沙棘果渣總黃酮的降血脂及降血糖作用

孫 琛 馮 野 謝 培 宋忠興 唐志書

(1 陜西中醫(yī)藥大學/陜西省中藥資源產業(yè)化協(xié)同創(chuàng)新中心，咸陽，712083； 2 陜西省中藥基礎與新藥研究重點實驗室，咸陽，712046)

沙棘(HippophaerhamnoidesL.)又名酸刺、黑刺、醋柳，為胡頹子科(Elaegnaceae)沙棘屬(HippophaeL.)落葉灌木或小喬木[1]。我國是世界上沙棘資源最豐富的國家，占全世界沙棘資源的99%以上[2]。每年有大量的沙棘果用于生產果汁或者榨油，而含有豐富的黃酮類化合物和β-胡蘿卜素的果渣卻被作為廢棄物，極大地浪費了資源。有研究表明，沙棘果渣中的黃酮可以清除超氧陰離子自由基及羥自由基，其清除作用比維生素E還強，抗衰老作用明顯[3-4]、抗心血管疾病[5]、雌激素樣與抗雌激素樣的作用[6]、降血脂、抗腫瘤、防癌抗癌、抗骨質疏松、抗疲勞、調節(jié)免疫力[7-11]等作用。主要針對沙棘果渣總黃酮的降血脂及降血糖作用進行探討，旨在對沙棘果渣進行深加工，充分利用沙棘資源，變廢為寶。

近年來，隨著人們生活水平的不斷提高，高血脂、脂肪肝、高血糖等由飲食習慣而導致的疾病正在日益增加，目前除了加強鍛煉和控制飲食就是依靠藥物。而可以有效治療高血脂不良反應小的藥物還很匱乏。本實驗將通過建立高血脂、高血糖小鼠模型，以辛伐他丁及二甲雙胍為陽性對照藥，研究沙棘果渣總黃酮對高血脂小鼠的降血脂和降血糖作用，為以后進一步開發(fā)降血脂、降血糖保健品和藥物提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 健康雄性昆明種小鼠108只，清潔級，體質量18～25 g，購自西安交通大學醫(yī)學部實驗動物中心。動物許可證號：SCXK(陜)2012-003。

1.1.2 藥物 參照文獻[12]采用最佳提取工藝提取沙棘果渣總黃酮，即：利用超聲波輔助提取技術，乙醇體積分數(shù)60%，超聲功率250 W，提取時間40 min、料液比1∶50(g/mL)、提取2次；此條件下，沙棘果渣中總黃酮提取率為2.55%。提取總黃酮后加蒸餾水配制成沙棘總黃酮3個劑量組，分別為100、200、400 mg/kg，4 ℃保存?zhèn)溆?。辛伐他?simvastatin)：杭州默沙東制藥有限公司。

1.1.3 試劑與儀器 丙基硫氧嘧啶：武漢市合中生化制造有限公司；膽酸鈉：山東康勤生物科技有限公司；膽固醇：山東康勤生物科技有限公司；吐溫-80：上海備科化工有限公司。鏈脲佐菌素，美國Sigma。全自動生化分析儀，深圳邁瑞公司；電子天平，賽多利斯；TGL-20B離心機，上海雅程。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與模型制備 制備高脂合劑[13]高脂合劑由50%豬油、24%膽固醇、1%丙基硫氧嘧啶、5%膽酸鈉及20%吐溫-80組成。取50 g豬油置于燒杯中，加熱到100 ℃時，加入24 g膽固醇，溶化后充分攪勻，然后加入丙基硫氧嘧啶1 g和20 mL吐溫-80，充分攪拌均勻。取另一個燒杯，加入蒸餾水100 mL，加熱到60 ℃左右，加入5 g脫氧膽酸鈉，充分攪拌直至完全溶解。將2個燒杯中的溶液充分混勻，即制成脂肪合劑。取健康的雄性小鼠54只，在SPF實驗室適應1周后，隨機分出9只作為空白組，其他小鼠喂高脂合劑30 d，每10 d腹腔注射1.1%鏈脲佐菌素(110 mg/kg)，空白組注射等劑量的生理鹽水。于第31天禁食12 h，尾靜脈取血測其血糖值，血糖≥11.1 mol/L即為造模成功。將造模成功的小鼠根據(jù)血糖值及體質量分為模型組、總黃酮低劑量、總黃酮中劑量、總黃酮高劑量，二甲雙胍組。每天灌胃給藥，總黃酮低、中、高劑量(100、200、400 mg/kg)，二甲雙胍(125 mg/kg)。在實驗期間每7 d觀察血糖變化，并于實驗第21天禁食不禁水12 h，眼眶取血，測定血糖值。將實驗動物隨機分為6組，每組12只，即模型組、空白組、辛伐他丁組(陽性對照)、總黃酮低劑量組、總黃酮中劑量組、總黃酮高劑量組。

1.2.2 給藥方法 除空白組外，其他各組小鼠每天灌胃高脂合劑(10 mL/kg)，在每天灌胃高脂合劑的基礎上，每天對小鼠灌胃給藥劑量如下：沙棘果渣總黃酮低、中、高劑量(100、200、400 mg/kg)、辛伐他丁組(20 mg/kg)，空白組和模型組給予生理鹽水(20 mg/kg)，各組小鼠自由飲水、攝食，每隔1周記錄小鼠體質量1次，便于調整給藥劑量。

1.2.3 檢測指標與方法 連續(xù)給藥42 d，并于試驗第7、15、25天檢測血漿總膽固醇(TC)和三酰甘油(TG)，第40天末次給藥后，小鼠禁食不禁水12 h，眼眶取血，靜置后分離血清(3 500 r/min離心10 min)。檢測TC、TG、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。解剖后，檢測小鼠臟器指數(shù)。

2 結果

2.1 總膽固醇(TC)的變化 空白組TC含量穩(wěn)定，模型組隨著每天灌胃高脂合劑TC含量逐漸升高，并于第7天TC含量顯著高于空白組(P<0.05)，說明高血脂模型造模成功。沙棘果渣總黃酮各劑量組血漿TC含量和模型組比較顯著降低(P<0.01)，且存在劑量正相關。說明沙棘果渣總黃酮對高血脂模型小鼠血漿TC的升高有抑制作用，時間越長，劑量越高效果越好。見表1。

2.2 6組小鼠TG的變化 觀察實驗過程中TG的含量變化發(fā)現(xiàn)，喂予高脂飼料后15 d，血漿中的TG含量顯著升高(P<0.01)，說明高血脂癥模型造模成功。整個實驗過程中，和模型組比較，總黃酮各劑量的TG含量顯著降低(P<0.01)。說明沙棘果渣總黃酮可以抑制模型組小鼠的TG升高，給藥時間越長，劑量越高，效果越明顯。見表2。

2.3 6組低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平 經高脂飼料喂養(yǎng)后，小鼠LDL-C含量顯著升高(P<0.01)，HDL-C含量明顯降低，說明高血脂模型造模成功?？傸S酮低、中、高劑量組較模型組顯著降低(P<0.01)，從HDL-C的含量來看，和模型組比較總黃酮低、中、高劑量的HDL-C顯著升高。見表3。

表1 6組小鼠總膽固醇的變化

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

表2 6組小鼠三酰甘油(TG)的變化

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

表3 6組小鼠LDL-C、HDL-C的變化

注：與正常組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

2.4 各組小鼠體質量的變化 在實驗過程的40 d期間，各組小鼠的體質量均呈現(xiàn)逐漸增長的趨勢，模型小組體質量增長較快?？傸S酮各組小鼠增重值與空白對照組比較。見表4。

2.5 6組小鼠體臟器變化 沙棘果渣總黃酮對心、肝、脾、腎沒有太大影響。說明沙棘總黃酮不會傷及臟器，不良反應較少。見表5。

2.6 6組小鼠空腹血糖的變化 給藥前，高血糖小鼠各組血糖值與空白組比較差異顯著，說明高血糖小鼠造模成功。給藥21 d后，與模型組比較，陽性藥物二甲雙胍組和沙棘果渣總黃酮各劑量組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表6。

表4 6組小鼠體質量的變化

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

表5 6組小鼠體臟器指數(shù)的變化

表6 6組小鼠空腹血糖值變化

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

3 討論

將中藥廢棄物轉化為可利用或可再生資源，是中藥制造產業(yè)綠色化發(fā)展的有效途徑。藥渣是中藥制藥過程中產生的固體廢棄物,每年的產量高達數(shù)百萬噸,直接丟棄不僅污染環(huán)境,還會造成巨大的浪費,探索中藥藥渣的高值利用,開發(fā)具有高附加值的資源性產品極具研究意義與研究價值[14-15]。我們針對沙棘果渣的利用進行進一步研究，變廢為寶，開發(fā)具有高附加值的資源性產品。

現(xiàn)代研究表明，血脂過高，會引發(fā)冠心病及動脈粥樣硬化等心腦血管疾病，三酰甘油(TG)、血清總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等是反映脂質代謝的重要指標。高血糖及高血脂嚴重影響到人們的生活，高血脂是動脈粥樣硬化、冠心病的危險因素之一，高血糖會導致糖尿病，糖尿病會引發(fā)腎功能衰竭、視網膜病變及心腦血管疾病等。

由本實驗結果可以看出，沙棘果渣總黃酮可以降低高血脂小鼠的TC、TG和LDL-C含量，升高HDL-C含量由《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》及修訂案可知，血漿中TC、TG和HLD-C為調節(jié)血脂作用的必測指標，若其中兩項或兩項以上為陽性，則說明有調節(jié)血脂作用。由此可知，沙棘果渣總黃酮具有調節(jié)血脂的作用，呈現(xiàn)一定的量效關系。沙棘果渣總黃酮可以明顯降低高血糖小鼠的空腹血糖。并且沙棘果渣總黃酮對臟器無毒性，小鼠體質量維持。

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