金鉆蔓綠絨的組培苗繁殖生產技術研究

周 霞，夏紅梅，賈永釗，徐葉挺，韓宏偉，王志明，廖志立

(1.新疆沃爾曼種業科技有限責任公司，新疆昌吉 8311002；2.新疆農業科學院園藝作物研究所，烏魯木齊 830091)

0 引 言

【研究意義】金鉆蔓綠絨(Philodendroncon-go)[1-3]又名金鉆原產南美洲，為熱帶和亞熱帶常見觀賞植物。屬多年生常綠草本陰生植物，觀賞期長栽培容易生命力極強，又具有凈化空氣的作用，在我國各地得到廣泛栽培。目前新疆金鉆蔓綠絨種苗一直是靠外地調運，其種苗質量參差不齊價格不穩定，葉片大遠途運輸易造成傷痕降低種苗的商品性。金鉆蔓綠絨種苗生產在新疆進行規模化生產，既能解決當前面臨的問題，又能不斷地推動新疆種苗生產的技術提升，保證市場的有序發展。【前人研究進展】目前國內對金鉆蔓綠絨的種苗組培研究較少[4,5]，結論也不盡相同，如陳麗文等[6]報道不定芽適宜增殖培養基為MS+6-BA 6.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L，申雯靖等[7]報道增殖培養基為MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA較好。這些方法都是先通過誘導愈傷，再由愈傷誘導不定芽來建立快繁體系的，用這種方法建立快繁體系較慢，而且組培苗生長及質量也會受到一定的影響，從而對組培苗的快繁生產也就不會很理想。【本研究切入點】研究最佳外植體取材部位，直接誘導不定芽，快速建立快繁體系；并根據金鉆蔓綠絨氣生根發達的生物特性，研究簡化培養程序的方法。【擬解決的關鍵問題】研究建立金鉆蔓綠絨快繁體系及簡化培養程序的方法，為金鉆蔓綠絨組培苗工廠化生產提供可靠的技術支撐。

1 材料與方法

1.1 材 料

在新疆沃爾曼種業科技有限責任公司溫室內金鉆蔓綠絨植株上，取一年生無病蟲害的健壯的莖段、葉柄作為外植體。

1.2 方 法

1.2.1 金鉆蔓綠絨外植體消毒

采回來的外植體，剪取莖段和葉柄，將氣生根處理干凈，放到洗潔精水中用小刷子刷洗干凈，放在流動的自來水中沖洗1 h。再進行滅菌處理，用75%的酒精和0.1%的升汞按1∶3的比例混合對外植體進行消毒，消毒時間設5、7、10 min三個處理，各接5瓶，每瓶接4個外植體，接種在MS+BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L誘導培養基中，每天光照12 h，光照強度為1 600～2 000 lx，培養溫度25～30℃，接種15 d后進行污染率統計。

1.2.2 誘導萌發金鉆蔓綠絨外植體

不同部位的外植體，接種于MS+NAA0.1 mg/L添加不同水平BA(0、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L)的培養基中，各接10瓶，每瓶接1個外植體。每天光照12 h，光照強度為1 600～2 000 lx,培養溫度25～30℃，接種30 d后統計誘導率。

1.2.3 金鉆蔓綠絨增殖培養基

誘導出的無菌苗，接種于MS+NAA0.1 mg/L添加不同水平BA(0、0.1、0.3、0.5、1.0 mg/L)的培養基中，各接5瓶，每瓶接1株(叢)。每天光照12 h，光照強度為3 000～5 000 lx，培養溫度24～28℃，接種30 d后統計增殖率。

1.2.4 金鉆蔓綠絨移栽基質

當增殖培養的瓶苗長到1.5～2 cm時，把1.5 cm及以上的帶氣生根的苗子切下來，然后用水洗凈根部的培養基，移栽到裝有不同基質(草炭、草炭與珍珠巖6∶1混合、蛭石、珍珠巖)的穴盤中，每種處理100株。前期置于空氣濕度80%以上，溫度控制在27～30℃。后期濕度可降低到60%左右，每3～4 d噴施一次多菌靈1 000倍液(50%可濕性粉劑)。待馴化20～25 d后逐漸撤去薄膜，進行種苗正常管理并統計成活率。

2 結果與分析

2.1 金鉆蔓綠絨外植體的滅菌效果

研究表明，外植體的不定芽誘導15 d后，不同滅菌時間對不同部位的滅菌效果有一定的差異，葉柄滅菌7 min與滅菌10 min比較差異極顯著，與滅菌5 min比較差異顯著，葉柄滅菌7 min，污染率為25%；而莖段滅菌時間7與5 min比較差異極顯著，與滅菌10 min比較差異顯著，莖段滅菌7 min，污染率僅為35%，所以葉柄、莖段滅菌時間以7 min為宜。表1

表1 不同消毒時間對不同部位外植體的滅菌效果
Table 1 Effect of sterilizing on Different parts of the explants

部位Position滅菌時間(min)Sterilizationtime接種數(個)Explantnumber污染數(個)Contaminationnumber污染率(%)Contaminationrate葉柄Petiole571020202010b5c18a(褐化)50b25c90a莖段Stem571020202013a7c9b65a35c45b

注：同一列中不同字母表示LSD測驗下在P<0.05水平下差異顯著，下同

Note: Different letters in array indicate that the values are significantly different at the 0.05 level with by LSD test, the same as below

2.2 不同激素濃度配比對不同部位外植體誘導不定芽的影響

研究表明，將不同部位的外植體，接種于含有不同激素濃度MS培養基中，培養30 d后，誘導出的總芽數及不定芽的誘導率是不同的。添加不同濃度的BA對不同部位的外植體誘導不定芽有明顯的差異。葉柄只能誘導出愈傷組織，而不能直接誘導出不定芽；而莖段可直接誘導出不定芽。添加BA2.0 mg/L時，與BA0.5 mg/L時差異極顯著。但在實際工作中，誘導率太高會影響下一步的增殖培養時組培苗的質量，因而以添加6-BA1.5 mg/L的激素濃度較為適宜。表2

表2 不同激素梯度配比對不同部位外植體誘導不定芽的效果
Table 2 Effects of adventitious buds induction on different hormone gradient ratios in different explants positions

培養基(mg/L)Medium部位Position接種數(個)Numberexplant誘導芽總數(個)Inducedbudsnumber芽誘導率(%)InducedbudsrateMS(CK)MS+BA05+NAA01MS+BA10+NAA01MS+BA15+NAA01MS+BA20+NAA01葉柄10101010100c0c3b(愈傷)5a(愈傷)5a(愈傷)0a0a0a0a0aMS(CK)MS+BA05+NAA01MS+BA10+NAA01MS+BA15+NAA01MS+BA20+NAA01莖段10101010100e7d13c46b55a0e70d130c460b550a

2.3 不同激素濃度梯度對不定芽增殖的影響

研究表明，將誘導出的不定芽叢，接種于附加有不同激素濃度梯度的培養基中，添加不同濃度的BA對不定芽增殖有明顯的差異。當添加BA1.0與0.5 mg/L時，不定芽的增殖率分別為4.58%與4.25%，兩者平均為4.12%，但均會產生玻璃苗。BA0.1與0.3 mg/L時，不定芽的增殖率分別為3.58%與3.92%，兩者平均為3.75%，均無玻璃苗產生。在生產中玻璃苗會影響到增殖培養時組培苗的質量，從產生玻璃苗和不產生玻璃苗添加的BA含量的產生不定芽相比，僅高12.6%誘導不定芽率。因而增殖培養以添加BA0.1～0.3 mg/L的激素濃度較為適宜。表3

表3 不同激素濃度配比下不定芽增殖的變化
Table 3 Effect of different hormone concentration ratio on adventitious bud proliferation

培養基(mg/l)Medium接種數(叢)Numberexplant分化總芽數(個)Differentiatedbudnumber分化苗狀態Differentiatedbudstate不定芽的增殖率(%)proliferationrateMS(CK)5(12個芽)12e苗健壯，無分化，葉片大0eMS+BA01+NAA015(12個芽)43d苗健壯，分化葉片較小358dMS+BA03+NAA015(12個芽)47c苗健康，分化葉小392cMS+BA05+NAA015(12個芽)51b苗健康，分化芽較多，但有少量玻璃苗425bMS+BA10+NAA015(12個芽)55a苗健康，分化芽多，產生大量玻璃苗458a

2.4 不同基質對試管苗移栽成活率的影響

研究表明，在蛭石中試管移栽苗綠生長正常成活率為81%，但易爛根。在珍珠巖中能正常生長，但苗黃且生長速度較慢移栽成活率為87%。在草炭土中試管苗移栽成活率為90%。在草炭土+珍珠巖中試管苗移栽苗生長速度快成活率為98%，比純草炭土移栽成活率高8.8%。表4

表4 不同基質下試管苗移栽成活率
Table 4 The survival rate of in vitro transplanting plantlets on different base material

基質Basematerial移栽數(株)Plantlets生長狀況Growingstatus成活率(%)Survivalrate草炭土Peatsoil草炭土+珍珠巖Peatpluspearlite蛭石Vermiculite珍珠巖Perlite100100100100苗綠、生長正常苗綠、生長正常且速度快苗綠、生長正常、易爛根苗黃、生長正常、速度慢90988187

3 討 論

3.1 在選擇外植體誘導時，取植株的什么部位進行誘導是誘導快慢、成否的決定因素之一，通過對金鉆蔓綠絨不同部位的外植體誘導試驗，發現添加不同濃度的BA對不同部位的外植體誘導不定芽有明顯的差異[8]。用葉柄只能誘導出愈傷組織，而不能直接誘導出不定芽；而莖段可直接誘導出不定芽。當添BA2.0 mg/L時，芽的誘導率為550%，但在實際工作中，誘導激素太高，激素的富集作用會影響下一代增殖培養時瓶苗的質量，會產生不同程度的玻璃苗，因而誘導不定芽的激素不宜太高，以添加BA1.5 mg/L的激素濃度較為適宜。

3.2 在增殖培養中，培養基中添加的BA水平不同，芽的增殖率與長勢存在顯著差異。增殖率與BA濃度密切相關[9,10]，在試驗濃度范圍內，增殖率隨BA濃度的升高呈升高趨勢。添加不同濃度的BA對不定芽增殖有明顯的差異。當添加BA1.0 mg/L時，不定芽的增殖率為4.58%，但同時會產生大量的玻璃苗，而在生產中，玻璃苗的出現，會嚴重影響到增殖培養時增殖率及組培苗的成苗質量，因而增殖培養以添加BA0.1～0.3 mg/L的激素濃度較為適宜。

3.3 根據金鉆蔓綠絨氣生根發達的生物特性，在增殖過程中，可直接把1.5 cm以上的帶氣生根的小植株剪切下來進行移栽，簡化了生根程序。研究將帶有氣生根的植株直接移栽到草炭與珍珠巖6∶1混合的穴盤中，其成活率為98%，待苗生長到10 cm左右時就可以進行移栽上盆。該簡化生根移栽方法，操作簡單，有效地提高了金鉆蔓綠絨組培苗成苗生產的速度。

4 結 論

以金鉆蔓綠絨一年生莖段為試材，篩選其誘導、增殖的最佳培養基，簡化生根、移栽方法，快速組培生產優質種苗為研究對象。金鉆蔓綠絨的誘導培養基為MS+BA1.5 mg/L+NAA0.1 mg/L，增殖培養基為MS+BA0.2 mg/L+NAA0.1 mg/L，氣生根苗在煉苗成活率達98%，草炭和珍珠巖混合基質最適于移栽。通過對金鉆蔓綠絨的組培繁殖生產技術研究，建立金鉆蔓綠絨的組培快繁體系，為金鉆蔓綠絨優質種苗工廠化生產提供可靠的技術支撐。

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