泰州地區雞沙門氏菌的分離鑒定及耐藥性調查

顏衛+安楠+魏雨瓊+周宇婷

摘要 沙門氏菌可引起雞白痢、禽傷寒和禽副傷寒等沙門氏菌病，對我國養雞業產生了巨大威脅。動物養殖中抗生素的廣泛使用導致了沙門氏菌耐藥性的出現，這給沙門氏菌病的防治增加了難度。本研究從泰州地區養殖場采集病死雞病料、健康家禽的泄殖腔樣本進行沙門氏菌株的分離鑒定，通過藥敏試驗了解耐藥狀況。結果表明，共分離樣品339份，活禽檢出率為2.3%，病料檢出率為8.5%。

關鍵詞 雞；沙門氏菌；耐藥性；檢出率；江蘇泰州

中圖分類號 S852.61 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）01-0225-01

Isolation，Identification and Drug Resistance of Chicken Salmonella in Taizhou Area

YAN Wei AN Nan WEI Yu-qiong ZHOU Yu-ting

（Jiangsu Agricultural and Animal Husbandry Science and Technology Vocational College，Taizhou Jiangsu 225300）

Abstract Salmonella can cause salmonellosis such as white diarrhea，fowl typhoid and paratyphoid，which cause a great threat to China′s chicken industry.The widespread use of antibiotics in animal husbandry has led to the emergence of salmonella resistance，which has made it more difficult to control salmonella.In this study，chickens were collected from farms in Taizhou，and the cloacal samples from healthy poultry were isolated and identified.Salmonella isolates were identified by drug susceptibility test.The results showed that a total of 339 samples were isolated，the detection rate of live poultry was 2.3% and the detection rate of the disease was 8.5%.

Key words chicken；salmonella；drug resistance；detection rate；Taizhou Jiangsu

雞源沙門氏菌病主要引起雞的敗血癥，會通過種蛋垂直傳播，導致蛋品質下降、雛雞先天帶菌等，對養殖業帶來巨大危害。現代養殖業中抗生素藥物的濫用問題越來越嚴重，增加了雞源沙門氏菌病的防治難度，加大了生產成本，也威脅到人體健康和公共衛生安全[1-3]。本文對泰州地區雞沙門氏菌進行分離鑒定和耐藥性調查，以期為養雞業提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 培養基與試劑耗材

SS瓊脂培養基、生化鑒定管和標準藥敏片購于杭州天和微生物試劑有限公司，PCR儀、離心機購于Eppendorf公司，凝膠成像系統購于Bio-Rad公司。

1.2 樣品來源

2016年11月至2017年7月，在泰州地區不同養殖場現場無菌采集病死雞的肝臟、脾臟等病料82份，以棉簽采集健康雞泄殖腔拭子257份進行沙門氏菌檢測。

1.3 沙門氏菌的分離

用無菌手術刀切開肝、脾組織，接種環挑取切面平板劃線接種于SS瓊脂培養基，泄殖腔拭子直接劃線接種于SS瓊脂培養基[1-2，4-5]，37 ℃培養12～16 h后，將透明或帶有黑點的疑似菌落進行純培養。

1.4 沙門氏菌的鑒定

1.4.1 革蘭氏染色鑒定。挑取SS瓊脂培養基純培養的菌落進行革蘭氏染色。在載玻片上滴1滴生理鹽水，用無菌接種環挑取單菌落涂片[1，6]，酒精燈固定，草酸銨結晶紫溶液染60 s，斜置流水緩慢沖洗，碘液染色1 min，斜置流水緩慢沖洗，乙醇脫色30 s，斜置流水緩慢沖洗，沙黃溶液染1 min，斜置流水緩慢沖洗，輕甩載玻片上多余水分，晾干，油鏡觀察[7]。

1.4.2 生化鑒定。用葡糖糖、麥芽糖、乳糖、庶糖、鼠李糖、甘露醇、果糖進行糖發酵試驗，再進行尿素酶、吲哚、硫化氨、MR、VP試驗[1，5]。37 ℃培養48 h，觀察結果。

1.4.3 PCR鑒定。采取煮沸法制備菌株DNA模板每株菌桃取3～5個純化的單菌落，用150 μL PBS制成懸菌液，100 ℃煮沸10 min，冰浴5 min，12 000 r/min離心1 min，取上清液作為DNA模板[6]。

擴增沙門氏菌的保守基因invA，擴增體系為25 μL，其中ddH2O 17.5 μL、10×PCR buffer 2.5 μL、Taq酶2 μL、10 μmoL引物1 μL、DNA模板1 μL。擴增程序：95 ℃ 5 min，95 ℃ 30 s、56 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s，35個循環，72 ℃ 5min。PCR擴增產物用1.0%瓊脂糖凝膠電泳分離，凝膠成像系統成像觀察，目的擴增片段為373 bp。

1.5 沙門氏菌的耐藥性

選用臨床常用的13種藥物，分別為氨芐西林、阿莫西林/克拉維酸、頭孢曲松、頭孢他啶、氨曲南、慶大霉素、阿米卡星、鏈霉素、四環素、環丙沙星、萘啶酸、復方新諾明、磺胺，參照2010年美國CLSI的抗微生物藥物敏感性試驗操作方法和判斷標準，分別對沙門氏菌分離株進行藥物敏感性試驗[1]。endprint

2 結果與分析

2.1 沙門氏菌分離鑒定結果

由表1可知，82份死亡雞病料檢出陽性樣品7份，檢出率8.5%；257份健康雞泄殖腔拭子檢出陽性樣品6份，陽性率2.3%。

2.2 耐藥率

13株沙門氏菌的藥敏試驗結果如表2所示，分離菌對阿莫西林/克拉維酸、頭孢曲松、頭孢他啶、氨曲南、阿米卡星、環丙沙星敏感：對其他藥物均有耐藥性，尤其對四環素、氨芐西林、磺胺、鏈霉素、萘啶酸具有耐藥性，耐藥率分別為38.5%、46.2%、46.2%、53.8%、69.2%。

3 結論與討論

健康雞泄殖腔拭子沙門氏菌檢出率較低（2.3%），肝臟呈土黃色，部分有灰白色壞死灶，心臟上有結節的病雞沙門氏菌檢出率較高。本次試驗共分離樣品339份，活禽檢出率為2.3%，與薛俊龍等[7]的研究相似，病料檢出率為8.5%，可能是由于病料采集前養殖場已使用藥物進行治療。

為了降低沙門氏菌的耐藥性，必須嚴禁抗生素的濫用，治療沙門氏菌病時，最好先進行藥物敏感性試驗，篩選出高敏藥物后再進行治療。

硫酸鏈霉素作為氨基糖苷類的早期藥物，臨床用藥已數十年，已經產生了較強的耐藥性，臨床上治療雞沙門氏菌病時應避免使用硫酸鏈霉素[1]。萘啶酸為第1代喹諾酮類抗菌藥，本試驗有9株對萘啶酸耐藥。慶大霉素同為氨基糖甙類廣譜抗生素，對多種革蘭陰性菌及陽性菌都具有抑菌和殺菌作用，但腎毒性較強，不推薦使用。環丙沙星為合成的第3代喹諾酮類抗菌藥物，具廣譜抗菌活性，殺菌效果好。頭孢曲松為第3代頭孢菌素類抗生素，頭孢他啶為一種單酰胺環類的新型β-內酰胺抗生素。本次分離的沙門氏菌有6株對氨芐西林耐藥[1，6]，說明該藥不適合于臨床防治沙門氏菌。氨曲南雖然抗菌活性較好，但具有腎毒性、免疫原性弱以及青霉素類、頭孢菌素類交叉過敏少等特點[1-2]。

4 參考文獻

[1] 王菊梅.新疆部分地區雞源沙門氏菌分離鑒定與防治技術研究[D].烏魯木齊：新疆農業大學，2015.

[2] 方翟.湖北省雞源沙門氏菌的分離鑒定和耐藥性分析[D].武漢：華中農業大學，2014.

[3] 王菊梅，李雨軒，蘇戰強，等.禽源沙門氏菌的分離與鑒定[J].新疆畜牧業，2015（1）：33-34.

[4] 宋健，龔子桓，王蒙蒙，等.雞白痢沙門氏菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].黑龍江畜牧獸醫，2017（16）：110-112.

[5] 孫和梅.延慶縣柴雞幾白痢沙門氏菌病的調查及綜合防治[D].北京：中國農業科學院，2009.

[6] 楊曉林，陳英，余松城，等.1株鴿源雞桿菌復合群3的分離和鑒定[J].浙江大學學報（農業與生命科學版），2014，40（3）：249-256.

[7] 薛俊龍，田林君，張國權，等.山西省雞沙門氏菌病流行病學調查分析[J].山西農業科學.2010，38（9）：58-62.endprint