野生美味牛肝菌多糖提取條件優化

余麗 晏愛芬 陳瑤

摘 要：試驗按L9（34）正交設計，以多糖含量作為多糖提取率指標，對野生美味牛肝菌子實體多糖提取條件（料液比、提取溫度、提取時間、乙醇沉淀濃度）進行優化。結果表明，4個因素對野生美味牛肝菌多糖提取率的影響表現為料液比>提取溫度大于乙醇沉淀濃度>提取時間，其中料液比和提取溫度的影響分別達到極顯著和顯著水平，確定野生美味牛肝菌多糖提取的最佳工藝為料液比1∶25、提取溫度90 ℃、提取時間2 h、乙醇濃度95%。

關鍵詞：美味牛肝菌；野生；多糖；正交試驗

中圖分類號：S643.3 文獻標識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2018.12.005

Abstract： The experiment was conducted to optimize the extraction conditions of polysaccharide from Boletus edulis with the orthogonal design L9（34）， 4 conditions were set including material to solvent ratio， extraction temperature， extraction time， and ethanol concentration， the polysaccharide content was used as the index of polysaccharide extraction efficiency. The results showed that the effects of 4 conditions on the polysaccharide extraction efficiency of B. edulis were as follows： material to solvent ratio>extraction temperature>ethanol concentration>extraction time， in which the effects of material to solvent ratio and extraction temperature were significant. The optimum extraction process which screened by the orthogonal experiment was as follows： material to solvent ratio （1∶25）， extraction temperature （90 ℃）， extraction time （2 h）， and ethanol concentration （95%）.

Key words： Boletus edulis； wild； polysaccharides； orthogonal test

美味牛肝菌（Boletus edulis Ball. ex Fr）在1821年由法國科學家皮埃爾發現，并由瑞典科學家Elias Magnus Fries命名[1]，因其肉厚而細軟、味道鮮美，富含蛋白質、多糖、纖維素、維生素、礦物質、氨基酸等物質，倍受消費者喜愛，同時是我國重要的出口野生食用菌[2-4]。據報道，美味牛肝菌多糖成分在免疫缺陷性疾病、自身免疫疾病和腫瘤等疾病的臨床治療上具有免疫調節活性作用，因而被稱為“生物效應調節劑”[5-8]。這些活性多糖理化性質、提取工藝已成為多糖研究的前沿領域，取得了長足的發展，但有關美味牛肝菌多糖提取條件優化的研究報道較少。

本研究對野生美味牛肝菌多糖含量提取條件進行優化，旨在為多糖高效提取和利用提供一定的理論依據。

1 材料和方法

1.1 材 料

野生美味牛肝菌為市售，并經保山學院微生物學實驗室鑒定，子實體洗凈、曬干、粉碎后備用；人工美味牛肝菌組織由保山學院微生物學實驗室培養，將菌絲培養分化形成的組織曬干、粉碎后備用。

1.2 方 法

1.2.1 試驗設計 干燥的野生美味牛肝菌子實體粉末采用熱水提取—乙醇沉淀的方法進行多糖提取，以料液比、提取溫度、提取時間、乙醇沉淀濃度為試驗因素[5-8]，按L9（34）正交表進行正交試驗設計，以野生美味牛肝菌子實體的多糖含量為指標進行多糖提取最佳條件篩選，所用因素和水平見表1。

1.2.2 多糖含量的測定 利用苯酚—硫酸法，分別制備濃度為0， 0.04， 0.08， 0.12， 0.16， 0.20 mg·mL-1葡萄糖標準溶液，按“標準溶液1.6 mL+蒸餾水2.4 mL+苯酚2 mL+濃硫酸10 mL”配比混勻后，用分光光度計在490 nm處測定吸光值，制作標準曲線；以正交試驗各處理提取出的多糖提取液1.6 mL替代葡萄糖標準溶液，其他成分不變，測定490 nm吸光值，根據標準曲線計算多糖含量，作為衡量野生美味牛肝菌多糖提取率的指標。

1.3 數據處理與分析

通過SPSS19.0軟件對試驗結果進行正交統計分析[9-12]。

2 結果與分析

2.1 葡萄糖標準曲線

葡萄糖標準曲線如圖1所示，線性回歸方程為y = 3.357 1x-0.022，R2= 0.995 5，符合試驗要求，可通過線性回歸方程轉換得到1 g美味牛肝菌中的多糖含量。多糖含量m=CV，其中C為提取液中多糖質量濃度，V為提取液的總體積，則多糖含量計算公式為：m=（y+0.022）/3.357 1×V。

2.2 4種因素對野生美味牛肝菌多糖提取率的影響

根據表2中T值和表3中的F值可知，4個因素對野生美味牛肝菌多糖提取率的影響順序表現為：料液比（A）>提取溫度（B）>乙醇濃度（D）>提取時間（C），其中因素A和B對多糖提取率的影響分別達到極顯著（P<0.01）和顯著水平（P<0.05）；根據表1中的極差R可知，因素A、B、C、D分別以A2、B3、C1、D3水平多糖提取率最高，說明正交試驗篩選4個因素的最佳組合為A2B3C1D3，即料液比1∶25、提取溫度90 ℃、提取時間2 h、乙醇濃度95%；由表3中A+B+C+D處理的F值可知，4個因素對野生美味牛肝菌多糖提取率的總體效益顯著（P<0.05），其中以A3B3C1D2，即料液比1∶30、提取溫度90 ℃、提取時間2 h，乙醇濃度90%時，提取率最高，這與正交試驗篩選的最佳組合A2B3C1D3不一致，故其最佳提取工藝有待于進一步進行驗證。

3 結論與討論

本試驗中，4個因素對野生美味牛肝菌多糖提取率的影響由高至低依次為料液比（A）、提取溫度（B）、乙醇濃度（D）、提取時間（C），其中料液比和提取溫度的影響達顯著水平；根據正交試驗結果篩選4個因素的優水平為A2B3C1D3，即料液比1∶25、提取溫度90 ℃、提取時間2 h、乙醇濃度95%，其中料液濃縮時間的延長會破壞多糖結構，致使多糖損失率增加，故其優水平為1∶25，而提取溫度和乙醇濃度分別以高溫和高乙醇濃度效果較好，可加快分子動力，利于細胞膜解離多糖滲出。但因優水平與正交試驗9個處理中效果最佳的組合A3B3C1D2即料液比1∶30、提取溫度90 ℃、提取時間2 h、乙醇濃度90%不一致，故野生美味牛肝菌多糖提取效果的驗證試驗有待于進一步開展。

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