重組人超氧化物岐化酶基因工程菌穩定性研究

李敏　侯增淼　李曉穎　何越

摘 要：目的：研究重組人超氧化物岐化酶畢赤酵母基因工程菌的遺傳穩定性。方法：基因工程菌連續傳代50次，每10代取樣保藏菌種，通過對菌株形態、菌落形態、質粒穩定性、目的基因的PCR鑒定，蛋白表達的SDS-PAGE鑒定來評價工程菌的穩定性。結果：在連續傳代50代的過程中，菌株、落形態與原始工程菌相比無明顯差異，質粒保有率高，PCR鑒定結果顯示，重組載體攜帶目的基因傳至50代未消失，SDS-PAGE結果表明，傳至50代蛋白表達量無明顯差異。結論：該工程菌有良好的遺傳穩定性。

關鍵詞：重組人超氧化物岐化酶；畢赤酵母工程菌；遺傳穩定性

中圖分類號：Q78 文獻標志碼：A 文章編號：2095-2945（2018）04-0011-02

Abstract： Objective： to study the genetic stability of recombinant human superoxide dismutase Pichia pastoris. Methods： the genetically engineered bacteria were subcultured for 50 times， and the preservation strains were sampled every 10 generations. The morphology of the strain， colony morphology， plasmid stability and target gene were identified by PCR. SDS-PAGE analysis of protein expression was used to evaluate the stability of engineering bacteria. Results： there was no significant difference in the strain and colony morphology between the original engineering strain and the original engineering strain in the course of successive subculture for 50 generations. The plasmid retention rate was higher than that of the original engineering strain. The results of PCR identification showed that the plasmid retention rate was high. The result of SDS-PAGE showed that there was no significant difference in the expression of protein from the recombinant vector to the 50th generation. Conclusion： the engineering strain has good genetic stability.

Keywords： recombinant human superoxide dismutase； engineered Pichia pastoris； genetic stability

超氧化物歧化酶是生物體防御氧化損傷的一種十分重要的生物酶，具有清除體內氧自由基的能力，能較好地抵御氧自由基和其他氧化物自由基對細胞質膜的毒性[1]，在機體保護方面起重要作用，在醫藥與化妝品方面有很好的應用前景。巴斯德畢赤酵母具有許多其他蛋白表達系統所不具備的優點，在表達產物的加工、外分秘、翻譯后修飾以及糖基化修飾等方面有明顯的優勢，現已廣泛用于外源蛋白的表達[2-3]。由于巴斯德畢赤酵母自身分泌的蛋白非常少，且培養基中不含其他蛋白，分泌的外源蛋白占了培養液中蛋白的絕大部分，十分有利于蛋白的分離和純化[4-6]。實驗室以pPIC9K為載體，成功將人超氧化物歧化酶基因轉入巴斯德畢赤酵母GS115，構建了人超氧化物岐化酶畢赤酵母工程菌株GS115-9K-SOD，該實驗旨在考察工程菌株的遺傳穩定性。……