張 波, 榮立蘋
(1.金陵科技學院園藝學院,江蘇南京 210038; 2.延邊大學農學院,吉林延吉 133002)
玉露(HaworthiacooperiBaker)為百合科十二卷屬多肉植物[1],其肉質葉通透似玉、晶瑩圓潤,如同藝術品般可擺放于陽臺或書桌上,因此,備受多肉植物愛好者的歡迎。玉露園藝品種繁多,因其葉色晶瑩剔透且富于變化而受到人們的追捧,從而導致行情火爆、價格偏高[2]。
霓虹燈玉露是多肉植物中的經典品種,源自南非原始種大衛玉露和冰燈玉露雜交的錦斑變異。該品種以大而透亮的窗、光滑呈紫黑色的葉片,以及色彩斑斕的錦斑而具有極高的觀賞價值。霓虹燈玉露目前主要采用扦插繁殖,較低的繁殖系數導致其僅有較少的市場存量,因而其價格持續走高[3]。研究表明,不同多肉植物根據自身特性,可以用不同的誘導方式以及增殖手法來進行組培擴繁[4]。本試驗以霓虹燈玉露為材料,試圖建立該珍稀多肉植物的組織培養與快速擴繁體系,為其規模化種苗繁殖提供技術支撐,滿足多肉愛好者的市場需求。
試驗材料為珍稀多肉植物霓虹燈玉露的幼嫩花莖。
1.2.1 無菌材料的獲得 將選取的培養材料用流水沖洗 2 h,用濾紙吸干水分后先用1%次氯酸鈉浸泡3 min,并用無菌水沖洗3~4次,然后用75%乙醇浸泡10 s,用無菌水沖洗3~4次。將消毒后的材料置于無菌濾紙上,剪切成 1 cm 左右的小段。
1.2.2 培養基的篩選 針對不同培養階段,分別設置9個不同類型的培養基,其中誘導培養基為MS+NAA(0.1、0.2、0.3 mg/L)+6-BA(2.0、3.0、4.0 mg/L);增殖培養基為MS+NAA(0.1、0.2、0.3 mg/L)+6-BA(0.5、0.8、1.0 mg/L);生根培養基為MS+NAA(0.1、0.2、0.3 mg/L)+6-BA(0.1、0.3、0.5 mg/L)。以MS培養基作對照,每種培養基接20瓶,每瓶接種3個,30 d統計生長情況,篩選出適合的誘導培養基、增殖培養基、生根培養基。其中誘導率=誘導出芽的外植體數/外植體總數×100%;增殖系數=產生的新苗數/接種苗數;生根率=生根苗數/接種苗數×100%;平均根數=總根數/接種苗數。
1.2.3 培養條件 培養基均添加蔗糖30 g/L、瓊脂5 g/L,調節pH值至5.8~5.9,配制分裝后121 ℃高壓滅菌20 min;培養溫度(24±1) ℃,光照時間10 h/d,光照度 2 000 lx。
將外植體接種到9種不同的誘導培養基上,7 d后發現部分外植體切面開始逐漸膨大,但是沒有愈傷組織形成;約21 d后逐漸形成綠色、蓬松的顆粒狀愈傷組織;約28 d后顆粒狀愈傷組織表面出現圓形隆起并陸續分化為幼小芽體,芽體逐步變大(圖1)。

從表1可以看出,不同濃度的NAA和6-BA配比對霓虹燈玉露花莖誘導分化有明顯影響,當培養基為MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 3.0 mg/L時,誘導率最高為97.78%,顯著高于其他培養基,是最適合霓虹燈玉露的誘導培養基。

表1 不同激素配比對霓虹燈玉露花莖誘導分化的影響
從表2可見,將誘導出的芽轉接到不同增殖培養基上,14 d 后開始形成叢生芽。培養基為MS+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA時,增殖倍數達到8.41,顯著高于除處理2以外的其他培養基。因此,MS+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L6-BA是最適宜霓虹燈玉露快速繁殖的增殖培養基。

表2 不同激素配比對霓虹燈玉露增殖培養的影響
將增殖培養產生的叢生苗分割,轉接到9種不同的生根培養基上,約30 d后開始生根,當NAA濃度為0.3 mg/L、6-BA 濃度為0.3 mg/L時,幼苗生根率最高,達100%,且每個苗可生成4~6條根(圖2、表3),是最佳的生根培養基。當苗生長健壯,在葉片頂端形成該品種所特有的“窗”(葉子頂端透明的部分)之后即可移栽。

打開瓶蓋煉苗3~5 d后,取出洗凈根部瓊脂,置于通風干燥處風干,然后栽入滅菌好的基質(草炭、蛭石體積比= 3 ∶1),待其長出新根。移栽后基質應保持濕潤,避免積水,以

表3 不同激素配比對霓虹燈玉露試管苗生根培養的影響
防爛根;玉露對光線較敏感,應放在低光照、陰涼的通風透氣處,避免陽光直射。每月可以施1次稀薄液肥,施肥時間宜選擇天氣晴朗的上午或傍晚。約30 d后玉露幼苗可形成新根并開始正常生長,成活率可達90%以上。
在進行植物的組織培養過程中,外植體的選擇非常關鍵,葉片、花序和種子均可。相關研究表明,花序為最適外植體,取材方便,不傷害母本,滅菌效果好,愈傷組織誘導率和叢生芽分化率高,獲得的種苗完全保留了母本的優良性狀[5-7]。本試驗也采用花序作為外植體進行快繁,并取得了成功,證明花序是十二卷屬玉露組培快繁較為理想的材料。
霓虹燈玉露作為一種珍稀的多肉植物,具有非常高的觀賞價值和市場前景。為了保持玉露的優良性狀,通常采用葉插和底座繁殖等無性繁殖方式,這些繁殖方法容易損害母本,且繁殖系數小、繁殖速度慢,導致玉露價格居高不下[8-9]。組織培養是快速繁殖的最有效方法[7]。本研究利用組織培養方法成功獲得了霓虹燈玉露的組培苗,建立了優質組培苗工廠化生產程序,能批量供應優質再生種苗;同時為玉露系多肉植物的組培苗規模化生產提供了參考,具有較好應用前景。