以水楊苷和CCP為參照的蜂膠中楊樹膠檢測方法分析

□ 馬 巍 長春市食品藥品檢驗中心

蜂膠有潤膚生肌、消炎止痛的功效，可治療胃潰瘍、口腔潰瘍、燒燙傷、皮膚裂痛及防輻射等病癥[1]。在我國，楊樹和其雜交屬的芽苞分泌物是蜂膠的主要植物來源。楊樹膠與楊樹型蜂膠提取物在感官和理化指標上非常相似，而楊樹膠的價格卻只是蜂膠的1/3。在利益驅使下，蜂膠市場上以楊樹膠冒充蜂膠或在蜂膠中摻雜楊樹膠（楊樹芽提取物）的現象肆意橫行。目前，我國尚無嚴格鑒別蜂膠與楊樹膠的行業(yè)或產品標準，使得質量監(jiān)管部門及蜂產品企業(yè)無法通過有效監(jiān)管及控制來確保蜂膠的生產與流通。因此，目前我國蜂膠業(yè)最急迫的任務就是高效、準確鑒別蜂膠質量及真?zhèn)巍?/p>

1 方法原理

在采集并加工蜂膠時，蜂蜜中的腺體分泌物可能導致某些原始樹脂中的成分發(fā)生改變，致使蜂膠與植物源分泌的樹脂的成分有所不同[2]。有研究發(fā)現，蜂膠中含有β-葡萄糖苷酶活力，且蜜蜂在采集蜂膠、蜂巢內傳遞蜂膠時能夠水解酚苷[3]。酚苷的基本結構單元是更高級的水楊酸鹽類衍生物的主要降解產物之一的水楊苷[4]。水楊苷穩(wěn)定存在于楊樹膠中，因此可作為蜂膠與楊樹膠的鑒別指標。此外，CCP作為特征性成分僅存在于楊樹膠中而蜂膠中不含有。因此，蜂膠中楊樹膠的確定可通過是否含有水楊苷或CCP來進行判定。

2 分析條件的優(yōu)化

2.1 優(yōu)化提取條件

通過正交實驗來優(yōu)化楊樹芽中水楊苷提取條件，優(yōu)化程度包括乙醇濃度、超聲提取時間、料液比、提取次數等4個因素。正交實驗下超聲提取2g楊樹芽，合并、蒸干濾液，與甲醇混合至50mL溶液，過0.45 μm濾膜，進行HPLC分析。

2.2 樣本制備

因蜂膠中內含50%左右樹脂，也就是說，蜂膠中提取的樹脂部分就相當于楊樹膠。按照2.1的優(yōu)化條件，反復3次用75%乙醇超聲將2g楊樹芽、2g楊樹葉、2g蜂膠按照15∶1進行30min提取。揮去多余乙醇至溶液達50mL，過0.45 μm濾膜，進行HPLC分析。

2.3 色譜條件的可行性

2.3.1 考察線性范圍

以10mg水楊苷作對照，與甲醇混合成10mL溶液后，再用甲醇稀釋6個不同濃度的溶液作為對照，采取線性回歸，縱坐標為峰面積，橫坐標為對照品質量濃度（mg/mL）。

2.3.2 檢測限（LOD）和定量限（LOQ）

連續(xù)稀釋制備好的水楊苷標準溶液至所需濃度后，進行HPLC分析，記錄峰面積，計算檢測限（LOD）和定量限（LOQ），確定LOD為1.3 μg/mL，LOQ為5.4 μg/mL。LOD、LOQ值都不高，說明本方法可定性、定量檢測水楊苷。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗

在0、3、6、9、12、24h時，對同一楊樹芽樣品溶液進樣后，測得水楊苷色譜峰的相對保留時間的RSD為0.97%，確定樣品24h相對穩(wěn)定。在1、2、3d內，重復測定同一份楊樹芽樣品溶液，測得水楊苷色譜峰的相對保留時間的RSD為2.94%，說明樣品日間相對穩(wěn)定。

2.3.4 回收率試驗

選取9份楊樹芽樣品，精準測取容量，按高、中、低濃度水平3份為一組，加入水楊苷對照溶液，吹干，提取，測定，計算出回收率大于90%。

2.3.5 重復性試驗

以同一批楊樹芽為對象，選取其中5份，稱量后，通過優(yōu)化條件制備及測量樣品后，得出水楊苷的峰面積為 684.76±10.498，RSD=1.531；保 留 時 間（12.608±0.008）min，RSD=0.070%，說明本方法重復性好。

3 驗證結果

第一，不同樹種、不同組織部位的楊樹中的水楊苷含量存在差異；同一種楊樹芽中水楊苷含量顯著高于葉子中的含量。第二，楊樹膠樣本中均可檢測到水楊苷，但樣本件水楊苷含量差異較大。第三，不同地點、不同時間采集的蜂膠樣本中均未檢測到水楊苷。

4 結果判定

本檢測的水楊苷、CCP是楊樹膠中含有而蜂膠中不含有的物質。所以，若待測樣品未測到水楊苷、CCP色譜峰，該樣品則不為楊樹膠樣品。按照我國情況，定性依據為水楊苷定量限，若待測樣品中水楊苷檢測濃度在0.25mg/g以下，則表明未檢出楊樹膠。若待測樣品中未檢測到水楊苷而檢測到CCP，經質譜法驗證后確定為CCP的則為楊樹膠樣品。