固相萃取-高效液相色譜法測定地表水中三氯吡氧乙酸殘留量的研究

李 青,徐瑞麗,李麗君,梁 軍,袁 曉

(廣電計量檢測(湖南)有限公司，湖南 長沙 410205)

三氯吡氧乙酸，英文通用名稱：Trichlopyr ，CAS號：55335-06-3，化學名稱：[(3,5,6-三氯-2-吡啶)氧基]乙酸。屬內吸傳導型苗后莖葉處理除草劑，施藥后很快被雜草吸收，并傳導到全株各部位，敏感雜草受藥2～3 d內頂端萎蔫，出現典型激素類除草劑反應，植物畸形、扭曲，最后死亡。其主要用于防除冬小麥、玉米田間等的一年生闊葉雜草，如豬殃殃、馬齒莧、龍葵、水花生等對作物有好安全性。近年來關于氯氟吡氧乙酸的文獻報道很少，多為氯氟吡氧乙酸類在病蟲害防治方面的使用安全、農藥殘留以及環境中降解等方面的研究[1-6]，未見使用反相高效液相色譜法進行含量測定分析相關報道。本文采用C18固相萃取柱對地表水進行凈化，使用C18反相柱和紫外可變波長檢測器，對地表水中三氯吡氧乙酸進行定量分析，得到良好結果。該方法具有操作簡單、準確度高、重現性好特點，能為三氟吡氧乙酸的生產質量控制和分析方法提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲醇 ：色譜純；超純水：電阻率：18.25MΩ·cm；冰醋酸：分析純；C18固相萃取柱；三氯吡氧乙酸標準品：99.0%，Dr. Ehrenstorfer Gmbh。

Agilent 1260型高效液相色譜儀，帶二極管陣列檢測器(DAD)；Agilent色譜工作站；固相萃取儀；電子天平：BD324，準確至0.1mg。

1.2 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18，4.6×250mm×5μm；流動相：V(甲醇): V(水(含0.5%冰乙酸))=80:20；流速：1.0mL/min；檢測波長：291nm；柱溫：25℃；進樣量：5μL。

1.3 標準溶液的配制

準確稱取0.0100g三氯吡氧乙酸標準品于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，得到三氯吡氧乙酸標準品濃度為1000μg/mL的儲備液，搖勻備用。稀釋1000μg/mL的儲備液為以下濃度：10、20、50、100和200μg/mL；搖勻作為標準溶液。

1.4 樣品處理

水樣分別取自郊區池塘、水渠、小溪。準確量取20mL水樣，用冰醋酸調節pH，渾濁水樣經高速離心機4000轉/min離心5min，取澄清水至活化后的C18小柱，真空泵抽干，用5mL甲醇洗脫，收集洗脫液至40℃水浴氮吹儀上氮吹干，用流動相溶解殘留物并定容至1mL，過0.22μm有機濾膜,按1.2中的色譜條件測定。

2 結果與討論

2.1 流動相的優化

色譜柱及流動相的選擇是決定液相色譜分離效果的關鍵。以體積比為80∶20的甲醇-水為流動相，是因為分離色譜柱的固定相為ZORBAX SB-C18，在用洗脫能力較強的甲醇比例高于80%作流動相時，三氯吡氧乙酸出峰時間過快；而甲醇比例低于80%作流動相時，三氯吡氧乙酸保留時間延長且峰型變寬。用體積比為80∶20的甲醇-水且加入0.5%冰乙酸為流動相時，此時的色譜峰峰型對稱，基線平穩，在最優流動相條件下測定標準品色譜圖如圖1所示。

圖1 三氯吡氧乙酸標品圖譜

2.2 檢測波長的確定

使用紫外可見分光光度儀對氯氟吡氧乙酸異辛酯的標準溶液進行200～400 nm的全波長掃描，得到如圖2的紫外圖譜。吸收波長在201、231、291 nm都出現吸收峰，但是在波長201、231nm處，線性范圍窄，而且有干擾峰，不適合常量分析。291 nm為三氯吡氧乙酸的第3個吸收峰，在該波長下三氯吡氧乙酸吸收值適中，線性范圍寬，可以滿足定量分析的要求。

圖2 紫外圖譜

2.3 提取和凈化條件的優化

鑒于三氯吡氧乙酸顯弱酸性及相關文獻研究[7-9]，故考慮在提取溶劑中添加適量酸，以提高目標物的回收率。分別取5、10、15、20、30、50mL水樣進行C18柱固相萃取，發現取樣量過少時C18柱富集量不夠而達不到檢出限，取樣量過多時C18柱會吸附雜質而產生干擾，通過對各取樣量回收率的比較，取20mL水樣進行凈化時回收率能在80%以上，達到地表水中三氯吡氧乙酸測定的實驗要求。

2.4 方法的線性關系

配制5個不同濃度的標準溶液，在最優的色譜條件下進行色譜分析，峰面積(y)與濃度(x)之間表現出良好的線性，得到線性方程為y=3.6951x+7.8549，相關系數為：0.9996。結果表明三氯吡氧乙酸在2～600μg/mL范圍內，最低檢測限為0.01mg·L-1,質量濃度和峰面積呈良好的線性相關性。具體數據見表1。

表1 三氯吡氧乙酸標準品的濃度與峰面積

通過對數據進行處理得到如下圖3所示圖譜：

圖3 校正曲線

2.5 精密度試驗

用空白水樣配制5個同一濃度的樣品。在相同的色譜操作條件下測定其濃度值，計算三氯吡氧乙酸的平均值和相對標準偏差，結果見表2。該方法的相對標準偏差為0.13%，表明本方法可行。

表2 三氯吡氧乙酸精密度測定結果

2.6 準確度試驗

評價該方法的準確度，可采用添加回收率試驗，即在已知被測組分含量的樣品中精確加入一定量的被測組分標準品，再進行測定，計算回收率。取池塘水、水渠水、小溪水各三份，每一份水樣中加入三個不同濃度的標準溶液，按1.4的處理過程進行樣品前處理，對處理后的每個樣品重復測定3次，測得的回收率和相對標準偏差見表3。從表3中所示數據可知，本方法的回收率在82%～105%之間，相對標準偏差在4.0%～5.3%之間，數據表明本方法的回收率能夠滿足地表水中三氯吡氧乙酸殘留量的測定要求。

表3 三氯吡氧乙酸回收率測定結果

3 結論

本文建立了固相萃取-高效液相色譜測定地表水中三氯吡氧乙酸殘留量的分析方法。通過C18固相萃取柱對地表水進行凈化和富集，避免大量使用有機溶劑的同時加快了檢測進程。隨著液相色譜儀和色譜柱的發展，高效液相色譜法已成為當今農藥產品質量檢測、環境污染監測以及農藥殘留研究的重要手段。本文提出高效液相色譜分析方法簡單快速、實驗結果準確可靠，為地表水中三氯吡氧乙酸殘留量的測定提供了良好的檢測手段。

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