乙型肝炎病毒標(biāo)志物免疫學(xué)檢驗(yàn)的質(zhì)量控制管理

潘雪夜

長(zhǎng)春市第六醫(yī)院檢驗(yàn)科,吉林長(zhǎng)春 130052

乙型肝炎是一種常見的傳染性疾病,嚴(yán)重威脅著人民的身體健康。乙肝病毒(HBV)標(biāo)志物俗稱兩對(duì)半,包括HBsAg和抗-HBs、HBeAg和抗-HBe、抗-HBc,乙肝病毒標(biāo)志物檢驗(yàn)是臨床重要的檢測(cè)項(xiàng)目。HBV病毒侵人人體血液引發(fā)病毒血癥,隨血液進(jìn)入肝細(xì)胞轉(zhuǎn)錄復(fù)制,釋放病毒抗原性物質(zhì),引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物造成肝細(xì)胞造成損傷[1-2]。臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)是一種常用的檢驗(yàn)手段,包括免疫原與血清制備、抗原抗體反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光免疫、放射免疫等檢測(cè)技術(shù),是一種重要的臨床疾病檢驗(yàn)方式,檢測(cè)結(jié)果是臨床重要的診斷治療依據(jù)[3-4]。加強(qiáng)乙型肝炎病毒標(biāo)志物的免疫學(xué)檢驗(yàn)可以盡早發(fā)現(xiàn)感染者,及早治療。該文選擇吉林省衛(wèi)生廳臨床檢驗(yàn)中心下發(fā)的200份乙肝質(zhì)量控制血清為檢測(cè)對(duì)象,探討進(jìn)行乙肝病毒標(biāo)志物免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制管理的相關(guān)措施。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇吉林省衛(wèi)生廳臨床檢驗(yàn)中心對(duì)乙型肝炎病毒檢測(cè)進(jìn)行質(zhì)量控制管理研究下發(fā)的200份乙肝質(zhì)量控制血清為檢測(cè)對(duì)象,將其隨機(jī)分為觀察組、對(duì)照組,每組100份。

1.2 方法

1.2.1 檢驗(yàn)方法及措施 兩組血清樣本均采用常規(guī)(ELIsA)方法進(jìn)行檢驗(yàn)。試劑: HBsAg試劑盒(上海榮盛生物有限公司生產(chǎn)),質(zhì)控品(省臨床檢驗(yàn)中心發(fā)放);儀器:洗板機(jī)和酶標(biāo)儀(上海三科儀器廠生產(chǎn))。

1.2.2 檢測(cè)質(zhì)量控制管理措施 對(duì)照組按照常規(guī)臨床免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制管理措施。觀察組:檢測(cè)過程進(jìn)行全面的質(zhì)量控制管理,①定期檢定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)儀器設(shè)備,做好檢測(cè)儀器的定期保養(yǎng),保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、檢測(cè)儀器完好;②做好室間質(zhì)量控制管理,選擇可靠的室間質(zhì)控試劑和質(zhì)控品,以確保檢測(cè)的規(guī)范化;③做好室內(nèi)質(zhì)量控制,做好檢測(cè)標(biāo)本的來源控制,在具體的加樣、孵育、冼板、顯色和測(cè)定操作過程中嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化,加強(qiáng)樣本保存控制管理。具體措施:(1)定期進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室環(huán)境維護(hù),確保實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空間充分、照明良好、空調(diào)運(yùn)轉(zhuǎn)正常;加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備的校準(zhǔn)、保養(yǎng)維護(hù),定期校準(zhǔn)微量加樣器、酶標(biāo)儀和溫度計(jì),以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果不因儀器出現(xiàn)偏差。(2)室間質(zhì)量控制,試劑質(zhì)量和質(zhì)控品是做好室間質(zhì)量控制的保證。檢驗(yàn)試劑決定檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,要選擇國(guó)家食藥監(jiān)督局注冊(cè)批準(zhǔn)、信譽(yù)高的廠家,避免經(jīng)常更換廠家。質(zhì)控品為檢驗(yàn)必需品,包括試劑盒內(nèi)部和外部對(duì)照質(zhì)控品。內(nèi)部質(zhì)控品為試劑盒內(nèi)部的對(duì)照血清,用于判斷每次實(shí)驗(yàn)有效性,只能用于同批號(hào)試劑盒中。外部質(zhì)控品是強(qiáng)陽性、弱陽性、陰性質(zhì)控血清,為試劑盒外部單獨(dú)購買,用于判斷該批樣品檢測(cè)的有效性。(3)室內(nèi)的質(zhì)量控制 ①樣本的控制 一要避免溶血及細(xì)菌污染,溶血釋放的血紅蛋白有過氧化物酶活性,可與底物作用造成假性結(jié)果。細(xì)菌分泌的酶類物質(zhì)可分解抗原抗體蛋白質(zhì)對(duì)檢測(cè)造成非特異性于擾;樣本分離不全,血清中殘留的纖維蛋白原與試劑可發(fā)生非特異性反應(yīng)出現(xiàn)假陽性;取樣試管若含肝素及乙二胺四乙酸(EDTA)鹽可因肝素強(qiáng)大負(fù)電荷及EDTA鹽抑制辣根過氧化物酶活性出現(xiàn)錯(cuò)誤結(jié)果。塑料試管可吸附抗原類物質(zhì),久置出現(xiàn)假陰性;血清中某些干擾物如類風(fēng)濕因子(抗IgG抗體)也可發(fā)生非特異性反應(yīng)。②操作過程的控制,反應(yīng)孔的放置要盡量單種類排放,避免反應(yīng)孔置于一個(gè)載孔板上可能導(dǎo)致的交叉污染;定量加樣器在使用一定時(shí)間后彈簧會(huì)失去一定彈性,要定期進(jìn)行校正;加樣頭要盡量一次性使用,若要反復(fù)使用則必須消毒浸泡、反復(fù)沖洗、烘干后再使用;孵育:加樣完畢要先充分混勻封板并放入恒溫箱,選擇水浴加熱以防止邊緣效應(yīng)并嚴(yán)格控制溫度;洗板:洗板機(jī)要定期維護(hù)保養(yǎng)并檢測(cè)殘留,防止堵塞及細(xì)菌滋生;清洗液要嚴(yán)格按說明書配置。③標(biāo)本保存標(biāo)本檢測(cè)完畢后要吸取上層血清,置-20℃冰箱保存30 d,以便有異議時(shí)復(fù)查。凍融標(biāo)本混勻要采取反復(fù)顛倒方式避免劇烈震蕩。此外要避免停電反復(fù)凍融所致的蛋白分子機(jī)械剪切力破壞。(4)臨床免疫檢驗(yàn)分析后的質(zhì)量控制措施:標(biāo)本檢驗(yàn)完成后要對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行審查,對(duì)于異議標(biāo)本要及時(shí)核對(duì)。

1.3 評(píng)價(jià)方法

預(yù)期結(jié)果以省疾控中心的檢驗(yàn)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),按陰陽性進(jìn)行報(bào)告并報(bào)告檢測(cè)樣品的CD值和判定值(s/co)比值,s/co≥l時(shí)陽性,＜l時(shí)陰性[5-7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行調(diào)查數(shù)據(jù)的處理分析,計(jì)數(shù)資料采用[n(%)]表示,采用χ2檢驗(yàn);P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組準(zhǔn)確96例,錯(cuò)誤4例,準(zhǔn)確率為96%,對(duì)照組準(zhǔn)確74例,失誤26例,準(zhǔn)確率為74%。兩組對(duì)比觀察組明顯優(yōu)于對(duì)照組,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.294,P＜0.05)。

表1 兩組檢驗(yàn)準(zhǔn)確率對(duì)比[n(%)]

3 討論

乙型肝炎是一種常見的傳染性疾病,嚴(yán)重威脅著人民的身體健康。乙肝病毒(HBV)標(biāo)志物俗稱兩對(duì)半,包括HBsAg和抗-HBs、HBeAg和抗-HBe、抗-HBc是臨床重要的檢測(cè)項(xiàng)目。臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)是一種重要的檢驗(yàn)方式,包括抗原抗體反應(yīng)、免疫原與血清制備、放射免疫、化學(xué)發(fā)光免疫等技術(shù),其結(jié)果的準(zhǔn)確性是臨床診斷的重要依據(jù)。乙型肝炎病毒標(biāo)志物檢驗(yàn)是醫(yī)學(xué)常見的疾病檢驗(yàn),如何更有效地進(jìn)行檢驗(yàn)的質(zhì)量管理,提高檢驗(yàn)質(zhì)量是一項(xiàng)十分重要的任務(wù)[8-10]。

該次研究可以看出,進(jìn)行乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物質(zhì)量控制可以明顯提高檢驗(yàn)的準(zhǔn)確率。①要定期維護(hù)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境并定期保養(yǎng)檢測(cè)儀器。②要加強(qiáng)實(shí)室間質(zhì)量控制,選擇合適的試劑和質(zhì)控品,并注意不要太頻繁更換之,以盡可能提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性、可重復(fù)性。③室內(nèi)質(zhì)量控制是進(jìn)行控制的十分重要的步驟,要加強(qiáng)樣本來源控制,避免出現(xiàn)溶血、細(xì)菌感染,取樣試劑盒也要嚴(yán)格控制鋼制對(duì)結(jié)果造成干擾,出現(xiàn)假陽(陰)性,對(duì)于可導(dǎo)致出現(xiàn)假性結(jié)果的內(nèi)源性干擾因素如一些自身抗體、類風(fēng)濕因子等,也要注意區(qū)分;對(duì)于操作過程也要主要控制,反應(yīng)空的放置順序要避免加樣過程中各種成分的相互干擾和影響,操作過程中定量加樣器、加樣頭等各種儀器的使用也要主要做好消毒和維護(hù)保養(yǎng);加樣完成之后的孵育過程要做到充分混勻,加熱盡量選擇熱水浴等;洗板液的配置要嚴(yán)格遵守標(biāo)準(zhǔn),洗板機(jī)要定期維護(hù)保養(yǎng),避免細(xì)菌滋生。樣本的保存要注意低溫、冷藏、無菌。④在檢驗(yàn)結(jié)束之后要加強(qiáng)檢驗(yàn)結(jié)果的審核,并做好記錄。最重要的是要了解影響實(shí)驗(yàn)室測(cè)定質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)過程的所有步驟,實(shí)驗(yàn)室測(cè)定過程中要對(duì)該實(shí)驗(yàn)室存在的最薄弱的環(huán)節(jié)加以注意并積極預(yù)防。該研究中,經(jīng)過有效的質(zhì)量控制管理,觀察組檢測(cè)準(zhǔn)確率為96%,明顯優(yōu)于對(duì)照組的74%,兩者對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述,加強(qiáng)乙肝病毒標(biāo)志物的質(zhì)量控制管理,建立有本實(shí)驗(yàn)室針對(duì)性的、科學(xué)可行的室內(nèi)質(zhì)控管理方法,同時(shí)做好室間質(zhì)量控制管理,不僅可明顯提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,又可有力促進(jìn)檢驗(yàn)過程的標(biāo)準(zhǔn)化,保障檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1]藍(lán)義倫.淺談乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量控制[J].醫(yī)藥前沿,2013,1(1):25-26.

[2]李紅兵.乙型肝炎病毒標(biāo)志物免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)量調(diào)查分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2013,13(7):273-274.

[3]司志霖,蔡曉寧.化學(xué)發(fā)光免疫分析與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)乙型肝炎病毒標(biāo)志物比較分析[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2013,29(2):196-198.

[4]郭誼.TRFIA與ELISA法檢測(cè)乙肝病毒血清學(xué)標(biāo)志物注意事項(xiàng)[J].醫(yī)學(xué)信息,2014,27(6):528.

[5]丁善龍,王杰,魯鳳民.乙型肝炎研究及我國(guó)防治現(xiàn)狀[J].傳染病信息,2013,26(6):369-372.

[6]吳飛.兩種方法驗(yàn)證乙型肝炎病毒標(biāo)志物室間質(zhì)量控制結(jié)果分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(1):47-48.

[7]李君,臧桂珍,李鶴林,等.低水平血清乙型肝炎病毒表面抗原、e抗原測(cè)定及其臨床意義[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2003,(1):182-183.

[8]童紹珍,胡永麗,郝樹梅.乙型肝炎病毒標(biāo)志物免疫學(xué)檢驗(yàn)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)分析[J].醫(yī)藥前沿,2014(26):108-109.

[9]姜振光.乙型肝炎病毒標(biāo)志物免疫學(xué)檢驗(yàn)的臨床研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2016(19):167-168.

[10]彭強(qiáng),楊彩霞.乙型肝炎血清免疫學(xué)標(biāo)志物與HBV DNA定量檢測(cè)的相關(guān)性[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011(15):127-128.