血清、尿液TWEAK對狼瘡性腎炎活動性的預(yù)測及其機制分析

李海英

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 醫(yī)學(xué)檢驗與病理中心，湖南 長沙 410007）

0 引言

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)為一種以青年女性為發(fā)病在主體的累及多臟器的自身免疫性炎癥性結(jié)締組織病，其誘發(fā)因素目前尚未明確，臨床醫(yī)學(xué)認(rèn)為，其為遺傳因素、環(huán)境因素及雌激素水平等多種因素共同作用下誘發(fā)的自身免疫性疾病。腎臟為 SLE的主要侵襲器官，患者的腎臟受累后而引發(fā)腎小球腎炎被稱為狼瘡性腎炎(LN)，對于LN的發(fā)病機制目前尚未見確切的報道，該病的病理學(xué)改變也呈現(xiàn)出多樣化。對于患者而言準(zhǔn)確的預(yù)測狼瘡性腎炎活動性，是提高患者生存質(zhì)量及預(yù)后效果的重要指標(biāo)[1]。因此為患者尋找可有效評價狼瘡性腎炎活動性的臨床指標(biāo)對患者的診斷及治療均具有重要的現(xiàn)實意義。作者為探討血清、尿液TWEAK對狼瘡性腎炎活動性的預(yù)測及其機制，將63例LN患者及15例正常參照者納入至本次研究中，觀察TWEAK于腎組織內(nèi)的表達，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2015年8月至2018年1月至我院接受干預(yù)治療的63例LN患者納入本次研究中，同時將15例正常參照者作為本次研究的對照數(shù)據(jù)。63例LN患者中包含男20例，女43例；患者年齡16-49歲，平均（36.2±10.6）歲，入選的狼瘡性腎炎患者均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會（2009年）修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)，狼瘡性腎炎臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)臨床檢驗（腎活檢病理證實、持續(xù)性蛋白尿及管型）診斷確診為SLE患者，入選的狼瘡性腎炎患者均接受了腎臟組織活檢，患者的病理可分成為Ⅲ型5例、Ⅳ型37例及21例Ⅴ型。同時選取15例體檢正常者納入研究的參照組中，參照組健康體檢者均無合并患者高血壓、糖尿病及其他慢性疾病，自身抗體檢測及各項生化指標(biāo)檢查均顯示陰性，其中包含男3例，女12例；患者年齡在19-36歲，平均（28.3±4.2）歲。入選的研究參與者均自愿簽署參與研究知情同意書。兩組的基本資料間比較無顯著的差異性（P＞0.05）。

1.2 方法

（1）收集相關(guān)指標(biāo)：入選的研究對象均接受血沉、血尿常規(guī)、免疫球蛋白、抗-dsDNA、肝腎功能、抗核抗體、補體成分C4及補體成分 C3等多項檢測。運用間接免疫熒光法（德國歐蒙公司提供試劑盒）對抗核抗體及抗-dsDNA進行半定量檢測；由我院人民醫(yī)院風(fēng)濕科實驗室檢測研究對象的自身抗體。根據(jù)患者的檢測結(jié)果及相應(yīng)的臨床表現(xiàn)評價研究對象的疾病活動指數(shù)(SLEDAI)評分；對腎穿刺組織檢驗標(biāo)本實施Masson 染色、免疫熒光、HE、PAS及PASM，運用光鏡及免疫熒光顯微鏡觀察研究入選者的腎組織活檢標(biāo)本，同時根據(jù)國際腎臟病協(xié)會的病理分類對入選患者進行分型，以Austin 半定量方法判定患者的慢性指數(shù)(chronic index，CI)及疾病活動性指數(shù)(activity in-dex，AI)。同時運用ELISA 試劑盒檢測入選者的血清、尿液內(nèi)的TWEAK及MCP-1水平。

（2）運用免疫組化活檢測入選者的腎組織：運用二甲苯脫蠟處理TWEAK的水平石蠟標(biāo)本，同時運用酒精水化。對TWEAK標(biāo)本分別進行微波及高壓抗原修復(fù)，在其中加入密度為0.3%的H2O2溶液，同時滴加正常的動物血清，靜置過夜，然后滴加一抗將其放置到溫度為4℃的環(huán)境下過夜，最后滴加鏈霉親和素（生物素化過氧化物酶復(fù)合物）及生物素化二抗；觀察DAB，確定顯色后，運用蘇木精進行復(fù)染，最后進行脫水及封片。免疫組的數(shù)據(jù)分析運用Image Pro-Plus 16.0圖像分析軟件進行，同時運用高倍鏡下累計光密度的平均值表示患者的腎內(nèi)TWEAK水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

收集到的數(shù)據(jù)均經(jīng)過 SPSS 21.0軟件分析及統(tǒng)計，數(shù)據(jù)運用±s表示。組間比較運用One Way-ANO-VA進行分析，組間數(shù)據(jù)對比運用獨立樣本t檢驗；同時運用Pearson法對數(shù)據(jù)進行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 狼瘡性腎炎患者尿液及血清中的MCP-1及TWEAK水平

63例LN患者血清TWEAK值為（43.68±6.02）μg/L,MCP-1值 為（0.16±0.02）μg/L， 其 尿 液中 的 TWEAK值 為（47.86±12.05）μg/L,MCP-1值為（0.13±0.01）μg/L；15例正常參照者的血清 TWEAK值 為（15.26±2.04）μg/L,MCP-1值 為（0.06±0.02）μg/L， 其 尿 液 中 的 TWEAK值 為（17.15±2.06）μg/L,MCP-1值 為（0.06±0.02）μg/L；由此可見，狼瘡性腎炎患者尿液及血清中的MCP-1及TWEAK水平均顯著高于正常參照者，兩組數(shù)據(jù)間對比差異性顯著（P＜0.05)。

2.2 TWEAK 在腎組織中的表達

正常參照者中的腎臟小管上皮細胞鮮見腎小球表達，但呈現(xiàn)顯著的TWEAK表達；LN患者中腎小管呈現(xiàn)顯著增強，腎小球的表達明顯增加，其腎內(nèi)TWEAK表達水平與正常參照者相比顯著上升(P＜0.05)，Ⅳ型的上升程度更加明顯(P＜0.05)；患者血清中的TWEAK水平和狼瘡性腎炎患者的活動指數(shù)(SLEDAI)評分為正相關(guān)性(r=0.565，P＜0.05)，同時和補體C3間為負(fù)相關(guān)性(r=-0.542，P＜0.05)；狼瘡性腎炎患者尿液中的SLE-DAI評分與TWEAK之間呈現(xiàn)正相關(guān)性(r=0.843，P＜0.05)，同時和補體C3之間為負(fù)相關(guān)性(r=-0.584，P＜0.05)。

3 討論

TWEAK與狼瘡性腎炎的病理變化及發(fā)生機制之間存在緊密的關(guān)系，其在這個過程中發(fā)揮著重要的作用，對其進行研究可為臨判斷及指導(dǎo)狼瘡活動的程度提供有價值的參考[2]。本次研究結(jié)果顯示：正常參照者中的腎臟小管上皮細胞鮮見腎小球表達，但呈現(xiàn)顯著的TWEAK表達；LN患者中腎小管呈現(xiàn)顯著增強，腎小球的表達明顯增加，其腎內(nèi)TWEAK表達水平與正常參照者相比顯著上升(P＜0.05)，Ⅳ型的上升程度更加明顯(P＜0.05)[3-5]。為患者進行腎穿刺活檢病理檢查是臨床醫(yī)學(xué)公認(rèn)的診斷LN和評判疾病活動性的金標(biāo)準(zhǔn)，為最大限度減少穿刺對患者的創(chuàng)傷同時緩解患者的經(jīng)濟壓力，臨床可運用聯(lián)合檢測血清及尿液TWEAK水平的方法為患者診斷，同時有效抑制患者的TWEAK可能是臨床干預(yù)治療LN 患者的一個的新方向[6]。