紫外分光光度法測定原料藥喜樹堿含量分析

李家敏 周秀玲 王金華 張兵鋒

摘要：由于喜樹堿內酯環開環后在254 nm波長下紫外吸收增強，而開環的喜樹堿毒副作用大。鑒于目前喜樹堿含量測定均采用254 nm，且喜樹堿在大多數溶劑中溶解性較差，為更準確便捷地檢測喜樹堿原料藥的含量，有必要探索在新的波長下測定喜樹堿含量的方法。將喜樹堿在200～400 nm掃描，發現在367 nm處有較大吸收，且溶劑二甲基亞砜無干擾。因此采用367 nm波長下測定喜樹堿含量，并進行含量測定方法學考察。喜樹堿的標準曲線方程為y=0.042 3x+0.013 2，r=0.999 6，濃度在4～20 μg/mL與其吸光度呈現良好的線性關系。平均加樣回收率為101.76%，RSD為0.75%，結果重現性良好，符合方法學要求。在367 nm波長下測定喜樹堿含量，所受干擾較小，測定結果可信度高。

關鍵詞：喜樹堿;紫外分光光度法;二甲基亞砜

中圖分類號：O657.32? ? ? ? ?文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（2018）21-0109-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.21.027? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Determination of Camptothecin Content by Ultraviolet Spectrophotometry

LI Jia-min，ZHOU Xiu-ling，WANG Jin-hua，ZHANG Bing-feng

（College of Chemistry and Bioengineering，Yichun University，Yichun 336000，Jiangxi，China）

Abstract： The ultraviolet absorption of camptothecin was increased at 254 nm after the lactonic ring opening，and the toxicity of camptothecin was aslo increased. In view of the current determination of camptothecin content at 254 nm，a new method content was explored for determination of camptothecin.Camptothecin had a large absorption at 367 nm from 200 nm to 400 nm，and dimethyl sulfoxide was undisturbed. Therefore，the content of camptothecin was determined at 367 nm and the methodology was investigated. The regression equation is y=0.042 3x+0.013 2，r=0.999 6. The concentration of camptothecin was in a good linear relationship with its absorbance within the range of 4～20 μg/mL. The average recovery of sample was 101.76% and RSD was 0.75%， the results had good reproducibility and more reliable.

Key words： camptothecin; ultraviolet spectrophotometry; content

喜樹堿（Camptothecin，CPT）是一種抗癌植物藥，是含有喹啉環的生物堿。其最早是在1966年，由美國化學家從喜樹中分離提取而得到純度較高的喜樹堿單體[1]。喜樹堿具有廣譜的抗癌功效、一定的免疫抑制作用以及抗病毒療效[2]。喜樹堿主要是作用于I型拓撲異構酶，通過抑制DNA代謝過程，發揮抗腫瘤活性[3，4]。喜樹堿的水溶性較差，在臨床上應用有一定的限制。當前采用紫外分光光度法測定喜樹堿原料藥的含量時，一般采用254 nm波長。研究發現，喜樹堿在254 nm波長處的吸收峰受光和熱的影響較大，有時甚至會導致其最大吸收峰消失[5]。此外，開環的喜樹堿在此波長下紫外吸收顯著增強，但喜樹堿開環后療效降低，毒性增加。因此，用該波長測定喜樹堿原料藥的含量，測定結果不能完全真實反應出具有生物活性的喜樹堿含量。喜樹堿易溶于二甲基亞砜，難溶于其他有機溶劑。為更準確地檢測喜樹堿的含量，以二甲基亞砜作為溶劑，并探索喜樹堿新的檢測波長及含量測定方法，來用于方便快捷地檢測喜樹堿原料藥的含量。

1? 材料與方法

1.1? 藥品與試劑

喜樹堿標準品（天津希恩思生化科技有限公司）;二甲基亞砜（DMSO，天津市永大化學試劑有限公司）;喜樹堿原料藥（天津希恩思生化科技有限公司）;去離子水。

1.2? 儀器

SQP天平（賽多利斯科學儀器有限公司）;TU-1810 紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.3? 方法

1.3.1? 喜樹堿標準品的配制? 精密稱量喜樹堿標準品10.0 mg，加入二甲基亞砜溶解，然后轉移至100 mL量瓶中定容，搖勻，即得到濃度為100 μg/mL喜樹堿標準品溶液。注意避光，室溫存留備用。

1.3.2? 喜樹堿原料藥供試品溶液的配備? 精密稱量喜樹堿原料藥約10 mg，加入二甲基亞砜溶解，于100 mL的量瓶中定容，搖勻，即得喜樹堿原料藥供試品溶液。注意避光，室溫保存備用。

1.3.3? 標準曲線的繪制? 精密移取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL喜樹堿標準品溶液置于10 mL量瓶中，然后分別向各個量瓶中加入二甲基亞砜定容。以二甲基亞砜作為調零溶液，在367 nm波長處分別測定以上喜樹堿標準品溶液的吸光度。以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。

2? 結果與分析

2.1? 最大吸收波長的確定

在200～400 nm波長范圍內對溶劑二甲基亞砜和喜樹堿標準品溶液進行掃描，全波長掃描結果見圖1。由圖1可見，喜樹堿標準品溶液在254 nm處有最大吸收峰，同時發現其在367 nm處也有一較大吸收峰;二甲基亞砜在254 nm波長處有明顯吸收，但它在367 nm波長處基本無吸收。因此，試驗最終選定367 nm作為測定波長。

2.2? 標準曲線的繪制

以二甲基亞砜作為調零溶液，在367 nm波長處分別測定“1.3.3”喜樹堿標準品溶液的吸光度。最終測定的吸光度依次是0.177、0.357、0.523、0.695、0.855。以喜樹堿標準品溶液的濃度x（μg/mL）為橫坐標，吸光度y為縱坐標，制作標準曲線，擬合線性回歸方程。由此得線性回歸方程為：y=0.042 3x+0.013 2，r=0.999 6。結果表明，喜樹堿標準品溶液濃度在4～20 μg/mL范圍內呈現良好的線性關系（圖2）。

2.3? 精密度試驗

準確量取喜樹堿標準品溶液0.8 mL，共6份，分別置于10 mL的量瓶中，加二甲基亞砜定容，以二甲基亞砜溶液為調零溶液，在367 nm處測吸光度，其結果見表1。平均吸光度為0.357，相對標準偏差RSD為0.33%，符合精密度試驗要求，說明儀器精密度較好，測定結果準確。

2.4? 重復性

量取喜樹堿供試品溶液0.8 mL共6份，分別置于已編好號的10 mL量瓶中，用二甲基亞砜定容，同時以二甲基亞砜作為調零溶液，在367 nm處測吸光度，試驗結果見表2。由表2可知，平均吸光度為0.377，相對標準差RSD為0.37%，表明此方法具有良好的重現性。

2.5? 穩定性

準確吸取喜樹堿供試品溶液0.8 mL，接著轉移至10 mL的量瓶中，并向其中加二甲基亞砜定容，以二甲基亞砜溶液為空白，在367 nm處每隔20 min測定1次吸光度，共測6次，結果見表3。由表3可知，平均吸光度為0.357，相對標準偏差RSD為0.56%，說明此測定方法穩定性較好。

2.6? 加樣回收率

取測得含量的喜樹堿供試品溶液6份，各0.6 mL置于10 mL的量瓶中，編好序號。1、2、3號中分別加入精密量取的喜樹堿標準品溶液0.6 mL，4、5、6號中分別加入精密量取的喜樹堿標準品0.8 mL。接著向各個量瓶中分別加入二甲基亞砜定容，并且以二甲基亞砜溶液作為空白，在367 nm處測定吸光度。計算加樣回收率、平均加樣回收率和RSD，精密度試驗結果見表4。由表4可知，平均加樣回收率為101.76%，相對標準偏差RSD為0.75%，符合加樣回收率要求，說明此方法測定結果的準確度較好。

2.7? 喜樹堿含量測定

準確量取0.8 mL的喜樹堿供試品溶液，置于10 mL的量瓶中，加入二甲基亞砜定容。在367 nm波長處測定其吸光度，平行3次，根據標準曲線即可求得喜樹堿原料藥的含量，結果見表5。由表5可知，喜樹堿原料藥的平均含量為99.10%，相對標準偏差RSD為0.16%。

3? 小結與討論

紫外分光光度法是原料藥以及制劑含量測定常用的分析方法之一。目前對喜樹堿的含量測定簡便快捷的方法是采用紫外分光光度法，采用的測定波長為254 nm。對喜樹堿標準品溶液進行全波長掃描，結果表明，喜樹堿標準品在254 nm處有最大吸收峰，同時它在367 nm處也有一較大的吸收峰。結合唐明珠[5]的研究，喜樹堿在254 nm處雖然有最大吸收，但其受光和熱的影響較大，結果重現性低;而在367 nm下的吸收峰卻受光和熱的影響較小。二甲基亞砜在254 nm處有一明顯吸收峰，這與喜樹堿標準溶液的最大吸收峰有重疊，但在367 nm處基本無吸收，選取367 nm作為檢測波長可避免上述問題。

采取紫外分光光度法在367 nm波長處測定喜樹堿原料藥含量時，標準曲線為y=0.042 3x+0.013 2，r=0.999 6，說明喜樹堿標準品濃度與其在367 nm處的吸光度之間具有良好的線性關系。同時利用標準曲線和紫外分光光度計得出喜樹堿原料藥的平均含量為99.10%，并且精密度、穩定性、重復性以及加樣回收率均良好，符合含量測定要求。所以，在367 nm波長下，以二甲基亞砜為溶劑，選用紫外分光光度法測定喜樹堿原料藥的含量具有一定的可行性，可為喜樹堿原料藥的含量測定等提供一種更加準確、簡便、適用的方法。

參考文獻：

[1] WALL M E，WANI M C，COOK C E，et al. Plant antitumor agents. I. The isolation and structure of camptothecin，a novel alkaloidal leukemia and tumor inhibitor from camptotheca acuminata1，2[J].Journal of the American Chemical Society，1966，88（16）：3888-3890.

[2] 郭? 辰，李? 真.喜樹堿的全合成研究進展[J].科技資訊，2009（1）：247-248.

[3] HSIANG Y H，HERTZBERG R，HECHT S，et al. Camptothecin induces protein-linked DNA breaks via mammalian DNA topoisomerase I[J].Journal of Biological Chemistry，1985，260（27）： 14873-14878.

[4] 陳夢涵，楊鳴華，孔令義.喜樹堿類藥物的研究與開發[J].世界科學技術-中醫藥現代化，2016，18（5）：724-730.

[5] 唐明珠.光和熱對喜樹堿含量測定的影響[J].中國藥學雜志，1983（1）：8-9.