食品藥品微生物實驗室質量控制分析

□ 馮晨韻 馮春艷 海南省食品藥品檢驗所海口分所

隨著微生物檢測與控制技術迅猛發展，危害分析與關鍵控制點、微生物風險評估等微生物控制技術為微生物檢驗方法的科學性提供了更高的要求。而實驗室的質量控制是保證檢測數據準確可靠的一個重要手段，是實驗室自我控制質量的常規程序，它能反映檢測質量的穩定性，及時發現檢測分析中的異常情況，隨時采取相應的校正措施，所以實驗室必須具有嚴格的質量控制管理以確保實驗結果出具的每個檢驗數據都科學、公正、準確。在實驗室質量控制工作中，建立完善的實驗室質量管理體系，加強環境設備、實驗室關鍵消耗品、人員、檢驗方法、實驗操作過程等的全面質量管理，確保實驗結果的準確可靠。

檢測機構由于業務本身的敏感性以及提供檢測報告這一服務性的特征，檢驗結果往往作為衡量產品質量的重要標準，并為企業生產、貿易、政府政策的制定提供重要依據，一旦出錯往往對企業造成重大經濟損失，還會危及人身安全，很容易造成社會事件，后果嚴重。為順應新的形勢，微生物檢測實驗室必須提高自身的技術管理水平，建立行之有效的質量管理體系。在日常工作中注意開展質量控制是為了保障檢驗結果的科學性、公正性、準確性，更好地服務于社會。

實驗室關鍵消耗品的管理

標準 菌株的質量控制

由于實驗室保存的菌種屬于微生物學檢驗中的質控品，是數據準確的決定因素，同時也是儀器校準、檢測質量的基礎工具。

1.標準菌株的來源

標準菌株必須來源于專業微生物菌種保藏機構，分類學地位明確，形態、染色、生理生化及血清學特性典型且穩定，以及實驗結果重復性好，極少發生變異的菌株。實驗室所用標準菌株主要來源于美國典型菌種保藏中心（ATCC）、工業微生物菌種保藏管理中心（CICC）、農業微生物菌種保藏中心（ACCC）、中國醫學微生物菌種保藏中心（CMCC）。

2.標準菌株的復蘇、復壯、傳代和保存方法

標準菌株經過復活并在適宜的培養基中生長后，即為標準儲備菌株。標準儲備菌株應進行純度、特性確認、指定其他性能等。標準儲備菌株保存時，可采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍等方法保存，而同一菌株應盡量選用兩種及以上方法進行保藏，若只能采用一種保藏方法的菌株應備份存放于兩個以上的保藏設備中。冷凍菌種一旦解凍轉種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。所有的標準培養物從標準菌株（0代）傳代培養次數原則上不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌種變異的風險。菌株必須定期轉種傳代，并做確認實驗，包括存活度、純度、血清型、實驗室中所需要的關鍵診斷指標。

3.菌種的管理

實驗室必須指定菌種使用、保藏管理制度和標準化操作規程，并實行雙人負責制管理，以確保溯源性和穩定性。對菌種在使用和保藏過程中產生的廢棄物進行消毒滅菌后方可處理，可使用121 ℃高壓滅菌至少30 min，或采用其他有效處理措施，保證其達到生物學安全。

培養 基和試劑的質量控制

培養基和試劑是微生物實驗的基礎，直接影響微生物試驗結果。

1.培養基的購買、驗收和儲存

根據需要制訂購買計劃，選擇合適的供應商進行購買，一般購買的數量控制在一年內能夠使用完畢。驗收的人員在驗貨時，應仔細核對培養基的各項信息，并做好登記入庫工作。培養基和試劑應嚴格按照供應商提供的貯存條件、有效期和使用方法進行保存和使用。開封后的培養基通過觀察粉末的流動性、均勻性、結塊情況和色澤變化等來判斷其質量的變化，若發現培養基受潮或物理性質發生明顯改變則不應再使用。

2.培養基的質量控制

新購買的培養基在使用之前要先進行質量控制試驗，只有達到質量要求的培養基才能使用。使用具有代表的穩定特性并能有效證明實驗室培養基最佳性能的菌株和參考培養基進行對照，選擇定量方法、半定量方法或定性方法對每批培養基或試劑進行生長率、特異性、選擇性或生化特性進行驗證。選擇培養基上目標菌落的外觀大小和形態都應十分典型，非目標菌應部分或全部被抑制。

3.培養基的配制、使用和培養

實驗室使用各種基礎成分制備培養基時，應按照配方準確配制，并記錄相關信息。應對經濕熱滅菌或過濾除菌的培養基進行pH、滅菌效果和均勻度等指標進行檢查。培養基融化可使用沸水浴或采用相同效果的方法，培養基添加劑應在培養基冷卻至46 ℃時再加入，緩慢充分混勻后盡快分裝到待用的容器中。

儲存前不要對瓊脂培養基表面進行干燥處理。對于采用表面接種形式的固體培養基應先對瓊脂表面進行干燥，即將平板蓋揭開，將平板倒扣于烘箱或培養箱中，或放在有對流風的無菌凈化臺中，直至培養基表面的水滴消失為止。凝固后的培養基應立即使用或存放于暗處或放在4～8 ℃冰箱的密封袋中。為保證平板之間要留有空隙進行空氣流通，使培養物的溫度盡快與培養箱溫度達到一致，培養時每排最多堆放六個平板。

一次 性無菌耗材的質量控制

現如今許多實驗室為了提高微生物檢測的效率，選擇使用一次性無菌耗材，所以其質量直決定了檢測數據的準確性和可靠性。實驗室常用的一次性無菌耗材主要有無菌培養皿、無菌吸管、無菌涂布棒、一次性接種環等。每個批次的一次性無菌耗材，按照包裝物或產品說明書上的方法開啟和使用，檢查包裝完整性，是否存在異常情況，任何污染、受潮或物理性狀發生改變者不得通過檢查。每批次的一次性無菌耗材至少抽取一個最小單個包裝作為測試抽樣樣品，在無菌條件下開啟內包裝物，按照產品分類分別取樣檢查，判定為無菌試驗符合，方可投入使用。

診斷 血清和生化鑒定盒的質量控制

驗收時必須看清血清各項信息，并儲存在合適的條件下，若發生渾濁，出現絮狀，應停止使用。使用前應驗證其有效性，使用客觀的標準對其品質進行評審。實驗過程中避免出現假陽性結果，應注意無菌操作，避免交叉污染，每套試劑開封后應妥善保存并盡快用完。最好備有兩個產家生產的血清和鑒定盒，以便互相對照，檢查其可靠性。

消毒 劑的質量控制

在微生物檢驗技術中，經常使用消毒劑殺滅環境中的微生物，它對保證檢測過程避免受或減少微生物污染起重要作用。購置的消毒劑根據其品種、性能、規格、有效時間等性質存放保存，還需對其進行消毒劑效果驗證。按產品說明書的要求操作，稀釋至說明書中規定的使用劑量，按原衛生部《消毒技術規范》（2002年版）中的定量殺菌試驗方法進行試驗，其殺菌效果應符合要求。

環境和設施的質量控制

環境 的質量控制

對有不同要求的區域加以明確的標識且進行環境監測，監測項目應涵蓋到位，包括對空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數（溫度、相對濕度、換氣次數、氣流速度、壓差、噪聲等）的有效控制和監測。另外，工作人員在進入潔凈區之前要更換潔凈服；生物安全實驗室除按有關規范要求進行管理和使用之外，尤其要注重防止檢測人員的職業暴露。應定期對潔凈實驗室進行清潔和消毒，所采用的化學消毒劑種類不得少于兩種，并定期進行更換。常用的消毒方法有紫外線消毒、臭氧消毒、熱力學滅菌、液體消毒劑消毒等。尤其注意的是，在必要時可采用熏蒸的方法降低潔凈區的衛生死角的微生物污染，消毒完后需進行合理通風以保證實驗人員的自身安全。

設備 的質量控制

對新購入的儀器要進行安裝調試、儀器培訓和驗收，對微生物檢驗、檢查、校準、采樣結果的準確性和有效性有重要影響的所有設備在投入使用前應進行計量溯源。但在實際工作中可能出現計量部門無法進行計量的儀器。對未列入國家《強制檢定工作計量器具明細目錄》的或計量部門當前無法計量的儀器，應由實驗室建立內部核查規程進行核查。例如全自動微生物生化鑒定分析儀、酶聯免疫分析儀等可以采用標準菌種或質控樣品進行檢測分析判定其準確性。使用較頻繁的儀器、性能不夠穩定且漂移率大的設備、剛維修或改裝后的儀器、移動位置的儀器檢和運行中發現有可疑現象或導出數據異常的儀器還要進行期間核查，期間核查可進行簡化的檢定或校準，其目的在于對設備的狀態是否正常和維持進行驗證。

技術人員的要求

實驗室應由具有一定資質的微生物學或相近專業的人員來操作或指導微生物檢測。技術人員必須經過嚴格的考核后才能正式上崗，還應經過實驗室生物安全方面的培訓，以保證檢測人員的自身安全和防止微生物在實驗室內部污染而危及環境。實驗室應定期通過參加內部質量控制、能力驗證或使用實驗室間比對等方式客觀評估檢測人員的能力和確認其資格。例如：操作實驗室使用的高壓蒸汽滅菌器時，操作人員需持有特種作業人員證書。

檢驗方法的要求

實驗室應采用國家、地方或行業規定且實驗室具有資質的檢驗方法。實驗室應對非標方法、實驗室設計的方法、超出其預定范圍使用的標準方法、擴充和修改過的方法進行確認，可代替方法的確認可參考ISO 16140進行。當進行藥品檢驗時，藥典方法或標準中規定的方法是經過驗證的，但還應進行方法適用性確認。

樣品采集、制備及處置的質量控制

樣品的采集和制備是微生物檢驗的第一個步驟，也是保障檢驗結果正確和準確的必要因素。微生物檢測樣品的采集應遵循隨機性、代表性的原則，采樣過程不應改變產品中原有微生物的狀況，并選取合適的采樣方案，例如二級采樣方案或者三級采樣方案，使用的工具和材料應是清潔的，有需要時應先做滅菌處理。樣品采集后應立即放入適宜的容器并維持適當的溫度進行運輸和儲藏。

樣品制備應在符合潔凈度要求及生物安全要求的實驗室內進行無菌操作，維持樣品的代表性、隨機性和穩定性，并去除可能干擾目標微生物檢測的因素。冷凍飲品應在45 ℃以下不超過15 min，或2～5 ℃不超過18 h解凍后進行檢驗。特定的微生物檢測要求從制備樣品勻液至樣品接種完畢，有特殊要求，例如大腸菌群的檢測中要求全過程不得超過15 min。

六、檢測結果的質量控制

確保實驗室出具的檢驗檢測報告具有高度的可靠性，通常會通過內部質量控制和外部控制評估檢驗進行監控。內部質量控制包括標準物質進行核查、實驗室內部比對（人員比對、方法比對、儀器比對等）；外部質量控制可由第三方機構采取一系列的方式連續地、客觀地評價各實驗室的檢測結果，包括定量項目的外控和定性項目的外控。實驗室每年應根據實際工作的需要制訂質量保證計劃，計劃盡可能覆蓋所開展的微生物項目和全體檢測人員。