多管發(fā)酵與濾膜法測定桶裝水糞大腸菌群比較

□ 高夢雅 廣東環(huán)境保護(hù)工程職業(yè)學(xué)院 張偉欣 廣東貝源檢測技術(shù)股份有限公司

水是生命的源泉，也是不可替代的資源，確保飲用水的衛(wèi)生與安全已成為當(dāng)今世界各國人民所關(guān)注的重大問題[1]。據(jù)WHO估計(jì)，每年至少有500萬人死于水傳播性疾病，世界各地每年有近一半以上的人口處于這些疾病的危險之中[2]。有調(diào)查表明，飲用水樣中，大腸菌群不合格率達(dá)到13.3%～25.0%[3]。

糞大腸菌群是指一群在44.5 ℃培養(yǎng)24～48 h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌[4]。該菌群來自人和溫血動物的糞便，作為糞便污染指標(biāo)評價食品的衛(wèi)生狀況，推斷食品中腸道致病菌污染的可能性[5]。根據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)包裝飲用水》[6]，糞大腸菌群作為瓶桶飲用水的重要指標(biāo)之一，它的檢測方法無疑成為各界關(guān)注的焦點(diǎn)。

糞大腸菌群是作為糞便污染指標(biāo)菌被提出來的，主要是以該菌群的檢出情況來表示飲用水中是否有糞便污染。世界衛(wèi)生組織《飲用水水質(zhì)準(zhǔn)則》指出，與飲用水有關(guān)的衛(wèi)生問題都來自微生物（細(xì)菌、病毒、原生動物或其他生物來源）的污染[7]。國內(nèi)外相關(guān)機(jī)構(gòu)對桶裝水的不定期監(jiān)測結(jié)果顯示，反映飲用水衛(wèi)生質(zhì)量的有關(guān)指標(biāo)中，細(xì)菌菌落總數(shù)和大腸菌群數(shù)超標(biāo)較為常見，已經(jīng)成為桶裝飲用水最嚴(yán)重的衛(wèi)生問題之一[1]。本文在參考HJ/T 347-2007原理的基礎(chǔ)上，對用多管發(fā)酵法與濾膜法檢測桶裝水中糞大腸菌群進(jìn)行了比較與分析。

1 多管發(fā)酵法測定糞大腸菌群

1.1 方法原理

多管發(fā)酵法是以最可能數(shù)（Most Probable Number，MPN）來表示試驗(yàn)結(jié)果的。實(shí)際上它是根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)理論，估計(jì)水體中的大腸桿菌密度和衛(wèi)生質(zhì)量的一種方法。

1.2 分析步驟

包含水樣制備、實(shí)驗(yàn)空白、初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵。

1.3 結(jié)果計(jì)算

根據(jù)發(fā)酵管出現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目，查MPN最可能表，得出每升水樣中的糞大腸菌群數(shù)。

2 濾膜法測定糞大腸菌群

2.1 方法原理

將水樣注入已滅菌的放有微孔性薄膜的濾膜濾器中，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌即被截留在膜上，然后把濾膜放在M-FC培養(yǎng)基上，44.5 ℃下培養(yǎng)，然后計(jì)數(shù)濾膜上生長的次特性菌落數(shù)，計(jì)算出每升的水樣中含有的糞大腸菌群數(shù)。

2.2 分析步驟

包含濾膜、濾器滅菌、加樣、實(shí)驗(yàn)空白、培養(yǎng)。

2.3 結(jié)果計(jì)算

如果培養(yǎng)基上的菌落呈藍(lán)色或藍(lán)綠色，則為糞大腸菌群?？捎?jì)算出1 L水樣中的糞大腸菌群數(shù)。

3 結(jié)果分析

3.1 結(jié)果計(jì)算與匯總

兩種方法測定桶裝水中糞大腸菌群的結(jié)果經(jīng)計(jì)算與查詢MPN表格[4-5]，得出以下結(jié)果。

（1）水樣開封1天、3天、5天，多管發(fā)酵法和濾膜法皆未測得糞大腸菌群。

（2）水樣開封7天、10天，多管發(fā)酵法和濾膜法測得糞大腸菌群分別為20個/L和3個/L。

（3）水樣開封15天，多管發(fā)酵法和濾膜法測得糞大腸菌群分別為20個/L和15個/L。

3.2 影響因素

（1）桶裝水中微生物污染的來源有水源、水處理系統(tǒng)、工廠衛(wèi)生管理、塑料桶和操作人員的個人衛(wèi)生[7]。

（2）多管發(fā)酵法需要經(jīng)過初發(fā)酵與復(fù)發(fā)酵兩個過程才能計(jì)算出每升水中糞大腸菌群的MPN值。步驟煩瑣且復(fù)雜，而且受發(fā)酵管容積的限制，對檢測水樣有一定的要求。

（3）濾膜法將細(xì)菌通過過濾裝置留在濾膜上，受濾膜孔徑的影響，對菌落計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)有一定的影響[8]。

4 結(jié)論

（1）多管發(fā)酵法對糞大腸菌群含量低的水樣檢出效果不理想，而濾膜法能檢測出糞大腸菌群含量低的水樣中的糞大腸菌群；

（2）濾膜法比多管發(fā)酵法更適合檢測桶裝水中糞大腸菌群，對于桶裝水而言濾膜法的檢測結(jié)果比多管發(fā)酵法更為可靠；

（3）桶裝水在開封7天后，水中的糞大腸菌群會增加，所以盡可能在開封一周內(nèi)飲用完畢。

[1]溫睿.牡市桶裝水微生物質(zhì)量調(diào)查分析[J].牡丹江大學(xué)學(xué)報,2011,20(8):120-122.

[2]楊克敵.環(huán)境衛(wèi)生學(xué)(第6版)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:130.

[3]王全新,馬紅朋,王海欣,等.禹州市桶裝飲用水直飲水銅綠假單胞菌污染狀況調(diào)查[J].醫(yī)藥論壇雜志,2016,37(2):78-79.

[4]國家環(huán)境保護(hù)總局.水和廢水監(jiān)測分析方法(第四版)(增補(bǔ)版)[M].北京:中國環(huán)境出版社人民衛(wèi)生出版社,2007:130.

[5]姚勇芳,朱美娟,譚才鄧.食品微生物檢驗(yàn)技術(shù)[M].北京:科學(xué)出版社,2013:93-99.

[6]國家標(biāo)準(zhǔn)委.GB 19298-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)包裝飲用水[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2014.

[7]吳清平,張永清,張菊梅.飲用水微生物安全風(fēng)險控制[J].食品研究與開發(fā),2009,30(11):188-191.

[8]戴巧容,劉育,李燕多.管發(fā)酵法與濾膜法測定水中糞大腸菌群的探討[J].科技創(chuàng)業(yè)家,2012(7):213.