胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤患者K-ras基因的突變

于　軍　王　峰　李開良　楊　蕾　曹振強　

(吉林大學第二醫院電診科，吉林　長春　130041)

1吉林省人民醫院肝膽胰外科2吉林大學中日聯誼醫院鏡檢科

胰腺導管內乳頭狀黏液性腫瘤(IPMN)是胰腺癌最重要及最常見的癌前病變之一，是一種相對良性腫瘤，術后預后較好〔1〕。但部分IPMN具有侵襲性及快速發展和預后差的特點，常規影像學與病理學檢測很難對這一類IPMN病例做出正確診斷及鑒別〔2〕。K-ras基因是一種原癌基因，其所在信號通路在調控細胞生長和惡性腫瘤轉化的過程中起重要作用。約20%人類腫瘤中都存在K-ras基因突變〔3〕。K-ras基因突變與胰腺癌的發病及預后密切相關〔4～6〕。有學者報道了IPMN樣本K-ras突變及與病理分型的關系，指出在IPMN樣本中存在K-ras突變，但突變率及與臨床相關性報道不一〔7～9〕。本研究分析IPMN病例標本K-ras基因的突變情況，探討其與相關臨床及病理特點的關聯性。

1　資料與方法

1.1標本資料標本資料及納入標準同文獻〔10〕，31例IPMN 患者組織標本來自吉林大學中日聯誼醫院2012年1月至2014年12月胰腺手術切除腫瘤患者。男16例(51.6%)，女15例(48.4%)，平均年齡63.9歲；臨床病理分型：胃型15例(48.39%)，腸型8例(25.81%)，胰膽管型7例(22.58%)，嗜酸細胞型1例(3.22%)；腫瘤向周邊組織浸潤情況：浸潤型7例(22.58%)，非浸潤型24例(77.42%)；分化程度：高分化14例(45.16%)、中分化9例(29.03%)、低分化8例(25.81%)；IPMN入組標準：以下3條中符合任意1條均可入組。①影像學檢查發現胰腺導管有擴張；②病理學檢查發現囊性擴張的導管內被覆黏液上皮或壺腹部有黏液溢出；③影像學檢查發現導管內具有乳頭狀增生腫瘤并伴導管擴張。擴張導管直徑≥1 cm。所有病理學類型及TNM分期均按照世界衛生組織(WHO)標準。

1.2K-ras基因突變檢測分析IPMN患者腫瘤石蠟組織切片(厚度10 μm)3片，應用二甲苯脫蠟后，無水乙醇清洗2次，晾干后，應用刀片采集腫瘤組織至1.5 ml離心管，應用石蠟組織DNA提取試劑盒(BIOMIGA)進行樣本DNA提取，應用紫外分光光度計在260 nm與280 nm測定OD值，計算含量與純度。應用K-ras基因突變檢測試劑盒(武漢友芝有生物技術有限公司)通過實時定量PCR儀(羅氏Lightcycler480)對提取DNA的K-ras基因突變情況進行檢測。

1.3統計學分析應用SPSS10.0 軟件進行Fisher檢驗。

2　結　果

31例IPMN患者組織中檢測出10例(32.26%)發生K-ras基因突變。10例K-ras基因突變中GGT(Gly)to GAT(Asp)6例；GGT(Gly) to GTT(Val)3例；GGT(Gly) to CGT(Arg)1例。其中，胰膽管型5例(71.4%)、胃型2例(13.3%)、腸型2例(25.0%)、嗜酸細胞型1例(100.0%)，各臨床分型差異顯著(P=0.022)；浸潤型6例(85.7%)顯著高于非浸潤型4例(16.7%，P=0.002)；高分化1例(7.1%)、中分化2例(22.2%)、低分化7例(87.5%)，不同分化類型差異顯著(P=0.000)。

3　討　論

內鏡逆行胰膽管造影通常被用于IPMN的臨床診斷〔11〕。然而，IPMN包括各種各樣的組織類型如腺瘤和腺癌，僅應用影像學診斷及病理學診斷評價惡性程度往往很難。因此，需要采用一些新的檢測方法包括基因檢查進一步完善IPMN診斷。K-ras基因突變位點常位于該基因2號外顯子的12號和13號密碼子上及3號外顯子的61號密碼子，其中常見突變形式為：G12C、G12R、G12S、G12V、G12D、G12A、G13V/D，占90%以上〔12〕。在本研究中K-ras基因突變主要以GGT(Gly) to GAT(Asp)突變為主。本研究突變率低于Kaino等〔8〕報道IPMN患者胰腺液中檢測K-ras 69%的突變率。本研究說明K-ras基因突變與IPMN的腫瘤組織浸潤及分化密切相關，通過該基因突變檢測可能為預測IPMN發生侵襲及惡性程度提供重要手段。

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