快速測(cè)試板在飲用水微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

□ 汪 新 浙江方圓檢測(cè)集團(tuán)股份有限公司

微生物快速檢測(cè)技術(shù)在應(yīng)用中主要?jiǎng)澐譃閮煞N。其一就是在傳統(tǒng)微生物檢測(cè)中，改良培養(yǎng)方式及鑒定手段，簡(jiǎn)化樣品的處理，包括微生物快速測(cè)試板及試劑盒等多種方法。其二就是借助生物工程、遺傳學(xué)及熒光法等諸多高科技，能夠直接對(duì)微生物細(xì)胞及代謝物特異化進(jìn)行微生物檢測(cè)，如PCA以及ATP熒光法等。這兩類(lèi)方法，第一種方法能夠有效簡(jiǎn)化操作步驟，在一定程度上有效提升了檢測(cè)的整體特異度及敏感度，在一定程度上縮短了檢測(cè)時(shí)間，增加了一定的檢測(cè)成本。第二種方法的優(yōu)點(diǎn)就是無(wú)須培養(yǎng)或只需較短的培養(yǎng)時(shí)間，具體的檢測(cè)時(shí)間縮短，配置部分精密儀器及具備一定經(jīng)驗(yàn)的檢測(cè)人員。

1 微生物檢測(cè)在水質(zhì)檢測(cè)方面的現(xiàn)狀

我國(guó)的《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中所規(guī)定的常規(guī)微生物指標(biāo)，包括總大腸菌群、菌落總數(shù)以及大腸埃希氏菌。在開(kāi)展飲用水的微生物檢測(cè)過(guò)程中，應(yīng)當(dāng)確保生物檢測(cè)處于無(wú)菌環(huán)境下，在完成對(duì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)消毒步驟之后，需要重視培養(yǎng)基的配置，完成多種藥劑混合后的消毒處理。在快速微生物檢測(cè)過(guò)程中，根據(jù)水質(zhì)的檢測(cè)情況，采用快速測(cè)試板檢測(cè)具有經(jīng)濟(jì)實(shí)用、快速優(yōu)勢(shì)，適合運(yùn)用于水質(zhì)檢測(cè)中。

2 快速測(cè)試板的檢測(cè)原理及操作方法

2.1 快速測(cè)試板的檢測(cè)原理

微生物快速測(cè)試板是一種事先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基及吸水凝膠。培養(yǎng)基有效結(jié)合了酶及底物反應(yīng)的特異性和菌落顏色的可視化信息，可以在自然環(huán)境中檢測(cè)和鑒定不同的微生物個(gè)體，還可以對(duì)混合生長(zhǎng)的多種微生物進(jìn)行檢測(cè)。此種顯色培養(yǎng)基是一類(lèi)利用微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)顯色的原理來(lái)檢測(cè)微生物的新型培養(yǎng)基。這些相應(yīng)的顯色底物由產(chǎn)色基因和微生物部分可代謝物質(zhì)組成，在特異性酶作用下，游離出產(chǎn)色基因顯示一定顏色，直接觀察菌落顏色即可鑒定菌種。此種新型分離性培養(yǎng)基，具備較高的反應(yīng)靈敏度及特異性。

2.2 快速測(cè)試板的操作步驟

采取快速檢測(cè)板檢測(cè)方法，有效減去了水樣的處理、實(shí)驗(yàn)室及使用設(shè)備的消毒以及培養(yǎng)基制備等較為煩瑣的步驟。在完成水樣采集之后，在無(wú)菌條件下，在實(shí)驗(yàn)面上放置微生物測(cè)試板，揭開(kāi)上層膜，采用消過(guò)毒的吸管，抽取1 mL的飲用水水樣，將其緩慢靜滴至紙片上，緩慢覆蓋上層膜，在靜置10 s之后培養(yǎng)基凝固。將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。依照相應(yīng)的微生物檢測(cè)項(xiàng)目具體需求，按照既定的時(shí)間及培養(yǎng)溫度加以培養(yǎng)。最后能夠鑒定具體的菌落顏色及特點(diǎn)。

3 微生物快速測(cè)試板實(shí)際運(yùn)用

將快速測(cè)試板測(cè)試方法運(yùn)用于某公司的水質(zhì)檢測(cè)工作中，針對(duì)400份水樣完成了四種菌體的分批檢測(cè)，并且針對(duì)5%的水樣，完成了精密度試驗(yàn)及對(duì)比傳統(tǒng)檢測(cè)方法試驗(yàn)。

依照《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》GB/T5750.12-2006，借助平皿計(jì)數(shù)法完成菌落總數(shù)檢測(cè)，將水樣置于37 ℃營(yíng)養(yǎng)瓊脂的有氧條件下共計(jì)48 h，得出1 mL水樣中所存在的菌落總數(shù)，能夠直接用眼睛觀察。菌落的總數(shù)測(cè)試板應(yīng)用原理，與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法一致。取出1 mL的水樣，實(shí)驗(yàn)前將營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基涂抹于測(cè)試板之上，后添加脫氫酶指示劑TTC，菌落在測(cè)試片上呈現(xiàn)紅色，從而有效縮短計(jì)數(shù)時(shí)間，同時(shí)，還能夠提升計(jì)數(shù)效果。

3.1 總大腸菌群檢測(cè)

總大腸菌群主要指的是在一群在37 ℃培養(yǎng)24 h后，能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌。依照生活飲用水的檢測(cè)指標(biāo)方法，針對(duì)總大腸菌群的具體監(jiān)測(cè)方法包括：濾膜法、多管發(fā)酵法以及酵底物法。

3.2 耐熱大腸菌群檢測(cè)

通過(guò)提升該菌群的培養(yǎng)溫度，從而有效區(qū)分處于自然溫度環(huán)境下的大腸菌群，以及糞便中的大腸菌群。耐熱大腸菌群即在44.5 ℃溫度下，仍然存活的大腸菌群。生活飲用水的具體檢測(cè)方法中，針對(duì)耐熱大腸菌群的檢測(cè)方法，主要包括兩種：濾膜法及多管發(fā)酵法。

3.3 大腸埃希氏菌檢測(cè)

該種菌體通常也被稱(chēng)為大腸桿菌，能夠在人體內(nèi)產(chǎn)生病原體生成病原性，極易導(dǎo)致嬰幼兒及牲畜腹瀉。因此，應(yīng)當(dāng)更進(jìn)一步檢測(cè)大腸桿菌及耐熱大腸菌群。

4 結(jié)語(yǔ)

水資源逐步匱乏的情況下，飲用水微生物檢測(cè)工作開(kāi)展尤為重要。快速測(cè)試板運(yùn)用于飲用水微生物檢測(cè)中更好克服了培養(yǎng)基批次不同、配制條件不同及操作人員不同等問(wèn)題，且整體檢測(cè)操作也較為簡(jiǎn)單，方便攜帶，方便取樣，同時(shí)，還省時(shí)省力，加快了飲用水微生物的檢測(cè)速率，提升了檢測(cè)準(zhǔn)確性。