CLIP3啟動子區3bp indel與大腸癌發生相關性研究

王會平 楊 雪 朱占勝

1徐州醫科大學基礎醫學院遺傳學教研室 江蘇省徐州市 221004 2徐州醫科大學公共衛生學院 江蘇省徐州市 221004 3徐州醫科大學基礎醫學院病理學教研室 江蘇省徐州市 221004

結直腸癌（CRC）是世界第三大最常見的癌癥，其死亡率在惡性腫瘤中列第三位[1]，目前CRC發病機制仍未完全揭示，現有研究發現其與遺傳相關[2]。凋亡是基因調控的程序化細胞死亡，細胞增殖與細胞凋亡的比例決定腫瘤的生長。TNF-α信號途徑是細胞凋亡的主要途徑之一。在CRC發生過程中，CLIP3通過調控RIP1的泛素化參與激活TNF-α信號途徑誘導細胞凋亡的發生[3]，因此CLIP3與CRC的關系逐漸成為目前研究的熱點。本項目首次發現并提出了CLIP3基因啟動子區一個3-bp插入/缺失多態性（rs372459950）和CRC患病風險相關聯，本研究對于CRC的預測和防治具有重要意義。本課題組調查了徐州市第二醫院就診的CRC患者與健康對照體檢人群的rs372459950，試探討其與CRC患病風險的相關度。

1 對象與方法

1.1 研究對象

CRC患者450例，男289例，女161例，年齡51.6±10.4歲，無高血壓、糖尿病、嚴重肝腎疾病及心肺功能不全史，收集2015年5月至7月在徐州市二院入院治療的CRC患者，患者符合我國衛生部2010年關于結直腸癌的命名和診斷標準。健康對照799例，選自健康體檢人群的隨機個體，男512例，女287例，年齡52.1±10.3歲，無相關病史。受試對象為徐州地區本地人群、漢族并且沒有血緣聯系。

1.2 標本收集

各受試對象均抽取靜脈全血1.5 mL，采用DNA抽取試劑 (Qiagen)從全血標本提取DNA留用。

1.3 基因分型

基因分型采用基因測序的方法，抽提DNA的樣本送上海生工公司測序。測序結果比照NCBI SNP database確定樣本基因型，最終計數由不同二個實驗者進行。

1.4 統計分析

采用Χ2檢驗分析除年齡外臨床資料各因素差別；年齡兩組差別采用雙側t檢驗；使用Χ2檢驗分析受試兩組的基因型和等位基因頻率差別；遺傳多態性與CRC患病風險的相關度用邏輯回歸分析進行分析，選取校正臨床資料各因素后的比值比（OR）和95%置信區間（CI）表示， P＜0.05具有統計學意義。

2 結果

2.1 受試對象各組臨床資料

450例CRC樣本和799例健康對照樣本人口學資料情況比較（見表1），數據提示各臨床資料間無明顯差別（P＜0.05）。

表1：病例組和對照組的臨床資料

2.2 rs372459950基因座分型結果

經測序比對，分別得到插入/缺失（Ins/Del），插入/插入Ins/Ins），缺失/缺失（Del/Del）三種基因型。我們觀察到缺失的堿基序列為CTT，對照組基因座基因型分布頻率 Phwe＞0.05。

2.3 CLIP3基因插入/缺失多態性頻率分布

研究中插入缺失多態的基因型及等位基因頻率分布特點見表2，從表中可以看出，Del/Del基因型頻率在病例組中的頻率為8.2%，而在正常對照組中的頻率為4.8%，顯然病例組中Del/Del基因型頻率高于正常對照組。

表2：CLIP3基因插入/缺失多態基因型分布

2.4 多態性與CRC易感性分析

邏輯回歸分析（校正各臨床資料因素）結果表明：帶有雜合子和缺失型純合子的個體CRC患病風險升高（OR=1.21，95%CI: 1.01-1.56，P=0.09）（OR=1.80，95%CI: 1.20-2.35，P=0.001）， 即 在 95%置信區間中，以插入型純合子為對照，攜帶雜合子個體CRC患病風險增加21%（P=0.09），攜帶缺失型純合子個體CRC患病風險增加80%（P=0.001）。上述分析數據表明rs372459950與CRC患病風險顯著關聯，并且雜合子和缺失型純合子促CRC發生。

3 討論

CLIP3啟動子區3-bp插入/缺失多態有可能影響該啟動子區活性，進而干擾CLIP3基因的轉錄，從而來調控CLIP3基因表達，而CLIP3在調節TNF-α介導的細胞凋亡中起著重要的作用，然而，在目前的研究中我們僅發現了CLIP3基因多態與CRC的關聯性，CLIP3在CRC發生過程中促癌還是抑癌還需要進一步的功能實驗鑒定。

近年來的研究發現在多形性成膠質細胞瘤細胞中CLIP3表達下降，患者的生存率明顯下降。CLIP3與spy1作用，可以調節腫瘤抑制基因CYLD的表達。到目前為止，尚無在CRC中該調節通路被激活的相關報道，課題組猜測CLIP3可能通過不依賴TNF-α介導的細胞凋亡途徑進行調控，這種潛在的通路有待探索。

本論文是首次發現在中國漢族人群中CLIP3基因啟動子區域插入/缺失多態與CRC易感性之間存在顯著關聯，但本次實驗人力，物力，財力都有限，調查范圍僅局限在徐州地區的漢族人群，且未檢測基因表達情況，得出更加明確的結論還有待于更大樣本量和其他不同人群中相關研究數據的支持。

（通訊作者：朱占勝）

[1]Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics,2013.CA：a cancer journal for clinicians.2013;63(01)：11-30.

[2]侯睿智,舒振波,侯睿達,劉艷.大腸癌相關基因突變與大腸癌遺傳易感性的研究.中國實驗診斷學 ,2017;21(01)：173-176.

[3]Fujikura D,Ito M,Chiba S,Harada T,Perez F,Reed JC, Uede T,Miyazaki T.CLIPR-59 regulates TNF-αinduced apoptosis by controlling ubiquitination of RIP1.Cell Death Dis.2012;3(02)：e264.