茴香提取液對酒精中毒小鼠的解酒及腦組織抗氧化作用的研究

韓光順+梁華益+焦雯

【摘要】 目的：探究茴香提取液對酒精中毒小鼠的解酒及腦組織抗氧化的作用。方法：采用56度白酒按0.15 mL/10 g體重給予一次性灌胃法建立小鼠醉酒模型，取50只小鼠，每組10只為清醉解酒藥組、模型組、茴香低劑量組、茴香中劑量組和茴香高劑量組，以茴香高、中、低三種劑量分別進行預防性干預和治療性干預，分別觀察茴香對小鼠醉酒時間和醒酒時間的影響；另取50只小鼠，按體重隨機分為正常組、模型組、茴香低劑量組、茴香中劑量組和茴香高劑量組，每組10只，除正常組外，各組采用56度白酒按0.13 mL/（10 g·d）體重灌胃，并給予相應的藥物干預，30 d后，取腦組織勻漿，測腦組織谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活性。結果：與正常組相比，模型組腦指數、MDA水平明顯升高，SOD活性、GSH含量均明顯降低（P<0.01）；與模型組相比，茴香中、高劑量組MDA水平明顯降低，茴香高劑量組腦指數、SOD活性、GSH水平均明顯升高（P<0.05或0.01）；在預防醉酒實驗中茴香高劑量組和清醉解酒藥組醉酒時間明顯延長，醒酒時間明顯縮短，在治療醉酒實驗中茴香高劑量組和清醉解酒藥組醒酒時間均明顯縮短（P<0.05或0.01）。結論：茴香提取液具有一定的解酒促醒作用及降低酒精中毒小鼠腦組織氧化應激損傷。

【關鍵詞】 茴香； 酒精中毒； 腦組織； 氧化應激； 小鼠

【Abstract】 Objective：To explore the effect of Fennel on sober-up and anti-oxidation of brain tissue in alcoholism mice.Method：The mice model of drunkenness were established with 56° alcohol were single gavaged according to 0.15 mL/10 g.50 mice were divided into the Qingzui drug group，the model group，the high-dose Fennel group，the medium-dose Fennel group，the low-dose Fennel group according to the weight of 50 mice，preventive intervention and therapeutic intervention were taken in high，medium and low three doses，respectively observed the effect of Fennel on drunkenness and sober-up time.Another 50 mice were divided into the normal control group，the model group，the high-dose Fennel group，the medium-dose Fennel group，the low-dose Fennel group according to the weight of 50 mice，10 mice in each group，each group mice were given 56° alcohol[0.13 mL/（10 g·d）] except for the normal control group，and corresponding drugs were given，brain tissue were collected，homogenate，and determined the contents of malondialdehyde（MDA） and glutathione（GSH），superoxide dismutase（SOD） activity after 30 d.Result：Compared with the normal control group，brain index，MDA level increased apparently in the model group，SOD activity and GSH content decreased apparently（P<0.01）.Compared with the model group，MDA level decreased apparently in the medium-dose Fennel group and the high-dose Fennel group，brain index，SOD activity，GSH level apparently increased in the high-dose Fennel group（P<0.05 or 0.01）.The drunkenness time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently prolonged，sleeping time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently shortened in drunkenness prevention experiment，sleeping time of the high-dose Fennel group and the sober-up drug group apparently shortened in drunkenness treatment experiment（P<0.05 or 0.01）.Conclusion：Fennel certainly has the effect of sober-up and wake-promoting and can relieve oxidative stress injury in alcoholism mice brain tissue.endprint

【Key words】 Fennel； Alcoholism； Brain tissue； Oxidative stress； Mice

First-authors address：Youjiang Medical College for Nationalities，Baise 533000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.02.010

由酒精中毒和酒精依賴形成所引發的社會公共衛生問題和人體健康問題已經成為僅次于心腦血管疾病和腫瘤的第三大危險因素，對人體重要臟器都有所損害，但由于腦組織有很強的氧化代謝速率，酒精在腦組織引起的氧化應激損傷比較明顯，因此長期大量的飲酒可能會改變腦組織結構及形態，嚴重者可能引起神經細胞變性[1-3]。茴香是我國傳統中藥，主要成分含有黃酮、糖苷、甾醇及生物堿等多種類型的化合物[4-5]，具有胃理氣的功效，其果實、根、莖和葉均可供藥用，茴香具有抗氧化、抗肝纖維化及對肝損傷有保護作用[6-9]。本課題組前期研究發現，茴香可能通過提高肝組織對自由基的防御能力和提高乙醇脫氫酶活性加快乙醇代謝而減輕酒精對肝臟的損傷（另文發表），本研究旨在探討茴香提取液對酒精中毒小鼠的解酒及腦組織抗氧化的作用，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物 SPF級雄性小白鼠100只（生產許可證號SCXK桂2012-0003，生產批號0007545），體重（22±2）g，右江民族醫學院實驗動物中心提供，飼養環境溫度26～27 ℃，相對濕度40%～70%，自由飲食。

1.2 試劑與藥品 56度北京紅星二鍋頭（北京紅星股份有限公司，20161010），谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所（批號分別為20161107，20161112，20161109），清醉解酒藥（江西博誠藥業有限公司生產，20161006），茴香為莖葉部分（廣西百色市出售，曬干備用）。

1.3 主要儀器 722型可見光分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 茴香提取液的提取 茴香莖葉粉碎，取茴香100 g，加蒸餾水400 mL，浸泡40 min，分次放入微波爐微波處理，用1 000 mL水分兩次浸提，30 min/次，最后濃縮至含生藥1.0 g/mL。冰箱冷藏，按相應濃度用原液1.0 g/mL及分別稀釋為0.5 g/mL和0.25 g/mL。

1.4.2 茴香對急性酒精中毒小鼠醉酒、醒酒時間的影響

1.4.2.1 茴香預防干預對急性酒精中毒小鼠醉酒時間、醒酒時間的影響 取健康雄性小鼠50只，隨機分為5組，每組10只。模型組（蒸餾水）、清醉解酒組（200 mg/kg清醉解酒藥）、茴香低劑量組（2.5 g/kg）、茴香中劑量組（5 g/kg）、茴香高劑量組（10 g/kg）。模型組給予蒸餾水，其他各組給予相應的藥物灌胃干預，30 min后，按0.15 mL/10 g體重給予56度北京紅星二鍋頭白酒灌胃，觀察醉酒時間和醒酒時間（醉酒時間：從灌胃白酒到翻正反射消失時間，以1 min內翻正反射小于3次為醉酒；醒酒時間：翻正反射消失到翻正反射恢復）

1.4.2.2 茴香治療干預對急性酒精中毒小鼠醉酒時間、醒酒時間的影響 實驗分組、藥物干預及觀察指標同預防醉酒1.4.2.1，不同的是，給予白酒灌胃30 min后，再給予相應的藥物干預治療。

1.4.3 茴香對酒精中毒小鼠腦組織抗氧化作用的影響

1.4.3.1 分組與造模 取雄性小鼠50只，按體重隨機分組（每組10只）：正常組、模型組、茴香低劑量組（2.5 g/kg茴香）、茴香中劑量組（5 g/kg茴香）和茴香高劑量組（10 g/kg茴香）。灌白酒前，正常組和模型組給予蒸餾水、其余各組給予相應茴香劑量干預，1 h后，除正常組給予蒸餾水外，其余各組每天按0.13 mL/10 g給予56度白酒，分兩次灌胃，兩次給酒時間間隔4 h以上，藥物干預1次/d，共30 d。每周稱體重1次，以調整灌胃劑量。

1.4.3.2 指標檢測 末次給藥12 h內禁食，測小鼠體重、取腦組織稱重，計算腦指數，腦指數=（腦重量/小鼠體重）×100%。取腦組織制備成10%組織勻漿，取上清液，按試劑盒說明書用分光光度計測定并計算腦組織MDA、GSH的含量和SOD活性。

1.5 統計學處理 采用SPSS 20.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 茴香對酒精中毒小鼠腦指數的影響 與正常組相比，模型組腦指數明顯升高，差異有統計學意義（P<0.05，0.01）；與模型組相比，茴香高劑量組腦指數明顯降低，差異有統計學意義（P<0.05）。結果見表1。

2.2 茴香對急性酒精中毒小鼠醉酒時間、醒酒時間的影響 與模型組相比，在預防醉酒實驗中茴香高劑量組和清醉解酒藥組醉酒時間均明顯延長，醒酒時間明顯縮短，差異均有統計學意義（P<0.05或0.01）；在治療醉酒實驗中，茴香高劑量組和清醉解酒藥組醒酒時間均明顯縮短，差異均有統計學意義（P<0.05或0.01）。見表2。

2.3 茴香對酒精中毒小鼠腦組織SOD、MDA、GSH的影響 與正常組相比，模型組GSH含量、SOD活性均顯著降低，MDA含量明顯增加，差異均有統計學意義（P<0.01）；與模型組相比，茴香高劑量組SOD活性、GSH含量均明顯升高，差異均有統計學意義（P<0.05），茴香中、高劑量組MDA水平均明顯降低，差異均有統計學意義（P<0.05或0.01）。見表3。endprint

3 討論

有研究表明當機體大量飲酒后，血中酒精濃度就會增加，而且酒精的脂溶性相對較大，易穿透血腦屏障，會隨血液進入腦組織，腦組織酒精濃度的增高會刺激腦部邊緣系統、小腦、延髓等組織，從而使機體產生昏睡、記憶力下降等一系列神經中樞受抑制的行為表現[10-12]。本研究結果發現，茴香治療組小鼠腦指數明顯低于模型組，茴香預防性干預，可以明顯延長小鼠醉酒潛伏期，減少小鼠的醒酒時間；茴香干預性治療，也能明顯縮短小鼠的醒酒時間，減輕酒精對中樞神經系統的抑制作用。說明茴香具有一定的解酒、醒酒作用，并能減輕酒精中毒小鼠腦水腫。

有研究表明，酒精導致腦損傷主要與乙醇及其代謝產物導致腦血流量減少進而發生腦缺血、缺氧介導的腦組織發生氧化應激和脂質過氧化反應引起的自由基損害等有關[13-15]。腦組織中酒精濃度增高后，酒精在腦組織代謝產生的大量的氧自由基、活性氧等過氧化產物，同時還能促進機體發生脂質過氧化反應，進一步對腦組織造成損害 [16-17]，機體腦組織過氧化產物主要有SOD、GSH、MDA等，GSH可以清除體內過多的氧自由基等過氧化產物，是體內一種抗氧化劑，而且可以和酒精的代謝產物乙醛相結合，當酒精在腦組織代謝增加時，GSH含量就會相應減少，進一步加重腦組織的損傷。SOD是體內一種超氧化物歧化酶，SOD活力的高低可以反映機體抗氧化水平的高低。MDA是體內脂質過氧化代謝產物，MDA含量的多少可以間接的反應體內脂質過氧化的程度[18-20]。本實驗結果顯示，模型組MDA水平升高，SOD、GSH水平降低，而經過茴香治療后，腦組織SOD、GSH水平升高，MDA水平降低，說明茴香可以減輕酒精對腦組織的氧化應激損傷，從而對腦組織進行保護作用。

有研究表明，中草藥成分中的總黃酮類和異黃酮類化合物具有解酒和預防醉酒的功能，而茴香提取液中的主要成分就是總黃酮類和異黃酮類化合物[4]，由此推測，茴香中的總黃酮是茴香具有解酒和預防醉酒的主要物質。另外由于腦組織中酒精含量減少，氧自由基及脂質過氧化產物生成減少[21]，從而降低酒精對腦組織的氧化應激損傷。

綜上所述，茴香提取液可以通過增加腦組織超氧化物歧化酶活性，降低脂質代謝反應增加腦組織的抗氧化能力；茴香可能通過黃酮類物質的直接解酒作用以及通過提高乙醇脫氫酶活性達到對酒精中毒小鼠解酒和預防醉酒的作用。

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（收稿日期：2017-10-10） （本文編輯：程旭然）endprint