支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞亞群及腫瘤標志物檢測在肺癌診斷中的應用價值

朱鳳嬌+潘連連+王傳捷+葉軍輝

[摘要] 目的 探討支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞亞群及腫瘤標志物檢測在肺癌診斷中的應用價值。 方法 選取50例在我院就診的肺癌患者為觀察組，并選取同期在我院就診的肺部良性病變患者30例為對照組。兩組患者均予以行支氣管肺泡灌洗，收集支氣管肺泡灌洗液檢測血清T淋巴細胞亞群、腫瘤標志物癌胚抗原（CEA）、細胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）及鱗狀細胞癌相關抗原（SCC）。觀察并比較兩組肺泡灌洗液T淋巴細胞亞群及腫瘤標志物水平的差異。 結果 觀察組患者支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞CD3+、CD4+水平明顯低于對照組，CD8+水平明顯高于對照組，CD4+/CD8+水平明顯低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05或P<0.01）；觀察組患者支氣管肺泡灌洗液腫瘤標志物CEA、CYFRA21-1、SCC 水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.01）。 結論 肺癌患者免疫功能低下，輔助性T淋巴細胞減少，細胞毒性T淋巴細胞增加，檢測支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞亞群及腫瘤標志物能為臨床診斷肺癌提供依據。

[關鍵詞] 肺癌；支氣管肺泡灌洗液；T淋巴細胞亞群；腫瘤標志物

[中圖分類號] R734.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2017）35-0132-04

[Abstract] Objective To explore the application value of T lymphocyte subsets and tumor markers in bronchoalveolar lavage fluid in the diagnosis of lung cancer. Methods 50 patients with lung cancer treated in our hospital were selected as observation group and 30 patients with benign lung lesions in our hospital in the same period were selected as control group. The patients in the two groups were treated withbronchoalveolar lavage， and thebronchoalveolar lavage fluid was collected to detect serum T lymphocyte subsets， tumor markers including carcinoembryonic antigen（CEA）， cytokeratin 19 fragment（CYFRA21-1） and squamous cell carcinoma related antigen（SCC）. The differences of T lymphocyte subsets and tumor markers in the bronchoalveolar lavage fluid between the two groups were observed and compared. Results The levels of CD3+ and CD4+ in T lymphocytes ofbronchoalveolar lavage fluid in the observation group were significantly lower than those in the control group. The level of CD8+ in the observation group was significantly higher than that in the control group， the level of CD4+/CD8+ was lower than that in control group， and the differences were significant between the two groups（P<0.05 or P<0.01）. The levels of the tumor markers including CEA， CYFRA21-1 and SCC in the bronchoalveolar lavage fluid of the observation group were significantly higher than those in the control group， and the differences were significant（P<0.01）. Conclusion The lung cancer patients have low immune function， decreasedhelper T lymphocytes， increased cytotoxic T lymphocytes. Detection of T lymphocyte subsets and tumor markers in bronchoalveolar lavage fluid can provide the basis for clinical diagnosis of lung cancer.

[Key words] Lung cancer； Bronchoalveolar lavage fluid； T lymphocyte subsets； Tumor markers

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發病率高、病死率高，有研究顯示肺癌的5年生存率不到15%[1]。早期診斷與治療是治療肺癌的關鍵，但目前臨床上缺乏特異性的檢查手段，臨床上常通過X線、CT和磁共振等影像學檢查進行初步診斷，但確診有賴于腫塊穿刺活檢或手術切下的標本行病理檢查，而通過穿刺活檢可能造成腫瘤細胞擴散，并且手術創傷較大，部分患者可能并不需手術治療，只需放化療進行治療，故限制了臨床治療[2]。支氣管肺泡灌洗技術是通過支氣管鏡進行的無創操作技術，經過反復以無菌生理鹽水灌洗、回收，灌洗液中含有支氣管和肺泡脫落的細胞，能夠獲得下呼吸道病變的性質特點和活動程度，近年來逐漸應用于肺部腫瘤的診斷及治療中[3-5]。本文探討支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞亞群及腫瘤標志物水平對肺癌的診斷價值。endprint

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2014年1月～2016年1月期間在我院就診的肺癌患者共50例為觀察組。納入標準：均根據穿刺或術后病理結果證實符合原發性肺癌診斷。排除標準：①合并其他肺部疾病或其他惡性腫瘤肺轉移；②合并嚴重的循環系統、消化系統、血液系統疾病；③不愿接受支氣管鏡檢查。其中男36例、女14例；年齡54～76歲，平均（65.2±5.7）歲；按病理分為：小細胞肺癌9例（18.00%）、鱗癌27例（54.00%）、腺癌14例（28.00%）；按位置分為：左肺17例（34.00%）、右肺18例（36.00%）、兩肺15例（30.00%）；按結節多少分：單發21例（42.00%）、多發29例（58.00%）；根據TNM分期分為：Ⅰa期3例，Ⅰb期3例，Ⅱa期8例，Ⅱb期7例，Ⅲa期12例，Ⅲb期14例，Ⅳ期3例。選取同期在我院就診的肺部良性病變患者30例為對照組，所有患者均通過細菌學、影像學或病理學等檢查方法明確診斷，其中男22例、女8例；年齡48～78歲，平均（64.5±5.5）歲；按肺部疾病分為：慢性阻塞性肺疾病13例（43.3%）、支氣管擴張9例（30.0%）、肺炎5例（16.7%）、肺結核3例（10.0%）。兩組患者的年齡、性別等一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究方案經我院倫理委員會批準通過，納入患者均知情同意，并簽署知情同意書。

1.2檢測方法

兩組患者均在局麻下行支氣管鏡（Olympus BF-1T-240型）檢查，根據影像學定位的病變部位，將支氣管鏡置于病變部位，使用生理鹽水進行反復灌洗，總量約為100 mL，回收灌洗液約50 mL，30 min內送檢支氣管肺泡灌洗液。將灌洗液過濾，去除黏液與雜質，采用離心機予以低溫1500 r/min離心約10 min，使用RP-MI1640培養液清洗后懸浮于加入10%小牛血清的培養液中，在37℃培養箱中培養1 h，采集細胞。使用抗CD3+、抗CD4+、抗CD8+、單克隆抗體進行染色后檢測T淋巴細胞亞群（美國BD FACSCalibur流式細胞儀）。使用放射免疫法檢測癌胚抗原（CEA）、細胞角蛋白19片段（CYFRA21-1），酶聯免疫法檢測鱗狀細胞癌相關抗原（SCC），所需試劑盒均采購自瑞士羅氏公司，操作程序嚴格按照試劑盒所附的說明書進行實驗操作。

1.3觀察指標

觀察并比較兩組支氣管肺泡灌洗液中T淋巴細胞亞群的變化，包括CD3+（68%～77%）、CD4+（41%～51%）和CD8+（23%～30%）水平以及CD4+/CD8+（1.4～2.0）的比值，并比較兩組腫瘤標志物CEA（0～5 ng/mL）、CYFRA21-1（0～3.3 ng/mL）和SCC（0～2.5 ng/mL）的水平。

1.4 統計學方法

采用SPSS17.0 for windows統計學軟件進行分析處理，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，各項數據服從正態分布，組間比較采用成組t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞亞群水平比較

觀察組患者支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞CD3+和CD4+水平明顯低于對照組，CD8+水平明顯高于對照組，CD4+/CD8+水平明顯低于對照組，差異均有統計學意義（P<0.05或P<0.01）（表1）。

2.2兩組患者支氣管肺泡灌洗液腫瘤標志物水平比較

觀察組患者支氣管肺泡灌洗液腫瘤標志物CEA、CYFRA21-1和SCC水平均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P<0.01）（表2）。

3討論

近年來，隨著經濟的發展，空氣污染不斷加重，肺癌患者逐年增多，在我國經濟發達區域，肺癌的發病率已躍居所有惡性腫瘤的第一位[6]。肺癌起病隱匿，早期常無臨床癥狀，有研究顯示超過50%的肺癌患者確診時已經是晚期，錯過最佳的治療時間，嚴重影響患者的預后[7，8]。目前臨床上診斷肺癌的輔助檢查較多，包括血清腫瘤標志、CT、磁共振、纖維支氣管鏡、肺穿刺活檢等[9-11]，其中纖維支氣管鏡活檢和刷檢是最主要的手段，但部分肺癌，特別是周圍型肺癌無法通過纖維支氣管鏡確診[12，13]。60年代后期隨著可曲性光纖維支氣管鏡的開發和應用，逐漸興起支氣管肺泡灌洗。自1974年Reynolds和 Newball報道支氣管肺泡灌洗技術以來，為研究某些肺疾病，特別是某些間質性肺疾病，如結節病、特發性肺纖維化（IPF）、過敏性肺泡炎、肺泡蛋白沉積癥、膠原血管病伴間質性肺疾病（CVD-ILD）、組織細胞增多癥、塵肺、肺損傷與修復及免疫受損患者的肺部感染等疾病，開辟了一個新的研究途徑和檢測手段，有學者甚至將支氣管肺泡灌洗液稱為“液體肺活檢”[14]。

支氣管肺泡灌洗技術具有無創性等優點，但灌洗液的檢測成分較多，其中檢測腫瘤標志物如CEA、CYFRA21-1、SCC等最為多見。CEA是一種蛋白多糖復合物，廣泛存在于內胚葉起源的腫瘤中，能反映人體多種腫瘤的存在[15]。CYFRA21-1是上皮細胞的結構蛋白之一，在惡性上皮細胞中由于腫瘤細胞的加速降解導致大量CYFRA21-1釋放[16，17]。SCC是一種糖蛋白存在于子宮頸、肺、頭頸等非角化癌的細胞中[18]。當肺惡性腫瘤發生時血清中3種腫瘤標志物將明顯升高，而肺泡灌洗液中3種腫瘤標志物的濃度更是血清中的數倍，其對肺癌的診斷價值已經得到臨床的廣泛認可[19]。本次研究也發現觀察組支氣管肺泡灌洗液腫瘤標志物CEA、CYFRA21-1和SCC 水平均高于對照組，與國內報道相近[20-22]。近年來有研究顯示肺癌會對患者的細胞免疫功能造成影響，患者會出現局部或全身免疫功能障礙，這與腫瘤的發生、發展密切相關[23-27]。T淋巴細胞是介導細胞免疫的重要因子，其包括輔助性T淋巴細胞CD3+、CD4+和細胞毒性淋巴細胞CD8+，其中輔助性T淋巴細胞具有殺傷腫瘤的作用，而細胞毒性T淋巴細胞能分泌免疫抑制因子，具有抑制效應性T細胞活化的作用，從而減少對腫瘤細胞的殺傷作用。楊國輝等[12]報道肺癌患者支氣管肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均降低，存在明顯的T淋巴細胞功能紊亂。而莫揚[27]報道肺癌患者Th水平下降，Th/Ts比值較正常人明顯下降。本研究結果顯示觀察組患者支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞CD3+、CD4+水平明顯低于對照組，CD8+水平明顯高于對照組，CD4+/CD8+水平明顯低于對照組。由此結果可以發現肺癌患者的輔助性T淋巴細胞CD3+、CD4+水平會出現下降，而細胞毒性T淋巴細胞CD8+會出現上升，本文認為這與肺癌患者免疫功能普遍低下相關，局部低下的免疫功能更加有利于腫瘤細胞的快速生長。而對于肺部良性病變患者，疾病往往不影響局部細胞免疫功能，因此肺泡灌洗液中T淋巴細胞水平處于正常水平。因此通過檢測支氣管肺泡灌洗液中T淋巴細胞及腫瘤標志物水平能有效地預測肺癌的發生與發展，為早期診斷肺癌提供有效的幫助。但本研究未對不同分期及不同病理類型肺癌患者的支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞及腫瘤標志物水平進行比較，在下一步研究中加以完善。endprint

總之，肺癌患者免疫功能低下，輔助性T淋巴細胞減少，細胞毒性T淋巴細胞增加，檢測支氣管肺泡灌洗液T淋巴細胞亞群及腫瘤標志物能為臨床診斷肺癌提供依據。

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（收稿日期：2017-08-30）endprint