皂布葉提取物抗痛風(fēng)作用研究

劉安韜　張婷　梁紅

[摘要]目的研究皂布葉提取物抗痛風(fēng)作用。方法采用小鼠腹腔注射次黃嘌呤建立高尿酸血癥模型，觀察造模后皂布葉提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠及正常小鼠血清尿酸水平的影響；給大鼠足跖注射微晶型尿酸鈉結(jié)晶（MSU），復(fù)制痛風(fēng)性炎癥模型，觀察皂布葉提取物對(duì)痛風(fēng)性炎癥的影響；二甲苯耳廓腫脹法觀察皂布葉提取物的抗炎作用；熱板法、扭體法觀察皂布葉提取物的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果與模型組相比，皂布葉提取物在高劑量和中劑量時(shí)（10.0g藥材/kg體重、2.5g藥材/kg體重），對(duì)正常小鼠尿酸水平無明顯影響，可以明顯降低高尿酸血癥模型小鼠的血液尿酸濃度；對(duì)大鼠足跖腫脹有明顯抑制作用，可顯著抑制由二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹；可提高小鼠熱板痛閾值及減少由醋酸引起的扭體反應(yīng)次數(shù)。結(jié)論皂布葉提取物能降低高尿酸血癥小鼠尿酸水平，抗痛風(fēng)性炎癥，以及具有鎮(zhèn)痛作用。

[關(guān)鍵詞]皂布葉；痛風(fēng)；尿酸；痛風(fēng)性炎癥；鎮(zhèn)痛

[中圖分類號(hào)]R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2095-0616（2017）17-40-04

皂布葉為鼠李科植物尼泊爾鼠李Rhamnusnapelensis（Wall.）Laws.的全株。別名葉青、纖序鼠李，泡角等。本品味澀；微甘；平。具有祛風(fēng)除濕，利水消脹之功效。主治風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，慢性肝炎，肝硬化腹水等病癥。皂布葉為少數(shù)民族常用中草藥，在民間常用來治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、濕疹疥瘡和癬疾等癥，葉子常用來治療毒蛇咬傷，水火燙傷等癥。黃興以大風(fēng)藥為主要原料制成的中藥，經(jīng)長(zhǎng)期臨床觀察，發(fā)現(xiàn)其有提高免疫功能，軟化骨刺的作用，對(duì)骨質(zhì)增生、風(fēng)濕病有效率達(dá)95%以上，且無毒副作用。為了～--步開發(fā)利用皂布葉資源，在對(duì)該藥材進(jìn)行顯微鑒別的基礎(chǔ)上，對(duì)皂布葉抗痛風(fēng)作用進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料

醋酸地塞米松，重慶西部制藥有限責(zé)任公司；秋水仙堿，西雙版納藥業(yè)有限責(zé)任公司；羅通定片，山西云鵬制藥有限公司；別嘌醇，重慶科瑞制藥有限責(zé)任公司；次黃嘌呤和尿酸，Sigma公司。

MSU的制備：取5g尿酸溶解于1000mL沸水中，調(diào)pH至7.4，緩慢攪拌，室溫冷卻，置于4℃冰箱重結(jié)晶24h，過濾得MSU。200℃高溫滅菌，臨用時(shí)配成100mg/mL的生理鹽水混懸液備用。

皂布葉水提物：皂布葉藥材，粉碎，稱取500g，加4L水提取3次，每次lh，過濾，濾液回收濃縮成膏，即得；試驗(yàn)藥物。

動(dòng)物：昆明種小鼠，體重為18～20g；Wistar雄性大鼠，體重為200～220g。由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK桂2009-0003。

選取雄性昆明種小鼠，體重18～22g，每組10只，隨機(jī)分組，即陽性對(duì)照組（別嘌醇，20mg/kg體重）、模型組、對(duì)照組、皂布葉提取物組（低、中、高劑量組，分別相當(dāng)于藥材2.5、5.0、10.0g/kg體重）。

大鼠隨機(jī)分組，每組10只，即對(duì)照組、模型組、別嘌呤醇（20mg/kg）陽性對(duì)照組、皂布葉水提物高、低劑量組（分別相當(dāng)于藥材10.0、2.5g/kg體重）。

儀器：分光光度計(jì)（722型），上海第三分析儀器廠（型號(hào)RB-200）；智能熱板儀，成都泰盟科技有限公司。

1.2方法

1.2.1皂布葉提取物對(duì)高尿酸血癥小鼠尿酸的影響 腹腔注射（ig.）正常對(duì)照組和模型對(duì)照組注射等容量蒸餾水，1次，d，連續(xù)10d。最后一次給藥1h后ig.次黃嘌呤600mg/kg，1h后眼球取血，3000r/min離心10min，取上清液，比色法測(cè)定尿酸濃度。

1.2.2皂布葉提取物對(duì)正常小鼠尿酸的影響 腹腔注射（ig.），正常對(duì)照組和模型對(duì)照組注射等容量蒸餾水，1次，d，連續(xù)10d。最后一次給藥1h后眼球取血，3000r/min離心10min，取上清液，比色法測(cè)定尿酸濃度。

1.2.3皂布葉提取物對(duì)大鼠足跖腫脹的作用 腹腔注射（ig.），正常對(duì)照組和模型對(duì)照組注射等容量蒸餾水，1次/d，連續(xù)10d。最后一次給藥1h后，在大鼠右后足跖皮下注射MSU（100mg/mL）0.15mL，觀察并測(cè)定注射前和注射后大鼠右后足跖腫脹情況及其周徑，1次/h，累計(jì)6h，計(jì)算腫脹率。足跖腫脹率=（造模后足趾周徑-造模前足趾周徑）/造模前足趾周徑×100%。

1.2.4皂布葉提取物對(duì)小鼠耳廓腫脹的作用 腹腔注射（ig.），正常對(duì)照組和模型對(duì)照組注射等容量蒸餾水，1次/d，連續(xù)10d。最后一次給藥后1h，用50μL二甲苯在小鼠左耳正反兩面涂抹，30min后處死小鼠，剪下雙耳，用打孔器在同一部位打下8mm圓耳片，稱重，計(jì)算腫脹度抑制率和腫脹率。腫脹率=（左耳重-右耳重），右耳重×100%。腫脹度抑制率=（給藥組腫脹度-對(duì)照組腫脹度），對(duì)照組腫脹度×100%。

1.2.5皂布葉提取物對(duì)小鼠痛閾的影響 腹腔注射（ig.），正常對(duì)照組和模型對(duì)照組注射等容量蒸餾水，1次/日，測(cè)定給藥后60min痛閾值。

1.2.6皂布葉提取物對(duì)小鼠扭體次數(shù)的影響 給藥1h后，取0.6%醋酸溶液0.2mL腹腔注射，5min后統(tǒng)計(jì)小鼠10min內(nèi)出現(xiàn)的扭體反應(yīng)次數(shù)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 11.0系統(tǒng)軟件處理數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用（x±s）表示，采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1皂布葉提取物對(duì)尿酸濃度的影響

2.1.1皂布葉提取物對(duì)小鼠尿酸的影響 與對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠尿酸濃度顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），說明高尿酸血癥小鼠模型造模成功。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，皂布葉提取物中、高劑量組和對(duì)照組比較，可明顯降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸濃度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.1.2皂布葉提取物對(duì)正常小鼠尿酸的作用 與對(duì)照組比較，皂布葉提取物各劑量組對(duì)正常小鼠尿酸濃度無明顯影響，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.2抗炎作用

2.2.1皂布葉提取物對(duì)大鼠足跖腫脹的影響 實(shí)驗(yàn)研究表明，和模型對(duì)照組比較，在造模后1h內(nèi)皂布葉提取物高、中劑量組，都能明顯抑制MSU引起的大鼠足跖腫脹，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.2.2皂布葉提取物對(duì)小鼠耳廓腫脹的作用 實(shí)驗(yàn)研究顯示，和對(duì)照組比較，皂布葉提取物高、中劑量組均明顯抑制小鼠耳廓腫脹，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

2.3鎮(zhèn)痛作用

2.3.1皂布葉提取物對(duì)小鼠痛閾的作用 皂布葉提取物中、高劑量組和對(duì)照組相比，能明顯提高小鼠熱板痛閾，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表5。

2.3.2皂布葉提取物小鼠扭體次數(shù)的作用 皂布葉提取物高、中劑量組和對(duì)照組比較，能明顯減少由醋酸引起的小鼠扭體次數(shù)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表6。

3討論

痛風(fēng)表現(xiàn)為血尿酸過高，是體內(nèi)排泄紊亂或嘌呤代謝所引起的疾病，同時(shí)伴有結(jié)締組織、關(guān)節(jié)和腎臟內(nèi)尿酸鈉結(jié)晶沉積，引發(fā)腎臟病變、關(guān)節(jié)炎癥和畸形和腎結(jié)石等一系列反應(yīng)，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛等癥狀。

血清尿酸水平升高是痛風(fēng)的生化基礎(chǔ)。尿酸前體物質(zhì)次黃嘌呤和腺嘌呤的含量增加或者腎小管尿酸的分泌受到抑制均會(huì)導(dǎo)致體內(nèi)尿酸含量增高。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠注射次黃嘌呤復(fù)制小鼠高尿酸血癥模型，并給高尿酸血癥小鼠灌胃皂布葉水提取物觀察其對(duì)尿酸水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，皂布葉水提取物在高劑量和中劑量時(shí)可以顯著降低高尿酸血癥小鼠的血液尿酸水平，對(duì)正常小鼠血清尿酸水平無顯著影響。

關(guān)節(jié)部位析出的MSU晶體是造成痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的化學(xué)物質(zhì)。因此本實(shí)驗(yàn)也使用了炎癥介質(zhì)MSU溶液注射到大鼠足趾皮下，制備痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型。實(shí)驗(yàn)研究表明，在造模后1 h內(nèi)皂布葉提取物中、高劑量組，都能明顯抑制MSU引發(fā)的大鼠足跖腫脹。

炎癥的初期以毛細(xì)血管通透性增高、滲出、水腫為主。本實(shí)驗(yàn)采用非特異性致炎因子二甲苯涂抹在小鼠的耳廓，會(huì)導(dǎo)致耳廓腫脹。結(jié)果顯示皂布葉提取物高劑量、中劑量組均顯著抑制由二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹，表明皂布葉水提取物能緩解急性炎癥反應(yīng)。疼痛是炎癥的一種癥狀，本實(shí)驗(yàn)采用了熱板法和扭體法兩種方法來觀察皂布葉對(duì)炎癥疼痛的緩解作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明皂布葉的高、中劑量均能顯著抑制由熱板所致的小鼠疼痛反應(yīng)和抑制小鼠的扭體次數(shù)，表明皂布葉水提取物具有中樞性鎮(zhèn)痛作用和對(duì)炎癥介質(zhì)所致的疼痛有明顯鎮(zhèn)痛作用。

綜上所述，皂布葉水提取物具有較好的抗痛風(fēng)作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，虎杖、大黃酸等植物中提取出來的一些蒽醌類成分有降尿酸效果，表現(xiàn)出一定的抗痛風(fēng)作用。鼠李科植物中含有的蒽醌類化學(xué)成分，可能是皂布葉抗痛風(fēng)作用的藥效成分。

（收稿日期：2017-07-04）