(píng)價(jià)療效提供有價(jià)值的參考指標(biāo)。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月～2017年7月在本院就診的MM患者69例，其中男39例，女30例，年齡44～85歲，平均年齡（61.75±9.60）歲。所有程序經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。健康對(duì)照組為在本院體檢中心進(jìn)行健康體檢人員52例，其中男20例，女32例，年齡17～83歲，平均年齡（44.81±15.70）歲。MM診斷符合張之南主編的第3版《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[3]，排除其他急慢性感染、腫瘤及自身免疫性疾病。

1.2主要儀器和試劑 BriCyte E6流式細(xì)胞儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)）及配套熒光標(biāo)記單克隆抗體試劑CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC、流式細(xì)胞儀用溶血?jiǎng)|(zhì)控微球?yàn)槊绹?guó)Spherotech公司生產(chǎn)的Sphero Supra Rainbow Fluorescent Particles。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本處理 抽取空腹外周靜脈血 2 ml，用 EDTA 抗凝。具體步驟：取試管2支，編號(hào)，加入全血 50 μl（反向加樣），分別加入不同的四標(biāo)單克隆抗體 20 μl，充分混勻，室溫下避光孵育15 min；然后加入 1×免洗溶血素 450 μl，充分混勻，室溫下避光孵育15 min，待上機(jī)檢測(cè)。endprint

1.3.2檢測(cè) 開(kāi)機(jī)后啟動(dòng)MRFlow軟件，運(yùn)行自動(dòng)化設(shè)置和質(zhì)控，質(zhì)控在控后進(jìn)入細(xì)胞獲取界面，獲取細(xì)胞得出結(jié)果。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采取EXECL2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集。各組測(cè)量值以（x±s）表示，以SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

MM組與對(duì)照組比較，7個(gè)項(xiàng)目Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD16+56+均低于對(duì)照組，其中Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+計(jì)6個(gè)項(xiàng)目差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），CD16+56+差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

3討論

MM是一種起源于前B 細(xì)胞的骨髓漿細(xì)胞異常增生的惡性腫瘤。而淋巴細(xì)胞是構(gòu)成機(jī)體免疫系統(tǒng)的主要細(xì)胞群體，占外周血白細(xì)胞總數(shù)的20%～45%。根據(jù)其細(xì)胞表面分化群（cluster of differentiation，CD）分子表達(dá)情況可將其分為CD3+ T淋巴細(xì)胞、CD19+ B淋巴細(xì)胞、CD16+56+ NK淋巴細(xì)胞等。其中CD3+ T淋巴細(xì)胞又可分為CD3+CD4+ T即CD4+輔助/誘導(dǎo)T細(xì)胞和CD3+CD8+ T即CD8+抑制/殺傷T細(xì)胞（簡(jiǎn)稱Th細(xì)胞和Ts細(xì)胞）。這些淋巴細(xì)胞在免疫應(yīng)答過(guò)程中相互協(xié)作、相互制約、共同完成對(duì)機(jī)體異物的識(shí)別、應(yīng)答、和清除，從而維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定[4]。

Shen等[5]研究發(fā)現(xiàn)，MM患者不但有體液免疫功能缺陷，其細(xì)胞免疫功能也有異常，尤其是T淋巴細(xì)胞的表型和功能異常。本研究發(fā)現(xiàn)，Lym、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD19+ MM組均低于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與黃亞麗等[6]的研究一致。CD16+56+ MM組雖然低于對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。可見(jiàn)本組患者T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞均有異常。CD4+ Th細(xì)胞表達(dá)受到抑制致使數(shù)量顯著減少，而CD8+ Ts細(xì)胞降低不明顯，導(dǎo)致CD4+/CD8+比值下降，機(jī)體細(xì)胞免疫功能受到影響，腫瘤得以逃避免疫監(jiān)視，抗腫瘤能力降低。

B淋巴細(xì)胞是體內(nèi)唯一能產(chǎn)生抗體（免疫球蛋白）的細(xì)胞，其主要作用是產(chǎn)生抗體，提呈抗原以及分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)，發(fā)揮體液免疫功能。本研究結(jié)果提示，MM患者B細(xì)胞比正常人顯著降低，可能的原因?yàn)镸M常伴有異常單克隆免疫球蛋白（M蛋白）增多，反饋抑制正常多克隆B細(xì)胞分化發(fā)育，使MM患者外周血多克隆B細(xì)胞減少，導(dǎo)致體液免疫功能缺陷。NK細(xì)胞又稱自然殺傷細(xì)胞，無(wú)須預(yù)先致敏可直接殺傷靶細(xì)胞，具有抗感染、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等功能。本研究提示MM患者NK細(xì)胞比正常人略降低，且差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可能與本組患者所處疾病時(shí)期有關(guān)，說(shuō)明本組患者機(jī)體抗腫瘤能力已經(jīng)被削弱，提示患者可能預(yù)后不良。

總之，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MM患者外周血淋巴細(xì)胞亞群變化可及時(shí)了解患者機(jī)體免疫狀態(tài)，通過(guò)監(jiān)測(cè)T細(xì)胞來(lái)觀察細(xì)胞免疫功能、通過(guò)監(jiān)測(cè)B細(xì)胞可觀察體液免疫功能，而NK細(xì)胞可反映機(jī)體抗腫瘤能力，從而及時(shí)掌握患者病情變化，為患者制定適合有效的診治方案及判斷預(yù)后提供可靠的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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收稿日期：2017-8-28；修回日期：2017-9-6

編輯/楊倩endprint