幾種云南核桃不同部位總黃酮含量的測定

劉基+趙寧+王小雙+趙聲蘭

摘要：本研究以蘆丁為對照品，采用比色法測定幾種云南核桃不同部位的總黃酮含量，比較其葉、樹枝皮、青皮、殼、內隔膜及內種皮總黃酮含量的差異。結果表明，不同云南核桃品種的不同部位總黃酮含量不同，不同云南核桃品種的同一部位總黃酮含量也有差異。娘青核桃內種皮、內隔膜、葉等部位的總黃酮含量高于其它品種，總黃酮含量內種皮達23.17%，葉中達14.80%，內隔膜中達15.17%，青皮中達9.33%；大泡核桃的總黃酮含量為內種皮中14.78%，葉中12.01%，內隔膜中10.27%，其青皮、樹枝皮總黃酮含量略高于其他核桃品種，分別為15.79%、5.56%。綜合來看，核桃不同部位的總黃酮分布為內種皮>葉>青皮>內隔膜>樹枝皮>殼。

關鍵詞：總黃酮；核桃；不同部位；品種

中圖分類號：S664.1文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2017）12-0135-04

Abstract With the rutin as reference substance， the total flavonoid contents in leaves， tree bark， green husk，shell， diaphragm and endotesta of several species of walnut varieties were determined with colorimetric method.The results showed that the total flavonoid contents in different parts of different Yunnan walnut cultivars were different， and also different in the same part.The total flaconoid contents in endotesta， diaphragm， leaves and other parts of Niangqing walnut were higher compared with the other varieties， which were 23.17% in endotesta， 14.80% in leaves， 15.17% in diaphragm and 9.33% in green husk，respectively.The total flavonoid contents of Dapao walnut were 14.78% in endotesta， 12.01% in leaves，10.27% in diaphragm， and those in green husk and bark were 15.79% and 5.56%respectively， which were a little higher compared to the other varieties. In general， the distribution of total flavonoid contents in different parts of walnut were in the order of endotesta>leaves>green husk> diaphragm>tree bark>shell.

Keywords Total flavonoid content； Walnut ；Different parts；Different varieties

核桃又名胡桃、羌桃，為胡桃科胡桃屬植物，與扁桃、腰果、榛子并列為世界著名的四大干果。我國核桃種植面積和產量均居世界第一，云南又居全國之首。云南省2013年核桃產量超過70萬噸，占當年全國核桃總產量30.327%[1]，2015年核桃種植面積超過282萬公頃，年產量超過85萬噸[2]。我國核桃開發利用以核仁加工為主，大量的核桃青皮、殼、內隔膜和內種皮未得到充分利用，更鮮有對核桃葉、樹枝皮的加工和利用。前人研究表明，部分植物黃酮類成分具有抗氧化[3]、調血脂、擴張冠脈、止血、鎮咳、祛痰、降低血管脆性等藥理作用[4，5]。核桃青皮黃酮提取物對腳氣真菌抑制率59.64%[6]；核桃殼含黃酮等多種活性物質，具有抗氧化、抗菌、降脂、抗腫瘤等作用[7]；核桃內隔膜總黃酮對DPPH自由基、羥基自由基、超氧陰離子自由基等具有較好清除能力和鐵還原能力[8]；核桃內種皮總黃酮提取物具有較強的抗氧化和抑菌活性[9]；核桃葉提取物中的黃酮類成分具有較好的抗氧化活性[10]，國外有學者認為核桃葉黃酮類提取物能誘導細胞周期阻滯，可能包含可作為化療藥物有效成分[11]。目前，云南種植的核桃品種主要有娘青[12-14]、圓菠蘿[12]、大泡[12]、草果[12]、雞蛋殼[12]、滑皮[12]、桐子果[12]、云新303[12]、永泡1號[12]等。本研究測定了幾種云南核桃品種的葉、樹枝皮、青皮、殼、內隔膜及內種皮的總黃酮含量，以期為核桃資源的高效開發利用奠定科學基礎和提供新思路。

1 材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

試驗所用10年樹齡娘青核桃、圓菠蘿核桃、大泡核桃、草果核桃、雞蛋殼核桃由西南林業大學趙寧副教授提供并鑒定。選取上述5種核桃的葉、樹枝皮、青皮、殼、內隔膜及內種皮，切碎，密封，-20℃保存，備用。

蘆丁（標準品）購自上海同田生物技術股份有限公司；亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁、乙醇為國產分析純，購自天津市風船化學試劑科技有限公司；添加試劑用水為去離子水（自備）。

1.2 試驗儀器

UV-1800PC紫外可見分光光度計，翱藝儀器（上海）有限公司產品；SK7210HP超聲波清洗器，上海科導超聲儀器有限公司產品；CP214電子天平，上海奧豪斯儀器有限公司產品；電熱鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司產品。endprint

1.3 試驗方法

1.3.1 供試樣品溶液的制備 精確稱取適量核桃樣品，按料液比1∶20、溫度51℃、60%乙醇超聲提取31 min，冷卻，定容，過濾。

1.3.2 水分含量測定 精確稱取適量核桃樣品，按文獻[15]方法測定，用于計算樣品的干基質量。

1.3.3 標準曲線繪制 精確稱取10 mg蘆丁標準品，60%乙醇溶解定容至50 mL，分別精確移取1.0、2.0、2.5、3.0、4.0 mL上述溶液到10 mL容量瓶中，加5% NaNO3 0.3 mL，搖勻，反應6 min，再加10% Al（NO3）3 0.3 mL， 搖勻，反應6 min，最后加4% NaOH 4 mL，60%乙醇定容，搖勻，顯色15 min，510 nm處測定吸光度值，以蘆丁對照品溶液濃度（C，mg/mL）為橫坐標，吸光度（A）值為縱坐標作圖，得標準曲線。

1.3.4 總黃酮含量測定 取1.3.1供試品溶液1 mL于10 mL容量瓶，加5% NaNO3 0.3 mL，搖勻，反應6 min，再加10% Al（NO3）3 0.3 mL，搖勻，反應6 min，最后加4% NaOH 4 mL，60%乙醇定容，搖勻，顯色15 min，510 nm處測定吸光度值。根據標準曲線回歸方程計算樣品提取液的總黃酮濃度， 按下式計算樣品的總黃酮含量（以干基結果表示）。

X（%）=（C×V/M）×100

式中，X 為核桃樣品總黃酮含量，C為核桃樣品總黃酮提取液濃度（mg/mL），V為核桃樣品總黃酮提取液的體積（mL），M為核桃樣品的干重（mg）。

1.4 方法學考察

1.4.1 穩定性試驗 取同批次1.3.1制備的核桃內種皮提取液，按1.3.3測定方法，顯色15 min后分別放置0、15、30、45、60、75、90 min，于510 nm處測定吸光度值，并計算RSD。

1.4.2 重現性試驗 按1.3.1方法，分別制備同一核桃內種皮提取液5份，按1.3.3方法測定供試品的總黃酮含量，并計算RSD。

1.4.3 精密度試驗 取1.3.1制備的同一核桃內種皮提取液，按1.3.3方法平行測定7次，計算RSD。

1.4.4 加樣回收試驗 分別精密稱取已知總黃酮含量的核桃內種皮6份，分別加入蘆丁對照品，按1.3.1制備供試品，按1.3.3方法測定，計算加標回收率和RSD。

2 結果與分析

2.1 線性關系考察

按1.3.3方法測得蘆丁標準曲線，吸光度（A）與蘆丁濃度（C， mg/mL）回歸方程為A=12.035C+0.011（R2=0.9992），表明蘆丁濃度0.02～0.08 mg/mL時與吸光度呈良好線性關系。

2.2 方法學考察

2.2.1 穩定性試驗 按 1.4.1的方法測定，核桃總黃酮的穩定性RSD為2.17%（n=7）。

2.2.2 重現性試驗 按 1.4.2的方法測定，核桃總黃酮的重現性RSD為2.47%（n=5）。

2.2.3 精密度試驗 按 1.4.3的方法測定，核桃總黃酮的精密度RSD為0.28%（n=7）。

2.2.4 加樣回收試驗 按 1.4.4的方法測定，核桃總黃酮的加標回收率為96.93%～102.20%，RSD為1.98%（n=6），見表1。

2.3 不同核桃品種不同部位總黃酮含量的測定

不同核桃品種和同一核桃品種不同部位總黃酮含量均不相同，不同核桃品種同一部位總黃酮含量差異較大。各部位總黃酮含量從高到低順序為，核桃內種皮：娘青>草果>圓菠蘿>大泡>雞蛋殼；核桃內隔膜：娘青>大泡>圓菠蘿>草果>雞蛋殼；核桃葉：娘青>大泡>圓菠蘿；核桃樹枝皮：大泡>圓菠蘿>娘青；核桃青皮：大泡>娘青>圓菠蘿>草果；核桃殼：娘青>大泡>圓菠蘿>草果>雞蛋殼（表2）。娘青核桃除樹枝皮與青皮，各組織總黃酮含量均較高，內種皮中總黃酮含量為23.17%，內隔膜中為15.17%，葉中為14.80%，核桃殼中為2.04%（表2）。綜合來看，不同部位總黃酮含量為：內種皮>葉>青皮>內隔膜>樹枝皮>殼。

3 討論與結論

本研究發現核桃各部位的總黃酮含量分布為內種皮>葉>青皮>內隔膜>樹枝皮>殼。任曉蕾等[16]以乙醇為提取液，蘆丁為對照品，采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法測得核桃不同部位黃酮含量的順序為葉>皮>莖；馮榮等[17]用60%乙醇超聲提取核桃不同部位的總黃酮，以木犀草苷為對照品，比色測定之后認為核桃不同部位中總黃酮含量為內種皮>內隔膜>殼，與本研究的測定結果一致。本研究發現云南娘青核桃各部位的總黃酮含量較高，內種皮總黃酮達23.17%，葉中達14.80%，內隔膜中達15.17%，圓菠蘿、大泡、雞蛋殼等核桃的內種皮、葉、內隔膜及樹枝皮中也含有豐富的總黃酮。熊新武等[13，14]認為娘青核桃出仁率、含油率都較高，適應性強，耐貧瘠士壤，豐產性好，產量高于漾濞大泡核桃，在相同土地條件下種植，產量是漾濞大泡核桃的12倍。娘青核桃作為一個優良品種不僅產量高，且各部位的總黃酮含量也高，具有較高的開發前景。本研究可為核桃產業可持續發展及核桃資源進一步綜合開發利用奠定基礎和提供新思路。

參 考 文 獻：

[1] 張有林，原雙進，王小紀，等. 基于中國核桃發展戰略的核桃加工業的分析與思考[J]. 農業工程學報，2015，31（21）：1-8.

[2] 楊文營，謝萍.云南省核桃產業發展制約因素和對策探討[J].當代經濟，2016 （2）：78-79.

[3] Pahari B，Chakraborty S，Chaudhuri S， et al. Binding and antioxidant properties of therapeutically important plant flavonoids in biomembranes： insights from spectroscopic and quantum chemical studies[J].Chemistry and Physics of Lipids，2012，165（4）：488-496.endprint