雞病毒性關節炎最新研究進展

張 寧 ，胡曉悅 ，韓 昱 ，盧軍霞 ，趙志強 ，趙博偉

（1.河北省畜牧獸醫研究所 071000；2.河北北方學院 075000；3.石家莊工程職業學院 050061；4.河北省畜牧站 050031）

雞病毒性關節炎 (Viral arthritis)是由禽呼腸孤病毒(Avian reovirus)引起的，臨床上以跗、趾關節腫大，腱鞘發炎，腓腸肌斷裂，跛行為主要特征。1954年Faheyt Crawley首次從有慢性呼吸道疾病的雞呼吸道內分離到禽呼腸孤病毒。美國、英格蘭、澳大利亞、意大利、日本、荷蘭、匈牙利等國均有報道，1985年我國王錫堃［1］等首次報道了雞病毒性關節炎。目前我國河北、山東、黑龍江、上海、四川、云南、湖北等多個省市地區都有該病的報道。因該病不僅會導致跋行、生長停滯，還可引起免疫抑制，增加霉形體、雞貧血因子、巴氏桿菌、大腸埃希氏桿菌、球蟲等感染的機會，嚴重危害養殖業的發展，故應引起我們的高度重視。

1 病原學

呼腸孤病毒是RNA病毒，呈二十面體對稱的雙層衣殼結構，無囊膜。病毒粒子直徑約為75nm，在氯化銫的浮密度為1.36～1.37g/mL。 ARV 對熱有抵抗力，能耐受 60℃ 8～10h，56℃ 能夠存活 22～24h 、37℃ 15～16周、4℃可以存活 3年以上、-63℃可以保存10年以上。半純化病毒于60℃5h條件下，其毒價降低，但并不完全使病毒失活。氯化鎂能夠增強病毒對熱的穩定性。ARV對乙醚不敏感，70%乙醇、0.5%有機碘和5%過氧化氫溶液可滅活病毒。

禽呼腸孤病毒各毒株之間存在大量的交叉反應，因此有些群不能作為獨立的血清型，病毒通常以抗原亞型存在。Wood［2］等對發現了11個血清型，各血清型毒株之間存在有很大程度的交叉中和關系。

2017年鐘麗［3］研究表明：不同地區、不同時間分離的流行毒株致病性不同。ARV病毒體內復制能力與其致病性存在正相關性；ARV體內復制能力并不是決定其致病性的唯一因素。某些基因片段單基因位點的突變可能會導致其致病性的不同，但具體位點仍需要進一步研究。

初次分離ARV一般用卵黃囊接種，在接種后3～5d雞胚死亡。ARV還可以在綠猴腎細胞（Vero）、豬腎細胞（PK）和貓腎細胞（CRFK）、兔腎(PK)、乳地鼠腎細胞（BHK-21/13）、佐治亞牛腎（GBK）、來自被誘導的纖維肉瘤的日本鴿細胞系(QT35)和雞淋巴母細胞內生長。

2 流行病學

雞和火雞是ARV的自然宿主。2017年我國尚麗元［4］報道了莫莫格保護區3例丹頂鶴發生病毒性關節炎的病例。ARV可通過與感染動物接觸水平傳播，也可通過雞胚垂直傳播。潛伏期的長短取決于病毒的致病型、宿主年齡和感染途徑。直接接觸和氣管內接種病毒，發病潛伏期分別為13d和9d。自然感染發病多見于4～7周齡雞，發病率可高達100%，但死亡率通常低于6%。

該病傳播迅速，一年四季均可發生，一般呈散發或地方性流行。有些感染雞群沒有典型的臨床癥狀，但可引起不同程度繼發感染，或使其他病毒、細菌、寄生蟲感染癥狀和病變加重，導致淘汰率和死亡率增加。

3 臨床癥狀及病理變化

ARV急性感染的主要特征是被感染雞跛行、關節腫脹、腱鞘炎、傳染性滑膜炎、生長停滯。急性感染的雞滑膜內發生充血或存在出血點，腱鞘和關節囊發生充血。慢性感染的雞關節腔內存在較少的滲出物，腱鞘慢性纖維化，趾向后彎曲，跗關節軟骨潰爛，伴發肉芽組織的生成。心肌纖維之間的異嗜細胞浸潤，肝臟、腎臟、脾臟腫大，有些可見壞死灶。

4 診斷檢測

通過感染雞跛行、跗趾關節腫大等癥狀及肝脾腫大、滑膜細胞的萎縮及增生、心臟組織內異嗜細胞浸潤等病理變化可作出初步診斷。但由于有些雞感染ARV后不表現典型的臨床癥狀和病理變化，而且該病與維生素E和硒缺乏癥、痛風等病的臨床癥狀相似，所以確診需要進一步實驗室檢測。

實驗室檢測雞病毒性關節炎主要有以下幾種方法：

4.1 病原學檢測方法

病毒分離雖然耗時較長，但檢測結果準確。可用病雞的組織懸液、全血、血漿或其他易感的組織培養物，接種6～7日齡 SPF雞胚卵黃囊，接種后 3～5d雞胚胎出現死亡 ，胚胎明顯出血或紫紅，肝呈綠色，脾臟腫大。若通過尿囊接種10日齡SPF雞胚，接種后，雞胚的死亡規律基本和卵黃囊接種結果基本一致。取接種致死的雞胚絨毛尿囊膜或病變細胞做切片，電鏡下可觀察到胞漿內包涵體和病毒呈晶格狀排列。

4.2 血清學檢測方法

從可疑分離物接種或自然感染雞血清中檢測到抗體或ARV抗原，采用ELISA、瓊脂擴散實驗、間接免疫熒光實驗等可從感染雞血清中檢測到特異性抗體。

2007年陳元坤［5］以差速離心純化的雞關節炎病毒(ARV)作為包被抗原,建立了檢測 ARV抗體的間接 ELISA方法，確定了抗原最佳包被濃度為252 ug/mL，1%BSA封閉1.5h，血清最佳工作濃度為1∶160，37℃反應1.5h，酶標兔抗雞的稀釋度為1∶5000，37℃作用1h，底物37℃作用15min。所建立的方法與雞新城疫、傳染性支氣管炎、支原體的陽性血清無交叉反應。

2013年謝志勤［6］等用克隆的雜交瘤細胞株制備 ARV的單克隆抗體，并用此抗體作為包被抗體，成功建立了雙抗夾心ELISA檢測方法，檢測敏感性達到 5×10-5ug/uL的病毒。

2014年尹春紅［7］應用純化的σB和σC蛋白作為包被抗原建立了ELISA檢測方法，能夠準確地檢測到抗體的產生及消長規律，可以用于ARV的臨床診斷和免疫監測。

4.3 分子生物學檢測方法

目前,國內外一些學者利用聚合酶鏈式反應（PCR）對ARV的檢測取得了很大進展。試驗證明，PCR試驗檢測法具有靈敏度高、特異性強的特點，可診斷血清、感染組織中的ARV。

2013 年馬超英［8］根椐 GenBank中禽呼腸孤病毒(ARV)、禽白血病病毒(ALV)基因序列，設計2對引物，建立了兩種病毒的雙重RT-PCR。對同一樣品中的ARV、ALV核酸模板進行雙重RT-PCR擴增，結果可同時擴增ARV 485bp、ALV 673bp的特異性片段，而對其他5種禽病病原的PCR擴增結果均為陰性。敏感性試驗結果表明，該雙重RT-PCR技術能檢出10pg的ALV和10pg的ARV模板。用31份臨床病料對本研究雙重RT-PCR技術和單項RT-PCR技術進行對比驗證，結果顯示，兩者的總符合率為100%。

2014年曹琛福［9］等建立實時熒光RT-PCR方法檢測雞病毒性關節炎病原，針對特異性的禽呼腸孤病毒S1基因設計了1對引物及探針，建立了雞病毒性關節炎實時熒光RT-PCR檢測方法。結果顯示：該方法靈敏度高、特異性強、檢測時間短，可應用于雞病毒性關節炎的普查監測和檢驗檢疫。

2017年鐘麗［3］等建立的Real-time RT-PCR檢測方法，在1×1011×1010copies/μL范圍內具有良好的線性關系，靈敏度達到10 copies/μL，是常規PCR方法的100倍。

2018年鄭麗［10］等建立了ARV納米PCR檢測方法。結果顯示，該方法特異性好，僅從ARV核酸樣品可檢測到約332bp的特異性目的條帶，而對新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒等其他11種病原的檢測結果均為陰性。敏感性試驗結果顯示，該納米PCR方法能檢測到的最低核酸質量濃度為56pg/L，其靈敏度是普通PCR的10倍。ARV核酸被重復檢測3次，結果均一致。應用建立的納米PCR和病毒分離鑒定方法對臨床送檢的30份樣品進行檢測，兩種方法的符合率為100%。

5 防治

目前國內外尚沒有用于治療該病的方法，要以“預防為主，防治結合”為原則，做好各種免疫抑制病的預防接種工作，降低機體對禽呼腸孤病毒的易感性。

加強飼養管理，定期更換墊料，對雞舍內外及飼養工具定期進行消毒，消毒液可采用3%的火堿溶液進行舍內外消毒，或用0.5%有機碘液或百毒殺溶液1∶200稀釋帶雞噴霧消毒，飼養工具用10%的百毒殺等消毒藥物進行清洗消毒。

本病應以預防為主，疫苗免疫對預防雞病毒性關節炎效果明顯。中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所成功研制雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、雞病毒性關節炎、雞傳染性法氏囊炎病四聯油乳劑滅活疫苗，適用于各種不同的蛋雞和肉雞，接種10d后產生免疫力，免疫期可達5個月。

2009年王存偉［11］成功構建了介導禽呼腸孤病毒σC基因疫苗的重組減毒沙門氏菌株，制備出禽呼腸孤病毒σC基因疫苗，應用于雛雞，以 1.0×l09 CFU劑量 1次免疫6日齡雛雞，并于2周后進行二免，結果顯示，免疫2周后 ，可誘導機體產生ARVσC蛋白的特異血清Ig G抗體，差異顯著(P＜0.01)，二免后 3周進行攻毒試驗，保護率可達 66.7%，重組減毒沙門氏菌株對雛雞具有良好的免疫原性和安全性。

2012年徐延偉［12］等根據已公布的禽呼腸孤病毒 S1133毒株σC基因克隆至p PIC9K酵母表達載體當中，成功構建了重組酵母菌株p PIC9K-σC/GS115。 將畢赤酵母表達的重組σC蛋白用法國佐劑乳化后，免疫3周齡 SPF雞，并進行攻毒實驗，結果顯示，該重組σC蛋白可以阻止 ARV在體內的復制，且能夠對感染病毒進行清除。

2012年謝志勤［13］等構建了含禽呼腸孤病毒S1133毒株的σ3基因重組質粒 pc DNA3.1-σ3，免疫 7日齡SPF雛雞，同時設滅活 S1133、表達σ3蛋白及生理鹽水對照，二次加強免疫2周后，用S1133毒株進行攻毒，結果表明，pc DNA3.1-σ3處理 、滅活S1133處理 、表達σ3蛋白處理和生理鹽水處理的病毒檢出率分別為 7.4%、3.7%、11.1%、29.6% ，pc DNA-σ3處理與生理鹽水處理的差異顯著(P＜0.05)，但與滅活 S1133處理、表達σ3蛋白處理的差異不顯著(P＞0.05)。

另外，在診治時，盡管雞的病毒性關節炎病臨床癥狀明顯，但容易與其他疾病混淆，在診斷時，應綜合流行病學、臨床癥狀、剖檢變化及實驗室診斷的結果作出確診，及時進行處置，減少養殖戶的經濟損失。