脲對Flt3配體包涵體蛋白質(zhì)體外復(fù)性與同時純化的作用研究

余秀娟，張如月，盧金銘

(1.河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北 張家口 075000；2.華北電力大學(xué)科技學(xué)院，河北 保定 071000)

脲對Flt3配體包涵體蛋白質(zhì)體外復(fù)性與同時純化的作用研究

余秀娟1，張如月1，盧金銘2

(1.河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北 張家口 075000；2.華北電力大學(xué)科技學(xué)院，河北 保定 071000)

目的研究小分子脲對包涵體蛋白質(zhì)體外復(fù)性與同時純化的作用。方法考察在高效疏水相互作用色譜(HPHIC)流動相中添加脲時，不同濃度的小分子脲對包涵體蛋白重組人酪氨酸激酶配體(recombined human Flt3 ligand,rhFL)復(fù)性效率的影響，并采用熒光光譜技術(shù)，進一步研究目標(biāo)蛋白Flt3復(fù)性前后復(fù)性效果變化與熒光強度變化的規(guī)律。結(jié)果當(dāng)脲的添加濃度為3 mol·L-1時，rhFL的質(zhì)量回收率達到33.1%，更易于恢復(fù)其天然構(gòu)象及生物活性。結(jié)論添加適當(dāng)濃度的脲可促進rhFL的復(fù)性與同時純化，通過熒光光譜技術(shù)可以初步推測包涵體蛋白在復(fù)性過程中生物活性的變化，為rhFL蛋白藥物的研發(fā)提供參考。

高效疏水相互作用色譜法；脲；Flt3配體；包涵體蛋白質(zhì)；體外復(fù)性

Flt3配體(Flt3 ligand，F(xiàn)L)是一類在骨髓基質(zhì)細胞和造血細胞中表達，刺激早期造血因子生長的具有很強協(xié)同作用的造血生長因子。人Flt3配體分子主要分布在初級淋巴細胞和次級淋巴細胞中[1-2]，由4個半胱氨酸殘基形成2個分子內(nèi)的二硫鍵，使整個分子折疊形成四螺旋的結(jié)構(gòu)域，每一個螺旋都由β-折疊相連接。經(jīng)探索，人們利用重組DNA技術(shù)在大腸桿菌(E.coil)中成功地表達了rhFL，發(fā)酵所得的產(chǎn)物主要以不溶的包涵體形式存在，通過對其氨基酸進行分析，結(jié)果顯示rhFL具有自身的熒光性質(zhì)，可作為實驗的模型蛋白進行研究。……