羊小反芻獸疫活疫苗免疫抗體監測

田海芹 朱剛 王恒昌 陳飛飛

（江蘇省灌南縣畜牧獸醫站 222500）

小反芻獸疫也稱小反芻獸假性牛瘟、肺腸炎、口炎肺腸炎復合癥，俗稱 “羊瘟”，是由小反芻獸疫病毒引起的，以發熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征的急性接觸性傳染病。主要感染山羊、綿羊等家養和野生小反芻動物，山羊高度易感，綿羊次之[1]。該病是世界衛生組織（OIE）法定報告的動物疫病，在我國劃定為一類動物疫病。2007年我國首次在西藏阿里地區確證了小反芻獸疫的發生[2]。2012年 《國家中長期動物疫病防治規劃（2012-2020）》將其列入13種重點防范的外來動物疫病。小反芻獸疫病毒樹副黏病毒科麻疹病毒屬，只有一個血清型[2]。

2014年江蘇省連云港市將小反芻獸疫由非免疫區調整為免疫區。根據新疆天康生物股份有限公司生產的活疫苗的使用說明書，其免疫持續期為 “36個月”。在實際使用過程中，不少村級防疫員及養羊戶對免疫持懷疑態度，為此灌南縣畜牧獸醫站在轄區內選取45只羊進行小反芻獸疫免疫試驗，探索羊小反芻獸疫抗體的抗體消長規律，并對其免疫效果及防控效果進行觀察。

1 材料與方法

1.1 疫苗

小反芻獸疫活疫苗（chone9株）新疆天康生物股份有限公司；疫苗批次2016041。口蹄疫二價滅活疫苗（OHM/02株+JSL株）新疆天康生物股份有限公司；疫苗批次2016017。

1.2 試驗動物

選取45只2～36月齡的羊作為試驗動物，性別不限，在試驗前對45只羊全部采集血清樣品，檢測小反芻獸疫抗體，結果為陰性者才能納入作為試驗動物。

1.3 免疫方案

每只羊注射1ml口蹄疫二價滅活疫苗（肌肉注射），7d后注射1ml的小反芻獸疫活疫苗（頸部皮下注射）。

1.4 免疫副反應及臨床防控效果觀察

接種后21d內對被免疫羊進行接種局部觀察，對接種種幼畜進行分別觀察，精神及采食狀態進行觀察，以全面了解該疫苗的免疫副反應情況。在試驗過程當中，密切觀察羊對小反芻獸疫的免疫應答能力。

1.5 血清樣品的采集

分別于疫苗接種后的第0、28、84、168、366、550天對羊只進行采血。

1.6 檢測方法與試劑

檢測方法：阻斷ELISA方法檢測[3]；試劑盒：小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（青島立見）中國動物衛生與流行病學中心外來動物疫病研究中心（OIE小反芻獸疫參考實驗室）生產，批號201641-1及201714-1。酶標儀：Infinite F50酶標儀是Tecan新一代的8通道光吸收酶標儀，不僅能實現快速測量提供準確性高，重現性好的測量結果，而且還樹立了結構緊湊的創新性設計新標準。憑借其簡潔易用的操作和數據分析軟件，Infinite F50可成為ELISA試驗一系列應用的理想選擇。

檢測方法介紹如下：

（1）在A1和B1抗原包被孔中加入陽性血清，50μl/孔。

（2）在C1和D1抗原包被孔中加入陰性血清，50μl/孔。

（3）在E1和F1抗原包被孔中加入稀釋液，50μl/孔。

（4）在樣品孔中加入稀釋液，25μl/孔。

（5）在樣品孔中再加入待檢血清，25μl/孔。

（6） 37℃孵育 60min。

（7）棄去反應孔中的液體。

（8）每孔用洗滌液清洗4次，洗滌液（1×）300μl/孔。

（9）每次除去洗滌液后，在吸水紙上拍干，除去殘留的液體。

（10） 每孔中加入酶標單抗（1×） 50μl。

（11） 37℃孵育 30min。

（12） 重復步驟 7～9。

（13）每孔中加入底物溶液50μl/孔。

（14） 室溫中避光作用10～15min。

（15）每孔中加入50μl終止液終止所有反應。

（16）用酶標儀在450nm波長下測定各孔的OD450值，計算阻斷率。

阻斷率（PB）計算方法：

PB=100-[待檢血清 OD450nm（or對照 OD450nm）×100]/cm OD450的平均值。

（17）結果判定：①陽性對照阻斷率（PB）＞60，陰性對照阻斷率（PB）＜40，試驗結果有效，否則重新進行試驗；②待檢樣品阻斷率（PB）＞50，判為陽性；③待檢樣品阻斷率（PB）≤50，判為陰性。

2 結果

2.1 小反芻獸疫抗體檢測結果

6個時間點抗體檢測結果（抗體陽性率）分別為：第0天0%（0/45）； 第 28天 100%（45/45）； 第 84天 97.7%（44/45）；第168天95.6%（43/45）； 第336天90%（40/45）； 第550天67.5%（27/45）。

2.2 免疫副反應及臨床防控免疫效果

作者簡介：劉坤（1971.11-），女，遼寧省瓦房店市人，本科，獸醫師，主要從事動物防疫工作。

所有試驗羊未發現明顯的免疫副反應情況；試驗整個過程未發現試驗羊有小反芻獸疫感染情況。

3 討論

（1）新疆天康小反芻獸疫活疫苗具有良好的免疫原性，在免疫后最近的檢測時間第28天抗體陽性率達100%；在免疫后第84天，抗體陽性率為97.7%，略有下降；第168、336天檢測，抗體陽性率進一步小幅度下降；在第336天保持在94.5%；隨著免疫時間的推遲，在免疫后550d抗體陽性率下降至67.5%。但總體來說，該小反芻獸疫活疫苗免疫持續期至少在550d以上，也就是說一年之內只需接種一次該疫苗，即可獲得良好的免疫保護作用。

（2）本次試驗最初選用的45只試驗羊，因為試驗周期比較長，導致后續樣本數量因為種種原因（比如出售、轉地）略有減少，但對這部分羊的跟蹤監測結果比較可靠。

（3）由于小反芻獸疫活疫苗目前僅有新疆天康生物有限公司獲得生產批文，對于畜牧獸醫工作者及養羊戶迫切關心的防控效果及免疫持續期問題。筆者認為，該疫苗防控效果良好，具有良好的免疫原性，作為商品羊只需要接種一次該疫苗，即可有效預防小反芻獸疫，而對于種羊每隔18個月接種一次該疫苗，也能有效地防控小反芻獸疫。