民族藥牛尾巴菜的化學成分研究

貴陽中醫學院藥學院，貴州 貴陽 550025

鼠刺屬(Itea)植物隸屬虎耳草科(Saxifragaceae)鼠刺亞科(Iteoideae)，在我國分布較多，有17種及1變種[1]。同時，鼠刺屬植物相對病害少，適應性強，易于扦插繁殖，部分物種諸如矩葉鼠刺I.oblonga、滇鼠刺I.yunnanensis等已實現了大范圍種植，資源豐富[2]。此外，多種鼠刺屬植物作為民族藥在民間廣泛使用，諸如矩葉鼠刺I.oblonga和滇鼠刺I.yunnanensis的根、葉、花可滋補強壯、止咳、消腫；腺鼠刺I.glutinosa的根、花可續筋接骨、潤肺止咳[3]。因此，鼠刺屬藥用植物極具開發價值。然而，到目前為止，僅對部分鼠刺屬植物的化學成分進行了初步研究，從中分離鑒定單體成分才20余個[4-8]。針對該屬藥用植物的化學成分研究亟待開展。

牛尾巴菜，學名為冬青葉鼠刺(I.ilicifoliaOliv.)，具有清熱止咳、滋補肝腎之功效，可治療勞虛咳嗽、咽喉干痛和目赤等疾病[3]。目前，僅對其化學成分展開過初步研究，從中發現一類具有顯著抗氧化活性的2-芳基苯并[b]呋喃類成分[7]。為進一步闡明牛尾巴菜的化學成分組成，本項目再次對牛尾巴菜枝葉的化學成分進行了研究，從中分離并鑒定6個化合物：二十八烷醇(1)、三十一烷(2)、5,4′-二羥基-7,8-二甲氧基黃酮(3)、鄰苯二甲酸二正丁酯(4)、D-阿洛醇(5)和β-谷甾醇(6)。除化合物3以外，其它均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

INOVA 400 MHz核磁共振波譜儀(美國Varian公司，TMS為內標)；Bruker Compact質譜儀(德國Bruker公司)；安捷倫5973質譜儀(美國安捷倫公司)；Sephadex LH-20凝膠(GE Healthcare Bio-Sciences AB公司)；柱層析硅膠和GF254薄層層析硅膠(青島海洋化工有限公司)；RE-5210A旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)；SHZ-DIII循環水式多用真空泵(鞏義市科華儀器設備有限公司)；10%硫酸乙醇顯色劑；所有溶劑均為工業級，使用前均經過蒸餾處理。

試驗用藥材于2017年11月采自貴州龍里縣，經昆明獵植中草藥銷售有限公司賀文清先生鑒定為虎耳草科鼠刺屬冬青葉鼠刺(Iteailicifolia)的枝葉。樣品標本(201711)存于貴陽中醫學院苗醫藥重點實驗室。

2 提取與分離

取干燥的牛尾巴菜枝葉粗粉10.0 kg，常溫下以80 L 95% EtOH浸提3次，每次7 d。完畢，過濾，合并濾液，減壓條件下回收乙醇后得總浸膏450 g。將總浸膏分散于2 L水中，依次以乙酸乙酯(2 L×3)、正丁醇(2 L×3)進行萃取，減壓條件下分別回收溶劑后得乙酸乙酯部位(E，85 g)和正丁醇部位(B，140 g)。

乙酸乙酯部位經硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯梯度洗脫(1∶0→0∶1)后得8個亞組分E1-E8。組分E1的石油醚/乙酸乙酯(5∶1)溶液放置后析出白色針狀結晶，即化合物6(43 mg)。組分E3(11.6 g)經硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯(15∶1；5∶1；3∶1)梯度洗脫得到9個亞組分E3A-E3I。其中，組分E3B的石油醚/乙酸乙酯(15∶1)溶液放置后析出白色顆粒狀固體，即化合物1(21 mg)；組分E3C經二氯甲烷/甲醇(1∶1)溶解后重結晶得白色片狀物，即化合物2(47 mg)。組分E5(6.8 g)經硅膠柱層析，以石油醚/乙酸乙酯(3∶1)等度洗脫得8個亞組分E5A-E5H組分。組分E5F(2.4 g)反復經硅膠柱層析后得淡黃色粉末，即化合物3(8 mg)。組分E6(2.8 g)經凝膠柱層析，以二氯甲烷/甲醇(1∶1)洗脫得到6個亞組分E6A-E6F。組分E6C先后經硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇 90∶1)和制備薄層層析(石油醚/乙酸乙酯 2∶1)得到化合物4(5 mg)。E7的乙醇溶液放置后析出白色晶體，即化合物5(35 mg)。

3 結構鑒定

3.1 化合物1 白色顆粒狀固體；EI-MS∶m/z392 [M-H2O]+, 364, 181, 167, 153, 139, 125, 111, 97 (100), 83, 69, 57；1H NMR (400 MHz, CDCl3)∶δ3.64 (2H, t,J= 6.6 Hz, H-1), 1.56 (2H, m, H-2), 1.25 (50H, m, 25×CH2), 0.88 (3H, t, J = 6.7 Hz, H-28)；13C-NMR(100MHz, CDCl3)∶δ63.3(C-1), 33.0 (C-2), 32.1、29.9、29.8、29.6、29.5 (C-4～C-26), 25,9 (C-3), 22.9(C-27), 14.3(C-28)。以上數據與文獻報道[9]的數據基本一致，故鑒定為二十八烷醇。

3.2 化合物2 白色片狀物；EI-MS∶m/z436[M]+, 408, 393, 379, 以下依次遞減14個質量單位, 57 (100), 43；1H NMR (400MHz, CDCl3)∶δ1.25 (58H, m, 29×CH2), 0.88 (6H, t,J= 6.7 Hz, H-1/31)。以上數據與文獻報道[10]的數據基本一致，故鑒定該化合物為三十一烷。

3.3 化合物3 淡黃色粉末；ESI-MS∶m/z313.2 [M-H]-；1H NMR (400 MHz, Pyridine-d5)∶δ8.07 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′/6′), 7.29 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-3′/5′), 6.93 (1H, s, H-3), 6.67 (1H, s, H-6), 3.97 (3H, s, 7-OCH3), 3.82 (3H, s, 8-OCH3)；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)∶δ12.79 (1H, s, 5-OH), 7.93 (2H, d,J= 8.8 Hz, H-2′/6′), 6.95 (2H, d, J = 8.8 Hz, H-3′/5′), 6.83 (1H, s, H-3), 6.57 (1H, s, H-6), 3.91 (3H, s, 7-OCH3), 3.83 (3H, s, 8-OCH3)；13C NMR (100 MHz, Pyridine-d5)∶δ183.3 (C-4), 165.1 (C-2), 163.4 (C-4′), 159.3 (C-7), 158.3 (C-5), 149.8 (C-9), 129.7 (C-8), 129.3 (C-2′/6′), 122.4 (C-1′), 117.3 (C-3′/5′), 105.4 (C-10), 103.8 (C-3), 96.6 (C-6), 61.7 (8-OCH3), 56.6 (7-OCH3)。以上數據與文獻報道[11]的數據基本一致，故鑒定為5,4′-二羥基-7,8-二甲氧基黃酮。

3.4 化合物4 淡黃色油狀物；ESI-MS∶m/z301.2[M+Na]+；1H NMR (400MHz, MeOH-d4)∶δ7.72 (2H, dd,J= 5.6, 3.4 Hz, H-3/6), 7.62 (2H, dd,J= 5.8, 3.3 Hz, H-4/5), 4.29 (4H, t,J= 6.6 Hz, H-8/8′), 1.72 (4H, m, H-9/9′), 1.46 (4H, h,J= 7.4 Hz, H-10/10′), 0.98 (6H, t,J= 7.4 Hz, H-11/11′)；13C NMR (100 MHz, MeOH-d4)∶δ169.3 (C-7/7′), 133.6 (C-1/2), 132.4 (C-4/5), 129.9 (C-3/6), 66.7 (C-8/8′), 31.7 (C-9/9′), 20.3 (C-10/10′), 14.1 (C-11/11′)。以上數據與文獻報道[12]的數據基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二正丁酯。

3.5 化合物5 白色晶體(乙醇)；ESI-MS∶m/z183.2 [M+H]+；1H NMR (400 MHz, D2O)∶δ3.84 (2H, m, H-2/5), 3.75 (2H, dd,J= 9.8, 3.6 Hz, H-1a/6a), 3.73 (2H, d,J= 3.2 Hz, H-3/4), 3.59 (2H, dd,J= 12.0, 7.2 Hz, H-1a/6a)；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6)∶δ4.67 (2H, d,J= 4.8 Hz, C3/4-OH)，4.62 (2H, d,J= 4.8 Hz, C2/5-OH)，4.38 (2H, d,J= 5.6 Hz, C1/6-OH)，3.56 (6H, m, H-1a/6a/2～5)，3.38 (2H, dd, J = 11.1, 5.6 Hz, H-1b/6b)；13C NMR (100MHz, D2O)∶δ73.3 (C-3/4)，73.2(C-2/5)，63.3(C-1/6)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6)∶δ73.1 (C-3/4)，72.6 (C-2/5)，62.9 (C-1/6)。以上數據與文獻報道[13]的數據基本一致，故鑒定為D-阿洛醇。

3.6 化合物6 無色針狀結晶(石油醚/乙酸乙酯 5∶1)；10%硫酸乙醇顯紫紅色。3種展開劑條件下(石油醚/乙酸乙酯 5∶1；石油醚/二氯甲烷 4∶1；二氯甲烷/甲醇 20∶1)，該化合物與對照品β-谷甾醇的Rf值均保持一致，故確定該化合物為β-谷甾醇。

4 討論

對牛尾巴菜枝葉的化學成分進行了研究，共分離鑒定單體化合物6個。其中，二十八烷醇(1)具有提高機體耐久力、降低血脂和膽固醇、護肝等功效[14]；D-阿洛醇(4)是轉化制備阿洛酮糖的原料[15]，后者具有降血糖、降脂減肥、抗氧化等功效[16]。這為闡明牛尾巴菜的活性成分，并提升其應用價值方面奠定了良好的基礎。當然，從中還發現了具有生殖毒性的鄰苯二甲酸二正丁酯(4)[17]。因藥材浸泡提取過程中采用塑料桶當容器，故該成分是否來源于牛尾巴菜，有待進一步商榷。