海棠果提取液對(duì)亞硝酸鹽清除作用的體外試驗(yàn)研究

陶銀華+石娜娜+高清山

摘要 本文研究了海棠果提取液對(duì)亞硝酸鹽的清除作用，通過(guò)正交試驗(yàn)研究了反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、添加量對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響。結(jié)果表明，當(dāng)反應(yīng)溫度為60 ℃、反應(yīng)時(shí)間為60 min、海棠果待測(cè)液添加量為10%時(shí)，亞硝酸鹽的清除率可達(dá)96.53%。

關(guān)鍵詞 海棠果；亞硝酸鹽；清除作用

中圖分類號(hào) TS201.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）02-0253-02

Study on Scavenging Effect of Malus prunifolia Extract on Nitrite in vitro

TAO Yin-hua SHI Na-na GAO Qing-shan

（Weifang Engineering Vocational College，Qingzhou Shandong 262500）

Abstract This paper studied the scavenging effect of Malus prunifolia extract on nitrite.The effect of reaction temperature，reaction time and amount on nitrite scavenging rate was studied by orthogonal experiment.The results showed that when the reaction temperature was 60 ℃，the reaction time was 60 min，Malus prunifolia liquid dosage was 10%，the nitrite scavenging rate could up to 96.53%.

Key words Malus prunifolia；nitrite；scavenging effect

海堂果（Malus prunifolia），原名紅厚殼，又名海棠木、瓊州海棠、君子樹(shù)等，為薔薇科喬木，分布于我國(guó)河北、山東、山西等省區(qū)。海棠果實(shí)中含有香豆素類、口山酮類、黃酮類、萜類等化合物[1]，具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌消炎、保護(hù)毛細(xì)血管等功能[2-6]。眾多學(xué)者對(duì)海棠果有效成分的含量[7]、活性物質(zhì)提取[8-9]、抗氧化活性[10]等方面進(jìn)行了深入的研究，但關(guān)于海棠果清除亞硝酸鹽的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本文研究了海棠果乙醇提取液清除亞硝酸鹽的能力，以期為海棠果的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗(yàn)材料：八棱海棠果（2016年10月采自濰坊工程職業(yè)學(xué)院校區(qū)）；蘆丁（試劑有限公司，純度99.9%）；抗壞血酸（AR）；亞硝酸鈉（AR），對(duì)氨基苯磺酸（AR），鹽酸萘己二胺（AR），檸檬酸（AR），鹽酸（AR）。試驗(yàn)儀器：UV-1600型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京瑞利分析公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 海棠果提取液的制備。新鮮海棠果去核，切塊，800 W、50 s微波滅酶，打漿，準(zhǔn)確稱取5 g，加入80%乙醇25 mL，浸提30 min，4 000 r/min離心10 min，取上清液，重復(fù)2次，合并濾液。

1.2.2 體外亞硝酸鹽清除率的測(cè)定。準(zhǔn)確移取pH值為3.0的檸檬酸-檸檬酸二鈉緩沖液10.00 mL置于50 mL容量瓶中，分別加入100 μg/mL NaNO2溶液2.00 mL，一份加入一定量的海棠果待測(cè)液，搖勻，恒溫水浴反應(yīng)一定時(shí)間，另一份作空白試驗(yàn)。精密吸取上述反應(yīng)液2.00 mL，分別加入0.4%對(duì)氨基苯磺酸2 mL，搖勻，靜置5 min；再加入0.2%鹽酸萘乙二胺1 mL，搖勻，靜置15 min，于538 nm處測(cè)定吸光度，分別為A1、A0[11]。試驗(yàn)重復(fù)3 次。按下式計(jì)算海棠果液對(duì)亞硝酸鹽的清除率。

亞硝酸鹽清除率（%）=[（A0-A1）/A0]×100

式中：A0為未加海棠果待測(cè)液的標(biāo)準(zhǔn)管吸光值；A1為加入海棠果待測(cè)液的吸光值。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 反應(yīng)溫度對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響。設(shè)定反應(yīng)時(shí)間60 min，待測(cè)液用量10 mL，考察反應(yīng)溫度對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可以看出，亞硝酸鹽的清除率隨著反應(yīng)溫度的增加而增加，當(dāng)反應(yīng)溫度>50 ℃時(shí)，清除率增加較為明顯，當(dāng)反應(yīng)溫度<40 ℃和>60 ℃時(shí)，亞硝酸鹽清除率變化不明顯。因此，最佳反應(yīng)溫度為60 ℃。

2.1.2 反應(yīng)時(shí)間對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響。由圖2可以看出，隨著反應(yīng)時(shí)間的增加，亞硝酸鹽的清除率增加較快，當(dāng)反應(yīng)時(shí)間>60 min時(shí)，亞硝酸鹽清除率的增加變慢。因此，最佳反應(yīng)時(shí)間為60 min。

2.1.3 海棠果待測(cè)液用量對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響。由圖3可以看出，亞硝酸鹽的清除率隨著海棠果待測(cè)液添加量的增加而增加，但當(dāng)待測(cè)液的添加量>8 mL時(shí)，亞硝酸鹽清除率的斜率明顯降低，亞硝酸鹽清除率提高幅度變緩。考慮到溶劑回收及體系穩(wěn)定等因素，確定最佳待測(cè)液添加量為8 mL。

2.2 正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)之上，設(shè)計(jì)3因素3水平的L9（33）正交試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。

由表2、3可以看出，各因素對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響大小依次為反應(yīng)量>反應(yīng)時(shí)間>反應(yīng)溫度，清除亞硝酸鹽的最佳條件為反應(yīng)溫度60 ℃、反應(yīng)時(shí)間60 min、海棠果提取液添加量10%。經(jīng)驗(yàn)證，該條件下亞硝酸鹽的清除率可達(dá)96.53%。

3 結(jié)論

通過(guò)單因素試驗(yàn)，考察了反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、海棠果提取液對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響，并在單因素確定的范圍內(nèi)，通過(guò)正交試驗(yàn)考察了各因素對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響大小，各因素對(duì)亞硝酸鹽清除率的影響大小為反應(yīng)量>反應(yīng)時(shí)間>反應(yīng)溫度，確定了最佳清除條件為反應(yīng)溫度60 ℃、反應(yīng)時(shí)間60 min、海棠果待測(cè)液添加量10%。endprint

4 參考文獻(xiàn)

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