氧化苦參堿磷脂復(fù)合物對(duì)四氯化碳致小鼠慢性腎損傷的保護(hù)作用

穆慶迪 陳新梅 杜 月 岳志敏 徐溢明

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355；*山東大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250012)

氧化苦參堿(Oxymatrine，OM)是從豆科植物苦參、苦豆子中提取得到的一種生物堿。苦參作為藥材使用始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，有清熱燥濕，殺蟲(chóng)，利尿之功，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)表明其有抗炎、抗病毒、抗肝纖維化和免疫調(diào)節(jié)、抗癌、抗腫瘤、升高白細(xì)胞、抗心率失常等多種藥理作用，且不良反應(yīng)較少[1,2]。磷脂復(fù)合物 (Phytosome)是藥物和磷脂分子通過(guò)電荷遷移作用而形成的較為穩(wěn)定的化合物或絡(luò)合物。中藥活性成分與磷脂形成磷脂復(fù)合物后，可使藥物親脂性顯著增強(qiáng)，作用時(shí)間延長(zhǎng)，不良反應(yīng)降低[3]。氧化苦參堿，制成磷脂復(fù)合物后會(huì)大大提高生物利用度，增強(qiáng)療效。目前關(guān)于氧化苦參堿在治療腎損傷方面的研究較少，但是已有研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿在抑制腎纖維化方面可產(chǎn)生與苯那普利同等效果[4]，并且前期本課題組的研究同樣發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿對(duì)大鼠CCl4腎損傷具有一定的保護(hù)作用[5]，本實(shí)驗(yàn)將氧化苦參堿制成磷脂復(fù)合物，考察不同劑量的氧化苦參堿磷脂復(fù)合物對(duì)腎損傷的保護(hù)作用。

1 材 料

1.1 試劑與儀器

氧化苦參堿(陜西昂盛生物醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào): US150415)；四氯化碳(天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào)20160411)；大豆磷脂(上海太偉藥業(yè)有限公司，批號(hào)20150701)；橄欖油(上海嘉里食品工業(yè)有限公司，批號(hào)20150624)；氧化苦參堿磷脂復(fù)合物(本實(shí)驗(yàn)室自制)；JY1002 分析天平 ( 上海精密科學(xué)儀器有限公司)；B320A型醫(yī)用低速離心機(jī)(安徽縣白洋離心機(jī)場(chǎng))；5821型AU5800全自動(dòng)生化分析儀(BECKMAN COULTER) 。

1.2 動(dòng)物

雄性昆明小鼠，體重18～22 g，由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供(動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(魯)2014-0007)。

2 方 法

2.1 動(dòng)物分組

昆明小鼠72只，實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組、CCl4模型組、氧化苦參堿組(78 mg/kg)、氧化苦參堿磷脂復(fù)合物低劑量組(39 mg/kg)、氧化苦參堿磷脂復(fù)合物中劑量組(78 mg/kg)、氧化苦參堿磷脂復(fù)合物高劑量組(156 mg/kg)，每組12只。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每日給予普通飼料及正常飲水。

2.2 模型制備及給藥

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，除空白對(duì)照組外，其余各組均灌0.5%CCl4橄欖油溶液10 mL/kg，每周兩次，空白對(duì)照組給等量橄欖油。空白對(duì)照組和CCl4模型組給生理鹽水，其余各組按照劑量給氧化苦參堿或磷脂復(fù)合物，給藥量為0.1 mL/10 g，每日兩次，連續(xù)8周。

2.3 體重和攝食量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)期間，每天記錄各組小鼠的攝食量，每周稱量一次小鼠體重并記錄。

2.4 血液中尿素氮和肌酐含量測(cè)定

末次給藥后，小鼠禁食12 h，正常飲水。摘眼球取血，離心，3 000 r/min×10 min，吸取上層血清，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)的含量。

2.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)均采用(x±s)表示，兩組間均數(shù)比較，采用t檢驗(yàn)，以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 結(jié) 果

3.1 一般情況

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，空白組小鼠體態(tài)正常，皮毛光滑濃密，動(dòng)作敏捷。模型組小鼠精神萎靡，行動(dòng)緩慢，皮毛蓬松。其余各組小鼠精神、皮毛狀況好于模型組。

3.2 體重與攝食量變化情況

飼養(yǎng)過(guò)程中，各組小鼠體重整體保持均勻增長(zhǎng)趨勢(shì)，空白組小鼠體重一直高于其他各組，并且與模型組之間存在顯著性差異，其他各組體重差異不明顯。實(shí)驗(yàn)初期，各組小鼠攝食量無(wú)顯著差異；實(shí)驗(yàn)后期，低劑量組和高劑量組小鼠的攝食量明顯高于其他組，空白組與OM組、中劑量組攝食量相近。根據(jù)實(shí)驗(yàn)記錄，每次造模后的第二天，各組小鼠攝食量會(huì)有明顯下降，CCl4造模會(huì)對(duì)小鼠攝食量產(chǎn)生影響。

3.3 血液中尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)含量測(cè)定

結(jié)果如表1所示，與空白組相比，模型組的BUN和SCr水平顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。氧化苦參堿組的BUN和SCr水平與CCl4模型組之間均存在顯著性差異(P<0.01)，氧化苦參堿磷脂復(fù)合物低、中、高劑量組的BUN和SCr水平與CCl4模型組相比均下降且差異性顯著。氧化苦參堿組與CCl4模型組間的水平差異不如中劑量組與模型組間顯著，且兩組間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 血液中尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)含量測(cè)定Table 1 Determination of urea nitrogen (BUN) and creatinine (SCr) in blood

注：與空白組相比，*表示P<0.05; 與模型組相比，#表示P<0.05,##表示P<0.01

4 討 論

CCl4是一種典型的肝毒物質(zhì)，有研究表明CCl4腎臟的損傷主要表現(xiàn)在腎組織蛋白質(zhì)的氧化損傷[6]。前期本課題組研究發(fā)現(xiàn)連續(xù)8周灌胃CCl4可以引起大鼠腎損傷[5]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，連續(xù)8周給予低濃度的CCl4可以導(dǎo)致小鼠血清中BUN及SCr含量明顯上升，對(duì)小鼠腎臟造成一定程度損傷，表明CCl4制備小鼠腎損傷模型是成功的。氧化苦參堿各組與CCl4模型組相比，BUN和SCr水平均有明顯降低，與前期本課題組的氧化苦參堿實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，均說(shuō)明了氧化苦參堿對(duì)腎損傷的保護(hù)作用是確實(shí)顯著的。

本實(shí)驗(yàn)將氧化苦參堿磷脂復(fù)合物的劑量細(xì)化，分為低、中、高三個(gè)劑量組。本次實(shí)驗(yàn)中，磷脂復(fù)合物低劑量組(39 mg/kg)已經(jīng)達(dá)到與氧化苦參堿組(78 mg/kg)同等效果，并且低劑量的氧化苦參堿磷脂復(fù)合物在三個(gè)磷脂復(fù)合物組中降低作用最顯著，初步推測(cè)低劑量的氧化苦參堿在制成磷脂復(fù)合物后可以達(dá)到與單純中劑量氧化苦參堿相同的療效。將氧化苦參堿制成磷脂復(fù)合物后，提高小鼠對(duì)氧化苦參堿的吸收，從而提高了對(duì)CCl4致慢性腎損傷腎臟的保護(hù)作用。磷脂復(fù)合物在藥物制劑方面應(yīng)用逐漸增多[7]，具有廣闊的前景。

[1] 陳新梅，郭輝，劉彩云 等.氧化苦參堿研究概況[A];世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)中醫(yī)藥抗病毒研究專業(yè)委員會(huì)論文集[C]；山東煙臺(tái)，2015：157～159.

[2] 段章好，陳新梅. 抗乙肝病毒中藥活性成分的研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，18(11)：115～118.

[3] 陳晨，金玉.氧化苦參堿對(duì)阿奇霉素大鼠慢性腎纖維化組織中核因子-κB 表達(dá)的影響[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27( 3)：345～348.

[4] 鄭林，李毅，鄧盛齊 等.磷脂復(fù)合物對(duì)中藥制劑口服吸收的影響[J]，中國(guó)抗生素雜志，2015，40(6)：468～473.

[5] 崔英賢，陳新梅，郭輝 等.氧化苦參堿對(duì)四氯化致大鼠慢性腎損傷保護(hù)作用的初步研究[J].化工時(shí)刊，2016，30(3)：21～23.

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[7] 郭輝，陳新梅.中藥活性成分磷脂復(fù)合物研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2016,18(8):161～163.