雞傳染性支氣管炎活疫苗生產工藝研究

劉濤 柳珊 何平有 鄒立宏 朱秀同 王帥/瑞普（保定）生物藥業有限公司

劉子偉 翟含流/保定市蓮池區動物衛生監督所

吳浩/保定市農業局

雞傳染性支氣管炎( Infectious bronchitis，IB)是由冠狀病毒科冠狀病毒屬的傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病，給養禽業帶來巨大的經濟損失，疫苗免疫是防控該病的有效手段。本文對可能影響雞傳染性支氣管炎活疫苗毒液效價的幾個主要生產工藝參數進行優化試驗，以期提高批次間毒液效價穩定性，提升生產效率。

一、材料

SPF雞胚、0.01M PBS、雞傳染性支氣管炎病毒H120株種毒（IB種毒）均由瑞普（保定）生物藥業有限公司生產部提供。

二、方法

1.接種日齡的優化。將IB種毒用PBS稀釋100倍，按0.1 ml/胚分別接種到10日齡、11日齡、12日齡SPF雞胚，棄去24 h內死亡雞胚，每日照蛋2次，及時冷藏死亡雞胚，36 h全部收獲；分別測定不同日齡接種雞胚繁殖的毒液效價及收獲量。

2.種毒稀釋倍數、收獲時間的優化。將IB種毒用PBS分別稀釋10、100、1 000倍，按0.1 ml/胚接種到11日齡雞胚，棄去24 h內死亡雞胚，每日照蛋2次，及時冷藏死亡雞胚，每個稀釋倍數分30 h、36 h、42 h、48 h進行收獲；分別測定不同稀釋倍數、不同收獲時間繁殖的毒液效價及收獲量。

3.冷蛋時間的優化。將IB種毒用PBS稀釋1 000倍，按0.1 ml/胚接種到11日齡SPF雞胚上，每日照蛋2次，棄去24 h內死亡雞胚，及時冷藏死亡雞胚，42 h將全部雞胚放置4℃進行冷蛋，冷蛋時間分4 h、12 h、24 h，收獲毒液，測定效價及收獲量。

三、結果與分析

1.接種日齡的優化。結果顯示接種10、11日齡雞胚收獲的毒液量不同，但毒液效價差異不大，11日齡雞胚接種后毒液收獲量較10日齡的高0.6 ml/胚；12日齡雞胚接種收獲的毒液效價低，且尿酸鹽較多，影響后續保存效果；因此優選11日齡作為接種日齡。具體見表1。

表1 接種日齡試驗結果

2.種毒稀釋倍數、收獲時間的優化。結果顯示隨著稀釋倍數增大，毒液效價達到106.5EID50/0.1 ml以上所需的收獲時間越長，10、100和1 000倍稀釋，效價達到峰值的時間分別為36、42和42 h；但1 000倍稀釋42 h收獲效價為107.1EID50/0.1 ml，明顯高于其他稀釋倍數；因此優選1 000倍稀釋，42 h收獲。具體見表2。

表2 種毒稀釋倍數、收獲時間試驗結果

3.冷蛋時間的優化。冷蛋時間4 h，收獲毒液有溶血現象，不利于后續疫苗處理；12 h冷蛋充分，對收獲量、效價差異無影響；24 h雖冷蛋充分，但效價降低明顯，因此冷蛋時間優選12 h。具體見表3。

表3 冷蛋時間試驗結果

四、討論

針對IB毒液制備工藝各個參數進行優化，接種日齡由10日改進為11日；稀釋倍數由10～100倍改進為1 000倍；收獲時間由30～36 h改進為42 h；冷蛋時間由24 h縮短至12 h；使IB毒液收獲量由9.8 ml/胚提高至11.1 ml/胚，效價由106.5EID50/0.1 ml提高至107.1EID50/0.1 ml。種毒用量越小，較少的繼代代次即可滿足生產需要，能更好保障生產毒液免疫原性。改進的工藝不僅提高了毒液效價，還提高收獲量，效果顯著。

（略）