鹽酸克倫特羅膠體金快速檢測試劑盒質量研究

◎ 趙才敏，李 濤，蔣 麗，楊昌彪，李 莎，汪 勛，曹虎靈

（1.畢節市食品藥品稽查局，貴州 畢節 551700；2.貴州省流通環節食品安全檢驗中心，貴州 貴陽 550000；3.貴州省分析測試研究院，貴州 貴陽 550000；4.畢節市食品藥品檢測所，貴州 畢節 551700）

Zhao Caimin1， Li Tao2， Jiang Li1， Yang Changbiao3， Li Sha4， Wang Xun4， Cao Huling4

(1.Bijie Food and Drug Inspectorate， Bijie 551700， China；2.Guizhou Food Safety Inspection Center for Circulation， GuiYang 550000， China；3.Guizhou Provincial Institute of Analysis and Testing， GuiYang 550000， China；4.Bijie Food and Drug Testing Institute， Bijie 551700， China)

鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CLB），俗名瘦肉精，屬于β-腎上腺受體興奮劑[1]，因其能加強脂肪分解促進蛋白質合成加快畜禽增長速度[2]，曾被用做養殖促進劑[3]，對人體有蓄積性毒性，臨床中毒表現為心動過速、低血鉀、肌肉震顫等，我國已于1997年嚴令禁止使用[4]。本研究選取3種市售同批次鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測試劑盒（D、M、A），引入金標讀數儀作為儀器確證[5-6]，對其最小檢出濃度、特異性、假陽性率、假陰性率等方面進行研究[7-9]，通過分析3種市售同批次鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測產品（試劑盒）對鹽酸克倫特羅標準溶液和陰性豬肉加標樣本的快速檢測結果，比較3種市售鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測試劑盒的質量，篩選出質量優異的鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測試劑盒，用于畜禽肉屠宰點和農貿市場豬肉中的鹽酸克倫特羅檢測。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

天平（感量0.01 g、0.000 1 g），恒溫水浴鍋，15 mL離心管，移液槍（量程1 000μL、200 μL），智云達CGT-3100膠體金讀卡儀，安捷倫高效液相色譜-串聯質譜聯用儀[配有電噴霧離子源（ESI）]，計時器，室溫溫度計，臺式低速離心機，超低溫冰柜，智云達CGT-3100膠體金讀卡儀，鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測試劑盒：品牌D檢出限0.5 ng·g-1，品牌M檢出限 3 ng·g-1，品牌 A 檢出限 3 ng·g-1。

1.2 實驗方法

1.2.1 陰性樣品制備

取經GB/T 22286-2008《動物源性食品中多種β-受體激動劑殘留量的測定 液相色譜串聯質譜法》檢測鹽酸克倫特羅未檢出的陰性豬肉樣品，去皮去脂肪，粉碎，冷凍保存待用。

1.2.2 鹽酸克倫特羅標準溶液配制及檢測

用烘干冷卻的干凈燒杯稱取鹽酸克倫特羅標準物質，超純水稀釋定容，配制成鹽酸克倫特羅標準溶液系列梯度[10]，用安捷倫高效液相色譜-串聯質譜聯用儀按照GB/T 22286-2008方法測定（平行測定3次），同時用D、M、A 3種鹽酸克倫特羅膠體金快速檢測卡進行檢測（平行測定6次），記錄結果后立即用金標讀數儀對3種檢測卡進行檢測。

1.2.3 陰性豬肉樣品加標檢測

按照快檢產品說明書，隨機選取陰性豬肉樣品12批次，按照3種試劑盒產品說明書稱樣于15 mL離心管中，每批次豬肉按照每個產品說明書稱樣4個，分為D，M、A 3組，共144個樣品，加入一定量事先配制好的鹽酸克倫特羅標準溶液（超純水介質），使樣品中所含標準物質濃度為快檢產品檢出限的0倍、0.5倍、1倍、2倍，按照產品說明書進行樣品前處理，檢測卡檢測并記錄后，立即用金標讀數儀對檢測卡進行檢測（經檢測卡檢測肉眼判定為無效反應時，不進行金標讀數儀檢測，每張檢測卡金標儀平行檢測2次）。

1.2.4 D產品空白檢測

對3種試劑盒中檢出限最小的D產品進行陰性空白標準溶液（純水）和陰性空白豬肉檢測，按照D產品的產品說明書進行樣品前處理后檢測卡檢測，記錄數據后立即用金標讀數儀對檢測卡進行檢測（每張檢測卡金標儀平行檢測2次）。

2 檢測結果

2.1 鹽酸克倫特羅標準溶液檢測結果

3種鹽酸克倫特羅膠體金快速檢測卡測定結果和金標讀數儀測定結果見表1和表2。為了避免肉眼對檢測結果的判讀所帶來的主觀誤差，故使用金標讀數儀對檢測卡上T線、C線進行光度檢測以確證。

表1 鹽酸克倫特羅標準溶液測定結果判定表（根據產品說明書肉眼判定）

表2 鹽酸克倫特羅標準溶液測定結果判定表（根據金標讀數儀判定）

2.2 陰性豬肉樣品加標樣測定結果

12批次陰性豬肉樣品加標檢測結果見表3。

表3 12批次陰性豬肉樣品加標檢測結果表

2.3 D產品空白檢測結果

D產品檢測空白鹽酸克倫特羅標準溶液陰性檢出率100%，假陽性率0%；D產品對20批次陰性豬肉樣品進行檢測，陰性檢出率100%，假陽性率0%。金標讀數儀檢測結果與D產品檢測卡肉眼判定結果100%一致。

3 分析與討論

豬肉檢測結果的假陰性率是由0.5倍檢出限、1倍檢出限、2倍檢出限檢出陰性結果占總陽性檢品的百分比表示，鹽酸克倫特羅標準檢測溶液的假陰性率是由最小檢出濃度的陰性檢出率表示，無效反應不計入總數只用于計算無效反應發生率，假陰性率+陽性檢出率=1，檢出陰性結果的陰性樣品數占總陰性樣品數的百分比即為特異性即陰性檢出率，最小檢出濃度即鹽酸克倫特羅快速檢測產品檢出陽性的最小濃度。對鹽酸克倫特羅標準溶液測定結果和陰性豬肉加標樣測定結果進行分析比較，結果見表4。

表4 鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析快速檢測產品性能分析表

3.1 比較3種鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析產品性能

如不考慮最小檢出濃度，D和M產品的檢測卡各項指標都最優，若考慮最小檢出濃度，則D產品檢測卡最優，其檢出限與GB/T 22286-2008方法檢出限都是0.5 μg·kg-1，用于檢測禁用物質鹽酸克倫特羅最科學合理。

3.2 3種鹽酸克倫特羅檢測產品在豬肉中的應用

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比較特異性、陽性檢出率、假陽性率、陰性檢出率、假陰性率可知，M鹽酸克倫特羅膠體金免疫層析產品的綜合性能最優。

3.3 金標讀數儀的輔助使用

金標讀數儀的輔助使用，降低了M、A檢測卡的最小檢出濃度，但卻提高了產品D的最小檢出濃度。主要原因是D、M、A對檢測結果的判定標準不同：M、A產品陽性判定標準是消線法，即檢測線T線不顯色，質控線C顯色；D產品陽性判定標準是比色法，T比C色淺或T不顯色。在實驗中，M、A檢測卡鹽酸克倫特羅標準溶液或者陰性豬肉加標樣均有出現反應T比C色淺的情形，因此使用消線法來進行結果判定不符合實際情況和使用需要。

實驗說明，M、A的產品檢測結果判定標準沒有D產品的判定標準優異，金標讀數儀的使用可以降低M、A的最小檢出濃度，可以避免D產品檢測出現假陽性。

3.4 3種產品在鹽酸克倫特羅標準溶液和豬肉樣品中的檢測結果

分析陽性檢出率和無效反應發生率可知，豬肉樣品基質對實驗存在一定的影響。