應(yīng)用高效液相色譜法檢測食品中黃曲霉毒素

□ 李 莉 金銘特 浙江省杭州市余杭區(qū)食品藥品監(jiān)測中心

1 黃曲霉毒素的危害與影響

黃曲霉毒素（AFT）是一種化學結(jié)構(gòu)類似的化合物，是二氫呋喃香豆素的衍生物。而黃曲霉毒素就是由黃曲霉、寄生曲霉產(chǎn)生的一種次生代謝產(chǎn)物，其主要出現(xiàn)在一些濕熱地區(qū)的食品以及飼料中。黃曲霉毒素在土壤、各種堅果以及動植物中廣泛存在，容易污染花生、玉米以及小麥等糧油產(chǎn)品，是一種對人體健康產(chǎn)生較大危害的霉菌毒素。2016年，歐盟對于黃曲霉毒素共發(fā)出原始通報2 993份，原始通報產(chǎn)生的后續(xù)跟蹤信息7 288條，總體2016年通報比2015年增長11.1%。在歐盟報告中明確與中國有關(guān)信息主要包括中國堅果、堅果產(chǎn)品和籽類中黃曲霉毒素被通報數(shù)量排名第5，通報數(shù)量為50條；原產(chǎn)中國的花生被通報49條，其中48條采取邊境拒絕措施；我國產(chǎn)品被通報總數(shù)254條，同比下降35.53%。現(xiàn)階段如何解決黃曲霉毒素問題已經(jīng)是食品安全領(lǐng)域的重點問題[1]。

2 高效液相色譜法（HPLC檢測法）

通過HPLC檢測法加強對黃曲霉毒素的檢測是現(xiàn)階段較為權(quán)威的方式。通過高效液相色譜以及熒光檢測器進行檢測在實踐中效果顯著。其中，HPLC檢測法就是一種色譜法，以甲醇等液體作為其流動相，利用四元泵把一些緩沖液以及溶劑泵入色譜柱之中，這樣就會分離在樣品中的不同組分，其被分離的物質(zhì)在進入檢測系統(tǒng)中就會被發(fā)現(xiàn)。高效液相色譜法在檢測黃曲霉毒素的過程中，首先要利用三氯甲烷、甲醇等溶液的提取溶劑對要監(jiān)測物質(zhì)進行處理，提取黃曲霉素樣品，然后利用過濾膜過濾之后放置在反相色譜柱中，再通過熒光檢測器對其進行系統(tǒng)的監(jiān)測分析，通過對獲得的峰高以及峰面積利用綜合外標法進行分析，就可以了解在被檢測物中黃曲霉毒素的具體含量[2]。

而在實踐中為了提升樣品的純度，避免各種雜質(zhì)的影響，可以將HPLC檢測技術(shù)與免疫親和層析技術(shù)相結(jié)合，進而檢測黃曲霉毒素的特異性以及靈敏性。在黃曲霉毒素進入免疫親和柱的時候，其產(chǎn)生的免疫親核反應(yīng)會吸附在柱內(nèi)的固體支持物中，而在提取融合劑流于親和柱的時候，存在的抗體就會與黃曲霉毒素進行融合。通過清水沖洗就可以有效消除在免疫親和色譜柱中殘留的各種雜質(zhì)，再利用甲醇等洗脫劑就可以清除殘留的黃曲霉毒素[3]。

而為了獲得精準的黃曲霉素B1以及黃曲霉毒素M1的靈敏度，可以應(yīng)用光化學衍生技術(shù)、

電化學衍生技術(shù)以及碘衍生技術(shù)、三氟乙酸柱前衍生化技術(shù)等。其中三氟乙酸柱前衍生化技術(shù)是現(xiàn)階段AOAC應(yīng)用中的重要技術(shù)，在實踐中靈敏度較高。

FLD檢測器方式應(yīng)用在液相色譜檢測中，具有分辨率高、靈敏度高且精準性較強的特征。在實踐中可以對不同類型的黃曲霉素進行科學的分析。但是因為其應(yīng)用步驟流程相對較為復雜，黃曲霉素的種類繁多，各種結(jié)構(gòu)較為相似，在進行分離處理的時候就會浪費大量的人力、物力以及時間資源。同時，黃曲霉素的G1、B1檢測靈敏度相對較低，在實踐中必須要通過衍生化的方式對其進行處理，對于HPLC檢測操作人員的要求較為嚴格，因此，主要在專業(yè)的實驗中應(yīng)用。

3 液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS）

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法是通過色譜技術(shù)對樣品進行分離，再通過聯(lián)合質(zhì)譜檢測技術(shù)檢測樣品。在實踐中質(zhì)譜技術(shù)具有一定的檢測優(yōu)勢，且其選擇性良好，是今后檢測黃曲霉素的重要技術(shù)。在實踐中，通過溶液提取樣品中的黃曲霉素，然后進行樣品稀釋以及純化處理，對其進行免疫親和柱的純化吸附，通過霉菌毒素多功能凈化站對其進行吸附純化處理，其提取液通過液相色譜柱對其進行分離，通過電噴霧的方式對其進行離子化處理。在監(jiān)測過程中主要采取反應(yīng)離子監(jiān)測方式開展工作，基于色譜技術(shù)保留時間以及質(zhì)譜產(chǎn)生的碎片技術(shù)、離子風度的定性比，通過外標方式對其進行定量的分析處理。

4 結(jié)束語

黃曲霉毒素對動物以及人類產(chǎn)生較為嚴重的危害，現(xiàn)階段人們對其較為關(guān)注。在自然界中存在大量的黃曲霉毒素，而這些黃曲霉毒素會給人們的生活以及生產(chǎn)帶來較為嚴重的影響。對此必須要加強對黃曲霉毒素的檢測。通過高效液相色譜技術(shù)對黃曲霉毒素進行檢測可以有效了解具體含量，進而在根本上保障食品安全性。

[1]宋月,陳穎,白欣.光化學衍生-高效液相色譜法檢測食品中的黃曲霉毒素[J].實用預(yù)防醫(yī)學,2016,23(7):882-884.

[2]趙霞.光化學衍生-高效液相色譜法檢測食品中的黃曲霉毒素[J].中國保健營養(yǎng),2017,27(13).

[3]何翠霞.高效液相色譜在黃曲霉素檢測中的應(yīng)用[J].食品安全導刊,2016(18):116.