脫毒馬鈴薯試管苗無菌安全接種技術

胡振興+高龍梅+楊小麗+張玲+李益+李薇

摘要 結合多年脫毒馬鈴薯試管苗繁育實踐工作經驗，總結出一套無菌安全接種技術規程，包括接種準備、接（轉）苗、接種完畢后收尾，不但做到了接種安全有序、試管苗污染率低，而且效率高、操作快速、管理規范。

關鍵詞 脫毒馬鈴薯；試管苗；無菌；接種技術

中圖分類號 S532 文獻標識碼 B 文章編號 1007-5739（2018）01-0095-01

自國家實施馬鈴薯主糧化戰略以來，馬鈴薯在農業生產中的地位日益凸顯，其市場需求量呈高增長態勢。傳統的馬鈴薯生產多以母薯無性繁殖為主，這種繁殖方式不但生長周期長，無法滿足現代工廠化育苗的需求，而且容易受病毒侵染造成種性退化[1]。脫毒馬鈴薯的生產與推廣應用對提高馬鈴薯的生產水平、促進馬鈴薯產業的快速發展具有重要作用。

在多年的脫毒馬鈴薯試管苗繁育過程中，總結出了一套脫毒馬鈴薯試管苗無菌安全接種技術規程，不但做到了接種安全有序、試管苗污染率低，而且操作快速、管理規范，效果非常明顯。

1 接種準備工作

接種準備工作包括以下幾項：①接種室提前用甲醛和高錳酸鉀熏蒸消毒（每1 m3用40%甲醛10 mL倒入裝有高錳酸鉀5 g的容器內）；并強制過濾通風[2]。②用香皂或洗手液將手洗凈，更換工作服、鞋、防塵帽、口罩。用75%酒精或0.5%苯酚對超凈工作臺噴霧降塵消毒，接通超凈工作臺電源，打開電源開關、風機，打開紫外燈照射15～30 min[3]。③準備好消毒滅菌藥物、接種用苗、接種培養基、接種工具、酒精燈（在超凈工作臺外用漏斗添加酒精至1/2～2/3）。④關閉紫外燈，打開照明燈。⑤用75%酒精消毒雙手、用75%酒精棉（棉球不能太大、酒精不能太多）擦拭超凈工作臺的臺面和側壁以及放在超凈工作臺中的所有器具，將棉球及時移出超凈工作臺，稍后點燃酒精燈[4]。⑥將鑷子、剪刀、解剖刀等接種用器具在酒精燈火焰外焰上（不能太靠近酒精燈燈芯）進行灼燒滅菌，從頭至尾過火數遍，然后反復過火尖端處（不得少于5 s），擺放好讓其自然冷卻。⑦將滅好菌的無菌濾紙在超凈工作臺外褪去外包裝袋，在超凈工作臺上小心地打開包裝報紙，用滅過菌的鑷子將無菌濾紙取出放在離風窗10～20 cm處，不可太往外。去除第1張濾紙。將接種鑷子進行再次灼燒滅菌，然后擺放好冷卻待用。

2 接（轉）苗

2.1 取苗

在酒精燈火焰上前方打開培養瓶的瓶蓋/封口膜，瓶口對準酒精燈火焰外焰旋烤7～10 s，然后開始取苗，將取出的苗子放在無菌濾紙上。

取苗時，瓶口不要斜向外；如果不能一次取出其內的全部材料，要先把封口膜（瓶蓋）對著風源放在酒精燈的左前方，取苗后及時蓋上。

2.2 切苗

用鑷子和剪刀將植物材料在滅好菌的無菌濾紙上進行剪切，要求快速準確。將苗子切成帶1～2個葉片和腋芽的節段接種于培養基上[5]，在操作過程中，剪刀和鑷子都要在無菌濾紙斜上方操作，不可在其正上方操作。

2.3 接苗

在酒精燈火焰上前方打開培養瓶的瓶蓋（封口膜），封口膜放在酒精燈的左前方，將瓶口對準酒精燈火焰外焰旋烤7～10 s，烤完瓶口后，在酒精燈火焰前上方用鑷子將接種材料接種到新的培養基上，接完后瓶口對準酒精燈火焰外焰再次旋烤，然后及時封上封口膜[6]。接苗時，鑷子最好不要與瓶口接觸；組培苗在瓶內要排放整齊、均勻、美觀。注意：①接種過程中動作要小心謹慎，以防將酒精瓶或酒精燈碰倒碰翻；嚴禁將棉球點燃后置于酒精燈或酒精瓶下及附近；用后的棉球要及時移出超凈工作臺；嚴禁將有明火或過燙的接種工具放入酒精瓶。萬一發生意外，應及時用滅火器撲滅[7]。②轉接苗時，雙手不能離開超凈工作臺，接種過程中不宜說話、出大氣、咳嗽；③接種過程中手不能經過濾紙上方；接種工具不能移出超凈工作臺。④接種過程中要隨時對手進行消毒，鑷子和接種刀要隨時灼燒滅菌并冷卻待用，不可太熱；⑤每接完1瓶要換1次濾紙，對接種工具消1次毒。⑥接種后要及時標記，把品種代號、培養基類型、接種日期、個人編號標示到瓶上。

3 接種完畢后收尾工作

一是用酒精燈帽蓋滅酒精燈，嚴禁用嘴吹滅。二是把接種過程中產生的垃圾清理掉，把工作臺收拾干凈，臺上的物品擺放整齊。三是關閉風機、照明燈、電源開關，斷開電源。四是將瓶苗整齊有序地擺放在培養架上。五是將垃圾及其他物品帶出接種室。六是做好接種工作記錄。

4 參考文獻

[1] 吳玥琳，凌永勝，林金秀.馬鈴薯脫毒試管苗組織培養技術概述[J].農業科技通訊，2017（8）：238-241.

[2] 孟長軍.組培實驗室常見消毒方法優劣比較[J].中國園藝文摘，2012（8）：177-179.

[3] 秦曉萍.馬鈴薯脫毒苗組培快繁技術[J].中國種業，2015（4）：81-83.

[4] 朱廣廉.植物組織培養中的外植體滅菌[J].植物生理學通訊，1996，32（6）：444-449.

[5] 趙佐敏，艾勇.馬鈴薯組培脫毒試管苗繁育技術[J].中國馬鈴薯，2003，17（5）：301-304.

[6] 辛國斌.脫毒馬鈴薯實驗室擴繁技術的改進與應用[J].中國馬鈴薯，2002，16（4）：239-240.

[7] 劉進平，莫饒，吳繁花.組培工廠及植物組織培養實驗室的安全管理[J].農業與技術，2005，25（1）：125-129.