探究公共衛生間微生物污染及其影響

蔡迪睿 臧旭東

摘要本實驗選擇公共衛生間馬桶墊及洗手盆表面隨機樣本，進行表面微生物污染的檢測。采集樣本后，進行細菌分離、純化培養，形態學觀察，記錄細菌顏色、形態、大小與數量；將細菌進行16SrDNA檢測，測定細菌DNA序列并在NCBI上查出細菌種類。最后整理數據，得到馬桶墊上的細菌個數、種類，并分析微生物污染情況及其對人們健康的影響。

關鍵詞微生物污染 16SrDNA檢測 公共衛生

微生物污染是主要傳染性疾病的源頭，包含食品微生物污染、空氣微生物污染、水體微生物污染等方面。在日常生活、工作環境中存在在著種類繁多、數量巨大的微生物。它們無處不在，而人們光憑肉眼無法看到，這就使得人們很容易忽視它們所造成的污染，對微生物污染的防范措施不夠系統，導致對生活環境及人類健康造成影響。探究不同環境下微生物的污染是目前探究環境污染的重要課題之一，了解工作、生活環境中衛生物污染的現狀，對人們提高公共環境衛生保護意識和減少傳染病的發生與傳播有著重大的意義。

1材料和方法

1.1樣品的采集

（1）采樣地點：武漢病毒研究所一號樓公共衛生間馬桶墊、洗手盆。

（2）采樣方法：于50 mL離心管中放置10 mL質量分數為8.5%的生理鹽水；用5x5 cm的標準滅菌規格板放在被檢物體表面，用鑷子夾住浸有無菌生理鹽水液的脫脂棉，在規格板內橫豎往返各涂抹5次，并隨之轉動脫脂棉、連續采樣3個規格板面積；將脫脂棉于放入裝10 mL采樣液的試管中，蓋上蓋子，4～C保存。

1.2細菌的分離與純化

（1）移液器移取浸泡樣品生理鹽水100μL于LB固體培養基平板中，三角玻棒消毒后，將樣品在培養基表面上均勻涂布；倒置平板，放入37℃恒溫培養箱中，培養24h后取出，計數。

（2）選擇不同形態的菌落進行劃線培養并記錄細菌群落的大小、形狀、表面與邊緣的模樣、顏色等。

（3）接種環挑取單菌落，交叉劃線法在新的LB平板上劃線，放入37℃恒溫培養箱中，培養24 h后取出得到各個細菌的純培養物。

1.3細菌的16S rDNA序列鑒定

1.3.1實驗試劑

溶菌酶（20 mg/mL）、超純水、PCR mix（2xTS-INGKE MasterMix）、瓊脂糖、引物（表1）。

1.3.2實驗方法

1.3.2.1核酸提取

1.3.2.2基因擴增

（1）基因擴增體系見表2。

（2）基因擴增程序見表3。

（3）電泳檢測

稱取1g瓊脂糖置于100 mL TAE電泳緩沖液中，加熱融化，待溫度降至60℃左右時，均勻鋪板，制成1%的瓊脂糖凝膠。PCR反應結束后，加樣，以100V電壓進行瓊脂糖凝膠電泳。電泳結束后，染色，用凝膠成像儀觀察，拍照，記錄實驗結果。

2實驗結果

2.1樣品的采集

本實驗共采集6份樣品（表4）。

2.2細菌的分離與純化

（1）對所采樣品分所得細菌總數進行統計，結果見表5。

（2）計算公式：細菌菌落總數（efu/100c㎡）（物體表面微生物污染）：物體表面菌落數=平皿上菌落的平均數×采樣液體稀釋倍數/采樣面積（c㎡）。

通過計算，得馬桶，洗手臺細菌數（表6）。

2.3細菌的16SrDNA序列鑒定

2.3.1部分電泳檢測結果

PCR部分檢測結果如圖1所示。

在實驗過程中，有一部分分離純化所得細菌并未檢測到16S rDNA片段，可能是未成功提取到基因組DNA的原因，后期可再提取DNA，重新擴增。

2.3.2測序統計結果

16S rDNA測序鑒定結果見表7。

由鑒定結果可知，在馬桶墊上，比較常見的菌屬為芽孢桿菌屬，其中部分細菌對人類健康有不同程度的危害。例如梭形芽孢桿菌可引起腹瀉，嚴重的會導致低白蛋白血癥，嬰幼兒等免疫力低下人群易感染患病；蠟樣芽孢桿菌可引起嘔吐、腹瀉；雷氏普羅維登斯菌也是馬桶中的主要的細菌，雖然其引發的感染十分少見，但其可以引起敗血癥等嚴重的疾病；松鼠葡萄球菌，可以引起尿道感染、心內膜炎、腹膜炎等疾病。

洗手臺內，比較常見的細菌為蠟樣芽孢桿菌（可引起嘔吐、腹瀉），還有一些芽孢桿菌屬下其它的病原菌。相對于馬桶而言，洗手臺表面的病原菌數量少、致病性弱，但也存在大量引起嘔吐、腹瀉的蠟樣芽胞桿菌。

3討論

本次實驗是在病毒研究所一號大樓內進行，選取的采樣地點均是工作人員日常接觸最頻繁的區域。大樓內的衛生間有定期的清潔和消毒，但從此次實驗的結果中可以看到，即便是清潔后的地方仍然會存在大量的細菌，其中還包含有不少病原菌。為了公眾的健康，預防各類傳染疾病，人們應該提高對公共區域清潔消毒工作的重視，創造一個潔凈衛生的工作、生活環境。

任何地方都會存在著不同程度的微生物污染，它們對人類最大的影響就是會引發各種疾病，所以要做到時刻注意自己的衛生與身體的健康狀況，盡最大可能防止微生物污染對身體的影響。