不同手術(shù)入路構(gòu)建腎血管性高血壓大鼠模型的比較

孫甲甲 涂悅 劉洋

[摘要] 目的 比較經(jīng)背部入路和經(jīng)腹部入路構(gòu)建腎血管性高血壓大鼠模型的優(yōu)缺點(diǎn)。 方法 將50只雌性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組（n = 10）、腹部入路組（n = 20）和背部入路組（n = 20）。腹部入路組沿腹正中線取約2.5 cm縱行切口，背部入路組經(jīng)雙側(cè)脊柱旁腎臟所在處取約1.5 cm縱行切口，兩組大鼠均結(jié)扎雙側(cè)腎動(dòng)脈后支，縫合后自由飲食飼養(yǎng)。比較兩組血壓水平的變化、手術(shù)時(shí)長(zhǎng)、傷口是否被啃食、術(shù)后感染率和死亡率。結(jié)果 腹部入路組及背部入路組大鼠術(shù)后3個(gè)月時(shí)血壓均顯著高于對(duì)照組（P < 0.05）；與腹部入路組比較，背部入路組大鼠手術(shù)時(shí)長(zhǎng)較短，術(shù)后感染率較低，但被啃食例數(shù)較多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；術(shù)后3個(gè)月時(shí)背部入路組與腹部入路組大鼠死亡率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 兩種入路構(gòu)建腎血管性高血壓大鼠模型各有特點(diǎn)，且術(shù)后的護(hù)理至關(guān)重要，需根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇。

[關(guān)鍵詞] 腎血管性高血壓；腎動(dòng)脈；大鼠模型

[中圖分類號(hào)] R615 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）10（b）-0013-04

[Abstract] Objective To compare the advantages and disadvantages of back approach and abdominal approach of establishing renovascular hypertension rat models. Methods According to random number table method， 50 female SD rats were divided into control group （n = 10）， abdominal approach group （n = 20） and back approach group （n = 20）. Abdominal approach group was made an incision for about 2.5 cm along the abdominal medialline， back approach group was made two longitudinal incisions for about 1.5 cm along the bilateral paravertebral line where kidney located， both groups underwent ligation of posterior branches of bilateral renal arteries， with free diet after suture. The blood pressure， operation time， whether the wound was chewed， postoperative infection rate and mortality of the two groups were compared. Results After 3 months of operation， the blood pressure of abdominal approach group and back approach group was signifcantly higher than that of control group （P < 0.05）. Compared with abdominal approach group， the operation time of back approach group was shorter， the postoperative infection rate was lower， while the number of cases being chewed was larger， the differences were statistically significant （P < 0.05）. After 3 months of operation， there was no significant difference on the mortality between abdominal approach group and back approach group （P > 0.05）. Conclusion The two approaches of establishing renovascular hypertension rat models have their own characteristics， and the postoperative nursing care is very important. It is necessary to choose the approach according to the actual conditions.

[Key words] Renovascular hypertension； Renal artery； Rat model

腎血管性高血壓（renovascular hypertension，RVHT）是指腎動(dòng)脈狹窄引起腎臟血流減少，腎實(shí)質(zhì)破壞，進(jìn)而激活腎素-血管緊張素系統(tǒng)，最終導(dǎo)致的血壓升高[1]。由于RVHT模型構(gòu)建簡(jiǎn)便且穩(wěn)定可靠，故其已成為研究高血壓發(fā)病機(jī)制和相關(guān)疾病藥物評(píng)價(jià)的常用模型之一[2]。但與此同時(shí)，該模型的構(gòu)建方法尚未標(biāo)準(zhǔn)化[3]，特別是造模的手術(shù)方式更鮮有比較。故本研究擬將構(gòu)建RVHT大鼠模型的兩種手術(shù)方式進(jìn)行比較，旨在為相關(guān)模型的構(gòu)建提供更多參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)雌性SD大鼠50只，8～10周齡，體重250～300 g，購(gòu)于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，許可證號(hào)為SCXK-（軍）2012-0004。在12 h/12 h明暗交替的條件下飼養(yǎng)，4只/籠，供以標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲食。手術(shù)操作開始前，將50只雌性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組（n = 10）、腹部入路組（n = 20）和背部入路組（n = 20）。腹部入路組和背部入路組大鼠均按1%戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉，必要時(shí)增加麻醉用藥量。

1.2 主要儀器與試劑

手術(shù)顯微鏡（XT-X-6A，鎮(zhèn)江新天醫(yī)療器械有限公司）；鼠尾動(dòng)脈血壓計(jì)（SC100，美國(guó)IITC公司）。戊巴比妥鈉（武漢易泰科技有限公司，批號(hào)：57-33-0）；0.9%氯化鈉注射液（山東華魯制藥有限公司，批號(hào)：8018153）。

1.3 方法

1.3.1 大鼠模型的構(gòu)建 ①腹部入路組大鼠取仰臥位固定于手術(shù)板上，取約2.5 cm腹正中切口，將覆蓋于腎臟表面的腸牽出以暴露腎臟，助手用棉簽將腎臟頭端輕微抬起，術(shù)者在手術(shù)顯微鏡下（10倍視野）分離腎靜脈與腎動(dòng)脈，5-0手術(shù)縫線結(jié)扎腎動(dòng)脈分支[4]，對(duì)側(cè)操作亦同。②背部入路組大鼠取俯臥位固定于手術(shù)板上，將拇指置于大鼠背部胸廓的下緣，中指及示指置于腹部，相互對(duì)合并向外側(cè)滑動(dòng)以找到腎臟[5]。根據(jù)腎臟的位置沿脊柱旁開0.5 cm，取約1.5 cm縱向切口開放腹腔。將脂肪及卵巢小心牽出后，術(shù)者利用中指和示指，將腎臟從背部切口頂出。助手用2個(gè)棉簽夾住腎臟后向外牽拉固定以暴露腎靜脈。術(shù)者在手術(shù)顯微鏡下（10倍視野）分離腎靜脈與腎動(dòng)脈，7-0手術(shù)縫線結(jié)扎腎動(dòng)脈分支，對(duì)側(cè)操作亦同[6]。③對(duì)照組不進(jìn)行任何操作。術(shù)后三組大鼠均自由飲食。

1.3.2 大鼠血壓測(cè)定 采用無(wú)創(chuàng)鼠尾動(dòng)脈血壓儀于術(shù)前及術(shù)后3個(gè)月測(cè)定大鼠清醒狀態(tài)下的收縮壓。每個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)連續(xù)測(cè)量3 d，每天進(jìn)行1次。采集第3天的測(cè)量數(shù)據(jù)作為大鼠收縮壓值，從而避免因掙扎導(dǎo)致的血壓波動(dòng)[7]。待最終處死后，還可通過(guò)觀察腎臟形態(tài)再次驗(yàn)證模型是否成功。

1.3.3 一般資料收集 記錄每只大鼠的手術(shù)時(shí)長(zhǎng)（從固定于手術(shù)板至切口完全縫合）、術(shù)后傷口是否被啃食，以及每組大鼠術(shù)后感染率和死亡率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 21.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，血壓比較采用兩因素重復(fù)測(cè)量方差分析，兩組比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組手術(shù)前后血壓變化比較

術(shù)前各組血壓比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；術(shù)后3個(gè)月時(shí)，腹部入路組和背部入路組血壓均高于對(duì)照組（P < 0.05），但腹部入路組和背部入路組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）；腹部入路組與背部入路組術(shù)后3個(gè)月時(shí)血壓均較術(shù)前升高（P > 0.05）。見表1。

2.2 腹部入路組與背部入路組相關(guān)指標(biāo)比較

與腹部入路組比較，背部入路組手術(shù)時(shí)長(zhǎng)較短，術(shù)后感染率較低，但被啃食例數(shù)較多（圖1），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；術(shù)后3個(gè)月時(shí)背部入路組的死亡率與腹部入路組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

2.3 腎臟形態(tài)觀察

對(duì)照組大鼠可見腎臟表面光滑圓潤(rùn)，形態(tài)飽滿。腹部入路組和背部入路組大鼠腎臟均可見血管被結(jié)扎后，原血管供血區(qū)域由于血流中斷而發(fā)生缺血性壞死，并被黃色脂肪組織替代，腎組織存在明顯缺如。見圖2。

3 討論

高血壓動(dòng)物模型在高血壓的預(yù)防與治療相關(guān)研究中發(fā)揮著重要作用，特別是RVHT大鼠模型[6，8]，因其操作簡(jiǎn)便，可重復(fù)性高，且相對(duì)于自發(fā)性高血壓大鼠模型更加經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，應(yīng)用十分廣泛[9-11]。然而近年來(lái)鮮有文獻(xiàn)對(duì)模型構(gòu)建的手術(shù)方式進(jìn)行比較。雖然模型構(gòu)建的手術(shù)方式選擇往往僅是整個(gè)實(shí)驗(yàn)中的一小部分，很少會(huì)引起重視，但不同的手術(shù)方式會(huì)造成的不同結(jié)果，例如感染率不同導(dǎo)致體內(nèi)炎癥水平的波動(dòng)，又確實(shí)會(huì)對(duì)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果和相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)造成一定影響[12-14]。因此，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件，選擇一種恰當(dāng)?shù)氖中g(shù)方式對(duì)于最終實(shí)驗(yàn)的成功同樣至關(guān)重要。

手術(shù)操作本身具有一定的主觀性，操作者的熟練度及對(duì)細(xì)節(jié)的重視程度可對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成較大影響。為保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性，在進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)前，術(shù)者進(jìn)行了充分的練習(xí)以掌握兩種手術(shù)方式，包括在腹腔內(nèi)快速找到腎臟的位置、分離并結(jié)扎腎動(dòng)脈分支以及縫合腹腔，最大限度減少了因操作熟練度不同而造成的誤差。本研究結(jié)果顯示，無(wú)論選擇何種手術(shù)方式，均可造成大鼠血壓升高，且兩組血壓值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示在血管結(jié)扎部位相同的條件下，術(shù)式的不同不會(huì)影響最終的血壓。孫允芹等[15]應(yīng)用腹部入路的方式結(jié)扎雙側(cè)腎動(dòng)脈分支，可成功造成大鼠高血壓，楊學(xué)偉等[16]經(jīng)背部入路夾閉雙腎動(dòng)脈，同樣可形成穩(wěn)定的高血壓模型。

手術(shù)時(shí)間上，背部入路的手術(shù)方式可顯著縮短手術(shù)時(shí)長(zhǎng)，這與解剖位置有關(guān)。手術(shù)過(guò)程中分離并結(jié)扎腎動(dòng)脈分支花費(fèi)時(shí)間最多，可占總時(shí)間的70%左右，采用背部入路時(shí)，將腎臟從切口推出后，分離腎靜脈表面包膜即可見腎動(dòng)脈分支，利于結(jié)扎。但采取腹部入路時(shí)，需首先將腎臟表面的腸管移除，其次需將腎臟沿大鼠水平軸向腹面旋轉(zhuǎn)一定角度，此時(shí)分離腎靜脈表面包膜方可見腎動(dòng)脈分支[17]，且助手將腎臟長(zhǎng)時(shí)間固定于此角度也較困難。

在術(shù)后感染率方面，腹部入路組感染率較高，這主要與該組大鼠的傷口長(zhǎng)時(shí)間與墊料摩擦有關(guān)，且該摩擦不可避免[18]。這要求飼養(yǎng)者盡量保持墊料干燥清潔，增加墊料更換頻率，一定程度上增加了工作量。背部入路組的傷口暴露于空氣中，故感染率較低。此外，本研究結(jié)果顯示，腹部入路組的感染以傷口局部感染為主，而背部入路組多于皮下形成局限性膿腔，腔內(nèi)分泌大量液體，此時(shí)不宜對(duì)該膿腔進(jìn)行任何處理，一段時(shí)間后其可機(jī)化成一球形腫物，不會(huì)對(duì)大鼠生存造成影響，但若前期不慎刺破膿腔，則可造成大鼠彌漫性腹膜炎并導(dǎo)致死亡。

但背部入路同樣面臨一個(gè)問(wèn)題，即存在同籠大鼠啃食其他大鼠傷口的現(xiàn)象。為解決該問(wèn)題，一方面無(wú)需對(duì)傷口進(jìn)行特殊處理，因?yàn)榇笫笥兄^強(qiáng)的自愈能力[19]，若將傷口縫合，不僅會(huì)增加麻醉風(fēng)險(xiǎn)，還可能因造成人工死腔而增加感染的發(fā)生；另一方面，可通過(guò)將術(shù)后大鼠單獨(dú)飼養(yǎng)來(lái)避免該現(xiàn)象的發(fā)生，以及促進(jìn)被啃食傷口的恢復(fù)，但這需要較多的飼養(yǎng)空間，會(huì)帶來(lái)一定的不便。有趣的是，長(zhǎng)時(shí)間觀察發(fā)現(xiàn)，當(dāng)有大鼠的傷口被啃食時(shí)，該大鼠并未進(jìn)行閃躲和反擊，而且所有傷口被啃食的大鼠中，僅1只發(fā)生傷口感染。筆者推測(cè)，該現(xiàn)象的發(fā)生一方面可能是由于大鼠存在嗜血性，另一方面或許是由于大鼠之間通過(guò)交流，主動(dòng)要求其他大鼠啃食傷口以避免感染。

在死亡率方面，大鼠的死亡多由粘連性腸梗阻所致，主要表現(xiàn)為消瘦、飲食減少及大便形態(tài)改變。該問(wèn)題可通過(guò)縫合腹腔前用大量生理鹽水沖洗來(lái)解決，同時(shí)腹腔沖洗還可一定程度上降低傷口感染的發(fā)生[20-21]。

綜上所述，本研究通過(guò)經(jīng)背部和經(jīng)腹部?jī)煞N手術(shù)入路構(gòu)建RVHT大鼠模型，比較了兩種手術(shù)方式的優(yōu)缺點(diǎn)，為進(jìn)行后續(xù)的高血壓相關(guān)實(shí)驗(yàn)提供了一定的參考。但研究中為了對(duì)比手術(shù)方式對(duì)感染率的影響，未對(duì)大鼠注射抗生素以預(yù)防或治療感染，日后實(shí)驗(yàn)中可根據(jù)實(shí)際情況決定是否采用該措施。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Haydari MR，Panjeshahin MR，Mashghoolozekr E，et al. Antihypertensive Effects of Hydroalcoholic Extract of Crataegus Azarolus Subspecies Aronia Fruit in Rats with Renovascular Hypertension：An Experimental Mechanistic Study [J]. Iran J Med Sci，2017，42（3）：266-274.

[2] 吳兵兵，吳帆，何易曉，等.高血壓病動(dòng)物模型的研究進(jìn)展及評(píng)價(jià)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2014，11（20）：2915-2916， 2919.

[3] 楊世勤，吳玉泓.實(shí)驗(yàn)性高血壓大鼠模型制備的研究進(jìn)展[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，29（1）：68-70.

[4] Kalaitzis C，Touloupidis S，Bantis E，et al. Effects of renal denervation of the contralateral kidney on blood pressure and sodium and eicosanoid excretion in the chronic phase of two-kidney，one-clip renovascular hypertension in rats [J]. Scand J Urol Nephrol，2005，39（1）：15-20.

[5] 劉偉，閆海洋，趙躍，等.高血壓大鼠肝臟組織及外周血白細(xì)胞端粒長(zhǎng)度及其相關(guān)性[J].廣西醫(yī)學(xué)，2018，40（2）：171-173.

[6] 關(guān)俊宏，張緒新，張建海，等.實(shí)驗(yàn)性大鼠高血壓顱內(nèi)動(dòng)脈瘤模型的建立及發(fā)生機(jī)制的初步研究[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，36（6）：647-649，667.

[7] Tsyrlin VA，Galagudza MM，Kuzmenko NV，et al. Arterial baroreceptor reflex counteracts long-term blood pressure increase in the rat model of renovascular hypertension [J]. PLoS One，2013，8（6）：e64788.

[8] 郭付有，宋來(lái)君，郭予大，等.大鼠顱內(nèi)動(dòng)脈瘤模型的建立[J].中國(guó)腦血管病雜志，2006，3（9）：403-406，411.

[9] 岳云，吳雨婷，付舒，等.自發(fā)性高血壓大鼠肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)體Oatp及Mrp mRNA水平的變化[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2017， 40（5）：469-474.

[10] 王娟，趙英強(qiáng).腎性高血壓大鼠模型與自發(fā)性高血壓大鼠的比較[J].湖南中醫(yī)雜志，2014，30（6）：144-146.

[11] Breigeiron MK，Lucion AB，Sanvitto GL. Effects of renovascular hypertension on reproductive function in male rats [J]. Life Sci，2007，80（17）：1627-1634.

[12] Barbosa RM，Speretta GF，Dias DPM，et al. Increased Expression of Macrophage Migration Inhibitory Factor in the Nucleus of the Solitary Tract Attenuates Renovascular Hypertension in Rats [J]. Am J Hypertens，2017，30（4）：435-443.

[13] Zhang S，Li H，Li Y，et al. Nicousamide normalizes renovascular hypertension in two-kidney one-clip hypertensive rats [J]. Biomed Rep，2013，1（1）：89-92.

[14] Campos RR，Oliveira-Sales EB，Nishi EE，et al. The role of oxidative stress in renovascular hypertension [J]. Clin Exp Pharmacol Physiol，2011，38（2）：144-152.

[15] 孫允芹，王耀峰，郭寒冰，等.肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子重組腺病毒對(duì)高血壓高血脂大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬凋亡蛋白表達(dá)的影響[J].新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2018，35（1）：26-29.

[16] 楊學(xué)偉，陳軍，崇卓，等.腎血管性高血壓大鼠模型的建立和評(píng)測(cè)[J].中國(guó)組織工程研究，2006，10（40）：165-167.

[17] Oliveira-Sales EB，Dugaich AP，Carillo BA，et al. Oxidative stress contributes to renovascular hypertension [J]. Am J Hypertens，2008，21（1）：98-104.

[18] 周正宇，薛智謀，王禹斌，等.輻照墊料的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2005，25（1）：41-43.

[19] 周正謀，劉志發(fā)，李仲孝.大鼠實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的復(fù)制與自動(dòng)修復(fù)過(guò)程觀察[J].轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)雜志，1995（4）：231-232，255.

[20] 孔凡東，何永忠，杜漢朋，等.腹腔沖洗對(duì)腹腔鏡治療闌尾膿腫術(shù)后并發(fā)癥的影響[J].廣東醫(yī)學(xué)，2017，38（7）：1046-1047.

[21] 段海軍，張秀麗，李學(xué)仁.腹部手術(shù)后黏連性腸梗阻182例[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2010，32（11）：1019-1020.

（收稿日期：2018-05-03 本文編輯：張瑜杰）