塘棲產枇杷葉的藥材品質分析

馬哲龍 吳增艷 蔣福升 丁志山

[摘要] 目的 評估塘棲產不同品種枇杷葉的藥材品質。 方法 參照2015版《中國藥典》，采用烘干法、灼燒法、熱浸法分析測定塘棲產不同品種枇杷葉的水分、總灰分和浸出物含量；采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨（67∶12∶21，v/v/v）為流動相，柱溫25℃，流速為1.0 mL/min，檢測波長為210 nm，對齊墩果酸和熊果酸的含量進行測定。采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，以甲醇-0.4%磷酸水溶液（50∶50，v/v）為流動相，柱溫30℃，流速為1.0 mL/min，檢測波長為360 nm，對槲皮素和山奈酚的含量進行測定。結果 塘棲產各品種枇杷葉水分、總灰分、浸出物含量范圍分別為7.87%～9.45%、5.14%～6.22%、25.41%～29.68%；齊墩果酸和熊果酸的含量總和范圍為1.04%～1.25%，均符合2015版《中國藥典》的標準；此外，枇杷葉中的槲皮素和山奈酚的總含量范圍為0.17%～0.29%。 結論 塘棲產地的不同品種枇杷葉均具有較好的品質，值得進一步開發利用。

[關鍵詞] 枇杷葉；齊墩果酸；熊果酸；總黃酮

[中圖分類號] R284.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）10（c）-0111-04

[Abstract] Objective To evaluate the quality of different varieties of loquat leaves from Tangxi. Methods Reference to the 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia， the water content， total ash content and extract content of different varieties of loquat leaves were measured by oven drying method， ignition method and hot-dip method. The oleanolic acid and ursolic acid were detected useing Kromasil C18 （250 mm×4.6 mm， 5 μm） column， with mobile phase being acetonitrile-methanol-0.5% ammonium acetate （67∶12∶21， v/v/v）， column temperature being at 25℃， flow velocity being 1.0 mL/min， and detection wavelength being at 210 nm. The quercetin and kaempferol were detected by Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）column， with mobile phase being methanol-0.4% phosphoric acid （50∶50， v/v）， column temperature being at 30℃， flow velocity being 1.0 mL/min， and detection wavelength being at 360 nm. Results The range of water content， total ash content， and extract content of different varieties of loquat leaves were 7.87%-9.45%， 5.14%-6.22% and 25.41%-29.68%， respectively， the range of total content of oleanolic acid and ursolic acid was 1.04%-1.25%， all in line with the 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia. In addition， the range of total content of quercetin and kaempferol in loquat leaves was 0.17%-0.29%. Conclusion The different varieties of loquat leaves in Tangxi all have good quality and deserve further development and utilization.

[Key words] Loquat leaf； Oleanolic acid； Ursolic acid； Total flavonoid

枇杷葉是一味臨床常用傳統中藥，來源于薔薇科植物枇杷Eriobotrya japonica（Thunb.）Lindl.的干燥葉片，收載于歷版《中國藥典》[1]中，性微寒，味苦辛，歸肺、胃經，具有清肺止咳、降逆止嘔等功效，是目前中醫常用藥，臨床使用量大。現代藥理研究表明，枇杷葉中的化學成分結構多樣，主要有三萜酸類、黃酮類、倍半萜、多酚類、糖苷類以及揮發油類化合物[2-7]。近年來研究表明枇杷葉除具有較好的抗炎和止咳作用外，還具有其他廣泛的藥理作用，如降血糖、抗腫瘤、抗病毒、保肝和抗氧化等[2，8-17]。通過對枇杷葉化學成分和藥理作用的研究，可以看出枇杷葉這一傳統中藥具有多方面的用途，可用于多種疾病的預防和治療，并取得了良好的療效。

我國枇杷資源豐富，主要分布于浙江、江西、廣東、福建、臺灣、四川、貴州、云南、陜西、甘肅、江蘇、安徽等地。其中杭州市余杭區塘棲鎮是全國著名的枇杷產區之一，枇杷栽種歷史悠久，有“中國枇杷之鄉”的美譽。檢索文獻發現，雖然關于枇杷葉的相關研究報道很多，但目前還沒有關于塘棲枇杷葉品質的文獻報道，對塘棲這一主要枇杷產地枇杷葉系統研究尚未進行過，這與其果實品質不相稱。本研究對塘棲產不同種源枇杷葉的水分、總灰分、浸出物、齊墩果酸、熊果酸和總黃酮含量進行了分析測定，旨在為塘棲枇杷葉資源利用提供科學依據。現報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Dionex高效液相色譜儀（美國戴安公司）；Kromasil C18色譜柱（瑞典阿克蘇諾貝爾公司，4.6 mm×250 mm，5 μm）；AR2130精密電子天平（Ohaus Corp.Pine Brook，NJ，USA，萬分之一）；KQ-3200DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率250 W，頻率50 kHz，）。

1.2 試劑

色譜級甲醇（臨海市浙東特種試劑廠，批號：150519）；色譜級乙腈（臨海市浙東特種試劑廠，批號：151029）；甲醇（杭州高晶精細化工有限公司，批號：20160122）；雙蒸水；枇杷葉對照品（安徽省萬生中藥飲片有限公司，批號：150501）；齊墩果酸對照品（批號：110709-200505）、熊果酸對照品（批號：110742-200516）、槲皮素對照品（批號：100081-200907）、山奈酚對照品（批號：110861-201209）均購自中國食品藥品檢定研究院。

1.3 樣品

塘棲產硬條白砂、軟條白砂、寶珠、大葉楊墩和平頭大紅袍5個品種的枇杷葉，均于2016年6月采摘于塘棲鎮，經浙江中醫藥大學丁志山教授鑒定為薔薇科植物枇杷Eriobotrya japonica（Thunb.）Lindl.的樹葉。

2 方法與結果

2.1 一般分析

精密稱取塘棲枇杷葉各樣品及對照品枇杷葉粉末3 g，采用烘干法[1]測定水分含量，熱浸法[1]測定浸出物含量，每份樣品重復3次；精密稱取塘棲枇杷葉各樣品及對照品枇杷葉粉末2.5 g，采用灼燒法[1]測定總灰分含量，每份樣品重復3次。

2.2 齊墩果酸和熊果酸含量測定

2.2.1 色譜條件 流動相為乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液（67∶12∶21，v/v/v）；檢測波長為210 nm，流速1 mL/min，柱溫25℃。理論板數按熊果酸峰計算應不低于5000[1，15]。

2.2.2 對照品溶液制備 取齊墩果酸對照品、熊果酸對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL含齊墩果酸48 μg、熊果酸0.21 mg的混合溶液，備用。

2.2.3 供試品溶液制備 分別精密稱取不同品種的塘棲枇杷葉樣品及對照品枇杷葉粗粉約1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率50 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，加乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，備用。

2.2.4 樣品測定 將已經制備好的對照品溶液和供試品溶液，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，用外標法計算齊墩果酸和熊果酸的含量。

2.3 黃酮類物質含量測定

2.3.1 色譜條件 流動相為甲醇-0.4%磷酸水溶液（50∶50，v/v），檢測波長為360 nm，流速1 mL/min，柱溫30℃[18]。槲皮素和山奈酚分離結果見圖1。

2.3.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取槲皮素、山奈酚對照品適量，加甲醇溶解，制成每1 mL含槲皮素14.4 μg、山萘酚14.2 μg的混合溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取枇杷葉藥材粗粉約1 g，精密稱定，置具塞平底燒瓶中，精密加入甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1，v/v）50 mL，密塞，稱定重量，置水浴中回流1 h，立即冷卻，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液備用。

2.3.4 線性關系考察 取“2.3.2”項制備的對照品溶液1 mL，分別精密吸取5、10、15、20、25、30 μL，注入液相色譜儀，依法測定。以峰面積（y）為縱坐標，進樣量（x）為橫坐標，求得槲皮素回歸方程為：y = 26.303x - 0.0789（R2 = 0.9996），山奈酚標準方程為y = 29.021x + 0.3549（R2 = 0.9995），結果表明槲皮素進樣量在0.072～0.432 μg范圍內、山萘酚進樣量在0.071～0.426 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。見圖2。

2.3.5 精密度實驗 精密吸取對照品溶液10 μL，注入色譜儀，重復進樣6次，槲皮素和山萘酚的色譜峰面積的RSD分別為0.12%和0.13%。

2.3.6 穩定性實驗 精密吸取“2.2.3”項下供試品溶液10 μL，注入色譜儀，按0、2、4、8、16、24 h間隔進樣，依法測定槲皮素和山萘酚的色譜峰面積，測得槲皮素色譜峰面積的RSD為0.40%，山萘酚色譜峰面積的RSD為0.50%。

2.3.7 重復性實驗 取同一樣品粉末，按“2.3.3”項下的方法平行制備6份供試品溶液并依法測定槲皮素和山萘酚的色譜峰面積，求得峰面積RSD分別為0.23%和0.76%，表明本法重現性良好。

2.3.8 加樣回收率實驗 取硬條白砂枇杷葉藥材粗粉約0.5 g，精密稱定，共稱取6份，置具塞平底燒瓶中，分別精密加入對照品貯備溶液槲皮素（0.72 mg/mL）700 μL，山奈酚（0.71 mg/mL）500 μL，再按“2.3.3”項下的方法制備供試品溶液，并依法測定，記錄色譜峰面積，按外標法計算出槲皮素的平均加樣回收率為98.95%（RSD = 1.93%，n = 6），山奈酚的平均加樣回收率為98.88%（RSD = 1.86%，n = 6）。見表1～2。

2.4 塘棲各品種枇杷葉與對照品枇杷葉中成分含量測定結果

取塘棲枇杷葉各樣品及對照品枇杷葉粉末，分別測定其水分、總灰分、浸出物的含量；按“2.2”項下方法制備供試品溶液，并測定其齊墩果酸和熊果酸的含量；按“2.3”項下方法制備供試品溶液，并測定其槲皮素和山萘酚的含量。見表3。

3 討論

本研究參照2015版《中國藥典》對塘棲各品種枇杷葉的藥材品質進行研究，結果顯示塘棲產各品種枇杷葉水分含量在7.87%～9.45%之間，總灰分含量在5.14%～6.22%之間，浸出物含量在25.41%～29.68%之間，均符合2015版《中國藥典》中要求的水分不得超過13.0%，總灰分不得高于9.0%，浸出物不得低于18.0%，并且塘棲各品種枇杷葉浸出物含量明顯高于對照品枇杷葉的含量。

塘棲產各品種枇杷葉中齊墩果酸和熊果酸的含量總和在1.04%～1.25%之間，遠高于2015版《中國藥典》中要求的0.7%。塘棲產軟條白砂、寶珠、大葉楊墩三個品種的枇杷葉中齊墩果酸的含量明顯高于對照品中的含量，且熊果酸含量也略高于對照品，硬條白砂和平頭大紅袍兩個品種的齊墩果酸和熊果酸的含量總和與對照品相差不大。現代藥理學方法研究證明枇杷葉中三萜酸類成分是其抗炎止咳的主要成分[8-10]，齊墩果酸和熊果酸是藥典規定的枇杷葉中有效成分的質控指標，枇杷葉中三萜酸含量的多少直接影響其抗炎止咳的藥理作用，由于枇杷的種源較多，不同種源的枇杷葉三萜酸含量差異明顯，因此在采收時應考慮枇杷種源以保證藥材優良品質。

除三萜類物質外，黃酮類化合物也是枇杷葉中的另一類有效物質，有文獻報道黃酮類物質具有鎮咳祛痰作用[19-21]，因此總黃酮含量的多少也是影響枇杷葉藥材品質的重要因素。枇杷葉中的黃酮類物質主要是以槲皮素、山奈酚為苷元的苷類化合物[2，5]，本研究將枇杷葉中的黃酮類化合物進行水解，然后以槲皮素和山奈酚為對照品對枇杷葉中的總黃酮含量進行測定。實驗測得塘棲產各品種枇杷葉中總黃酮含量在0.17%～0.29%之間，對照品枇杷葉總黃酮含量為0.09%，塘棲產枇杷葉中總黃酮含量明顯高于對照品枇杷葉。

近年來有關枇杷葉的研究表明枇杷葉除具有良好的抗炎和止咳作用外，枇杷葉三萜酸還具有明顯的降血糖作用[11]，并具有一定的調節血脂和抗腫瘤作用[2，11]；枇杷葉總黃酮具有很強的抗氧化活性，可以明顯減少DPPH自由基轉化的作用[17]。因此三萜酸和總黃酮的含量多少直接影響枇杷葉的藥用品質的優劣。

我國枇杷種植范圍分布較廣泛，且品種極為豐富，枇杷葉的品種繁雜也給其藥用品質帶來重要影響。中藥品質的好壞，取決于有效物質含量的多少，本研究測得塘棲枇杷葉中浸出物、齊墩果酸和熊果酸總量明顯高于2015版《中國藥典》要求。同時本研究還對2015版《中國藥典》中未做含量要求的另一類有效物質黃酮類成分進行了含量測定，經測定塘棲各品種枇杷葉中總黃酮含量也較對照品高出很多，提示塘棲枇杷葉的有效物質含量較高，藥用品質較好。通過對塘棲枇杷葉的品質進行研究，期望能促進塘棲枇杷葉的開發，利用當地資源，變廢為寶，產生良好的社會效益和經濟效益。

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（收稿日期：2018-03-28 本文編輯：張瑜杰）