原癌基因和鏈蛋白在肝癌中的表達及臨床意義

王娟+黃炳臣+盧運龍+羅春英+吳雪銘+馬鳳艷+成迎迎+龍喜帶+黃小英

【摘要】目的探討原癌基因（c-myc）和β-鏈蛋白（β-catenin）在肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC，以下簡稱“肝癌”）中的表達及意義。方法通過免疫組化EnVision法檢測108例肝癌組織及癌旁組織中c-myc和β-catenin的表達，觀察c-myc和β-catenin在肝癌組織中的表達與臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果c-myc和β-catenin在肝癌組織中的表達率分別為42.59%（46/108）和40.74%（44/108），c-myc和β-catenin在癌旁組織中陽性率分別為1481%（16/108）和4.63%（5/108），二者比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。c-myc和β-catenin在癌組織中的表達與腫瘤分化程度相關(guān)（P<0.001），與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個數(shù)、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統(tǒng)計學關(guān)聯(lián)（P>005）。結(jié)論在肝癌組織中c-myc和β-catenin表達密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】c-myc；β-catenin；肝癌；表達；臨床意義

中圖分類號：R735.7文獻標識碼：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2017.06.001

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and significance of c-myc and β-catenin in HCC（Hepatocellular carcinoma）.MethodsThe relationship between c-myc and β-catenin expression in HCC and the clinicopathological characteristics was observed through respectively detecting the expression of c-myc and β-catenin in 108 cases of HCC tissues and adjacent tissues by Immunohistochemical EnVision method.ResultsThe expression rate of c-myc and β-catenin in HCC tissues was 42.59%（46/108）and 40.74%（44/108）respectively，and the positive rate of them in the adjacent tissues was 1481%（16/108）and 4.63%（5/108），respectively，so difference between the two groups was statistically significant（P<0001）.The expression of c-myc and β-catenin in cancer tissues was correlated with the degree of tumor differentiation（P<0001），but it was not statistically related to age，sex，tumor thrombus，tumor number，tumor diameter and cirrhosis of adjacent tissues（P>0.05）.ConclusionThe expression of c-myc and β-catenin in HCC tissues was closely related.

【Key words】c-myc；β-catenin；HCC；expression；clinical significance

肝癌（HCC）是最常見的惡性腫瘤，是多基因突變、多因素和多步驟的復(fù)雜過程。近年來肝癌的發(fā)病率和死亡率呈逐步上升趨向[1]。該病具體的發(fā)病機制仍是研究熱點。由于肝癌早期癥狀隱匿、進展迅速，很多患者臨床確診時已為晚期。原癌基因（c-myc）是細胞增殖的重要調(diào)節(jié)因子，與多種腫瘤發(fā)病機制密切相關(guān)。β-鏈蛋白（β-catenin）是一種通過參與信號傳導(dǎo)、影響腫瘤發(fā)生發(fā)展的癌基因。筆者應(yīng)用免疫組化方法檢測c-myc和β-catenin在肝癌中的表達情況，分析它們表達的相關(guān)性及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。1資料與方法1.1一般資料收集2013年5月至2017年5月在右江民族醫(yī)學院附屬醫(yī)院住院手術(shù)的108例肝癌患者癌組織以及相應(yīng)的癌旁組織作為研究對象，其中男性患者95例，女性患者13例，年齡22～74歲。患者術(shù)前均未進行任何抗癌診斷及治療，每例均取肝癌組織及對應(yīng)癌旁肝組織（距腫瘤邊緣2 cm），且所有病例均無明確肝外轉(zhuǎn)移。按Edmondson分級法進行分級：Ⅰ～Ⅱ級為高分化75例，Ⅲ～Ⅳ級為低分化33例。臨床資料包括患者的姓名、性別、年齡；病理資料包括腫瘤直徑、腫瘤個數(shù)、癌旁組織伴肝硬化、門脈癌栓等。

1.2檢測方法肝癌手術(shù)切除的所有標本經(jīng)10%的福爾馬林固定24 h，常規(guī)石蠟包埋切片。免疫組化染色EnVision兩步法，DAB顯色。c-myc和β-catenin抗體和試劑盒均購自福州邁新，所有操作步驟均按照說明書上進行。用PBS緩沖液作為一抗陰性對照。

1.3免疫組化結(jié)果判定β-catenin蛋白的陽性定位于細胞核，以核內(nèi)有明顯的棕色顆粒作為核陽性的判定標準；c-myc陽性定位于細胞核，以核內(nèi)有明顯的棕色顆粒作為核陽性的判定標準。

1.4統(tǒng)計學方法應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計數(shù)資料的組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用MeNemar相關(guān)分析，檢驗水準：α=0.05，雙側(cè)檢驗。2結(jié)果2.1肝癌組織和癌旁組織中c-myc和β-catenin的表達肝癌組織病理形態(tài)學發(fā)生改變（圖1-A），c-myc陽性表達著色位于胞核，呈棕黃色（圖1-B）；β-catenin陽性表達位于胞核，呈棕黃色（圖1-C）。c-myc在肝癌組織、癌旁組織中陽性率分別為42.59%（46/108）和1481%（16/108）；β-catenin在肝癌組織、癌旁組織中陽性率分別為40.74%（44/108）和4.63%（5/108），二者差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。見表1。endprint

2.2肝癌組織中c-myc和β-catenin的表達與臨床病理指標的關(guān)系c-myc和β-catenin在HCC中的表達與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個數(shù)、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無顯著性相關(guān)（P>0.05），與HCC組織分化程度有顯著相關(guān)性（P<0.001）。見表2。

2.3c-myc和β-catenin在肝癌中表達的相關(guān)性c-myc和β-catenin均為陽性表達30例，均為陰性表達48例，依據(jù)MeNemar的相關(guān)性分析，二者在肝癌中表達呈正相關(guān)性（r=0.855，P<0.001）。見表3。

3討論目前為止，HCC的發(fā)病機制尚不是十分明確，主要是通過各基因的表達產(chǎn)物作用于肝癌細胞的增殖、分化、代謝過程，最終導(dǎo)致肝細胞癌變。

c-myc是一種基因核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控腫瘤細胞增殖及分化。研究發(fā)現(xiàn)，致癌基因c-myc擴增或過表達參與多種腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移[2]，在腫瘤的分化及預(yù)后方面起到關(guān)鍵作用[3]，其表達紊亂時會造成癌基因的激活，促進胃癌程序性細胞死亡[4]，它的異常表達參與胃癌的增殖及分化[5]。c-myc等多種原癌基因的激活及p53等抑癌基因的失活在肝癌形成的過程中起到至關(guān)重要的作用。此外，c-myc癌基因連續(xù)激活時可引起肝細胞的增殖和選擇性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致HCC的發(fā)生。黃炳臣等[6]檢測81例肝癌組織發(fā)現(xiàn)c-myc參與肝癌的形成，且與肝癌的分化密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，c-myc在癌組織中陽性表達顯著高于癌旁組織，二者差異有統(tǒng)計學意義。這表明c-myc的異常表達與肝癌的發(fā)生有密切的聯(lián)系。我們還發(fā)現(xiàn)c-myc在HCC中的表達與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個數(shù)、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統(tǒng)計學關(guān)聯(lián)，與HCC分化程度有關(guān)，此結(jié)果與某些文獻報道相一致，表明c-myc參與肝癌的形成，且可能與肝癌的分化程度有關(guān)。

Wnt信號通路主要有3條信號通路構(gòu)成，Wnt/β-catenin信號通路是經(jīng)典Wnt信號通路。迄今為止，Wnt/β-catenin是最受重視的信號通路，涉及多種腫瘤的形成機制。研究[7～9]發(fā)現(xiàn)在惡性腫瘤的細胞核中，Wnt/β-catenin異常的積聚與腫瘤預(yù)后不良有關(guān)。已有文獻猜測Wnt/β-catenin信號通路可能參與了肝細胞癌變的過程。劉銘等人[10]通過110例肝癌標本發(fā)現(xiàn)β-catenin在HCC中的異常表達與腫瘤分化、被膜浸潤等因素有關(guān)。Evason等[11]研究發(fā)現(xiàn)β-catenin在肝細胞癌早期發(fā)生改變、胞肝癌發(fā)生機制中起著重要作用。劉德忠等[12]用免疫組化檢測83例肝癌組織發(fā)現(xiàn)β-catenin與肝癌的分化有關(guān)，癌組織分化越低其陽性表達越高，此外其表達紊亂對肝癌患者的預(yù)后有一定的影響。Witjes等[13]發(fā)現(xiàn)β-catenin與HCC組織學分化程度相關(guān)，低分化癌細胞中β-catenin表達升高。另外有文獻認為阻斷β-catenin的異常表達，可提高患者預(yù)后的情況，可為臨床上治療肝細胞癌提供一些新的思路。我們的研究結(jié)果顯示，β-catenin在肝癌組織中陽性表達明顯高于癌旁組織，二者差異有統(tǒng)計學意義，表明β-catenin的異常表達參與肝癌的形成。我們研究還發(fā)現(xiàn)β-catenin在HCC中的表達與年齡、性別、有無癌栓、腫瘤個數(shù)、腫瘤直徑、癌旁組織是否有肝硬化均無統(tǒng)計學關(guān)聯(lián)，與HCC組織分化的程度有關(guān)，與某些文獻報道相一致，表明在肝癌中存在β-catenin胞核的異常積聚，猜測該因子在肝癌發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。

本研究對c-myc和β-catenin進一步行MeNemar相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)二者表達有密切相關(guān)性，呈正相關(guān)。程云娟等[14]檢測40例肝癌樣本發(fā)現(xiàn)c-myc和β-catenin的異常表達與肝癌的發(fā)生相關(guān)，且可以用于評估肝癌發(fā)病程度的進展及預(yù)后。姚忠強等[15]研究發(fā)現(xiàn)肝外轉(zhuǎn)移、術(shù)后復(fù)發(fā)及腫瘤分化的程度都與c-myc和β-catenin的異常表達有關(guān)，表明c-myc和β-catenin二者在肝癌形成的過程中起到協(xié)同作用，二者具有細胞內(nèi)調(diào)節(jié)增殖和癌變的信號傳導(dǎo)途徑，即Wnt途徑。但本課題目前僅研究二者在蛋白水平的表達，二者在基因水平的表達與蛋白水平的表達是否具有一致性尚不是非常明確，因此需進一步檢測c-myc和β-catenin在基因程度中的表達，明確其與腫瘤分化、增殖及凋亡之間的關(guān)系。

綜上所述，c-myc和β-catenin參與肝癌的形成，可能作為判斷惡性腫瘤的程度及轉(zhuǎn)移的重要依據(jù)。因此，深入研究c-myc和β-catenin二者在肝癌中的關(guān)系，為進一步探討肝癌的具體發(fā)病機制提供新的思路。

參考文獻

[1] 張金梁，翟博，方泰石，等.晚期肝癌和復(fù)發(fā)性肝癌治療的研究進展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2016，16（2）：358-361.

[2] Chang C，Liu J，He W，et al.A regulatory circuit HP1γ/miR-451a/c-Myc promotes prostate cancer progression[J].Oncogene，2017：332.[Epub ahead of print].

[3] 陳晨，郭遂群.子宮內(nèi)膜癌組織中DAPK3和c-Myc的表達及其與患者預(yù)后的關(guān)系[J].南方醫(yī)科大學學報，2016，36（6）：863-869.

[4] 潘晟，羅浩，李力.胃癌變患者C-myc mRNA與幽門螺桿菌感染及細胞程序性死亡的關(guān)系[J].中華實驗外科雜志，2013，30（11）：2408-2410.

[5] Wang F，Zhang D，Mao J，et al.Morusin inhibits cell proliferation and tumor growth by down-regulating c-Myc in human gastric cancer[J].Oncotarget，2017，8（34）：57187-57200.endprint

[6] 黃炳臣，黃永秩，羅春英，等.肝細胞癌中c-myc和c-fos表達及意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2010，26（4）：484-486.

[7] Wang ZY，Zhang H，Hou JX，et al.Clinical implications of β-catenin protein expression in breast cancer [J].Int J Clin Exp Pathol，2015，8（11）：14989-14994.

[8] Di Bartolomeo M，Pietrantonio F，Pellegrinelli A，et al.E-cadherin，and β-catenin expression as prognostic biomarkers in patients with radically resected gastric cancer.[J].Gastric Cancer，2016，19（2）：412-420.

[9] Nazemalhosseini ME，Kashfi SM，Mirtalebi H，et al.Prognostic Significance of Nuclearp-Catenin Expression in Patients with Colorectal Cancer[J].Iran Red Crescent Med J，2015，17（7）：e22324.

[10] 劉銘，師藝，張巍，等.CK19及β-catenin在原發(fā)性肝細胞肝癌中的表達及其臨床意義[J].新疆醫(yī)科大學學報，2016，39（8）：1004-1011.

[11] Evason KJ，Grenert JP，F(xiàn)errell LD，et al.Atypical hepatocellular adenoma- like neoplasms with catenin activation show cytogenetic alterations similar to well-differentiated hepatocellular carcinomas[J].Hum Pathol，2013，44（6）：750-758.

[12] 劉德忠，常波，林飛翔，等.β-catenin在肝癌組織中的表達及對肝癌患者預(yù)后的影響[J].癌變畸變突變，2017，29（4）：300-303.

[13] Witjes CD，Ten Kate FJ，Verhoef C，et al.Immunohis chemical characteristics of heatocellular carcinoma in noncirrhotic liver[J].J Clin Pathol，2013，66（8）：687-691.

[14] 程云娟，羅新華，程明亮.AEG-1、β-catenin和C-myc在原發(fā)性肝細胞癌中的臨床特性與分析[J].標記免疫分析與臨床，2015，22（7）：633-636.

[15] 姚忠強，歐超，朱波，等.β-catenin，cyclinD1及c-myc在肝細胞癌中的表達[J].腫瘤防治研究，2006，33（12）：849-852.

（收稿日期：2017-09-21修回日期：2017-11-09）

（編輯：梁明佩）endprint