蒙藥阿那日-4散對實驗性胃潰瘍大鼠血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量的影響△

敖 奇 王玉山 美 青

(1.內蒙古國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特 010020； 2.內蒙古醫科大學2014屆碩士研究生，內蒙古 呼和浩特 010020； 3.內蒙古醫科大學2012屆碩士研究生，內蒙古 呼和浩特 010020)

蒙藥阿那日-4散對實驗性胃潰瘍大鼠血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量的影響△

敖 奇1王玉山2美 青3

(1.內蒙古國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特 010020； 2.內蒙古醫科大學2014屆碩士研究生，內蒙古 呼和浩特 010020； 3.內蒙古醫科大學2012屆碩士研究生，內蒙古 呼和浩特 010020)

目的：觀察蒙藥阿那日-4散對實驗性胃潰瘍大鼠血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量的影響，探討其治療胃潰瘍的可能作用和機制。方法利用10%醋酸制備實驗性胃潰瘍大鼠模型，予蒙藥阿那日-4散及枸櫞酸鉍鉀治療15d后觀察胃黏膜大體標本，計算潰瘍面積，測量血清超氧化歧化酶活力及一氧化氮、丙二醛含量。結果胃黏膜大體標本觀察發現，治療組和對照組均潰瘍愈合良好；與模型組相比，高劑量的蒙藥阿那日-4散可明顯促進潰瘍愈合，減少潰瘍面積(P<0.01)，提高血清超氧化歧化酶活力(P<0.05)，降低血清一氧化氮和丙二醛含量(P<0.01)。結論蒙藥阿那日-4散對大鼠實驗性潰瘍具有良好的治療作用，其治療作用和機制可能與清除氧自由基，提高血清超氧化歧化酶活力，降血清一氧化氮，丙二醛含量有關。

蒙藥阿那日-4散；胃潰瘍；超氧化歧化酶；一氧化氮；丙二醛

蒙藥阿那日-4散是收載于《內蒙古藥材標準》和《中國醫學百科全書(蒙醫學)》，是由石榴、肉桂皮、白豆蔻、蓽茇4味藥組成，蒙藥阿那日-4散為基礎的復方有阿那日-5、通拉嘎-5、阿那日-8等。在蒙醫治療胃潰瘍、慢性胃炎等基礎方和經驗方，臨床上有確切療效。氧自由基是導致胃黏膜損傷的重要致病因子，超氧化歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)，一氧化氮(Nitric Oxide,No )和丙二醛(Maleic Dialdyde，MDA)是反應體內氧自由基代謝的重要指標。

本研究通過觀察蒙藥阿那日-4散不同劑量對實驗性胃潰瘍大鼠血清SOD活力及NO、MDA含量的影響，探討其治療胃潰瘍的可能作用和機制，為進一步蒙藥開發和臨床應用提供實驗依據。

1 材料與儀器

1.1 動物：健wistar大鼠48只，雌雄各半，體重180 ～ 240g，是由內蒙古醫科大學動物實驗中心提供。

1.2 藥物制備：蒙藥阿那日-4散由內蒙古國際蒙醫醫院(國家蒙藥制劑中心)提供。上述藥物按一定比例461mg/Kg、327mg/Kg、245mg/Kg成為高、中、低3個劑量，高壓滅菌后放入4℃冰箱保存備用。枸櫞酸鉍鉀顆粒 按17mg/Kg濃度配枸櫞酸鉍鉀混懸液，4℃冰箱保存備用。

1.3 試劑： 枸櫞酸鉍鉀，用時加蒸餾水配制成混懸液；超氧化歧化酶(SOD) 檢測試劑盒；一氧化氮(NO)；檢測試劑盒及丙二醛(MDA)檢測試劑盒，均由南京建成生物工程研究提供，嚴格按照說明書操作；以及戊巴比妥鈉、醋酸、碘酒、究竟等。

2 方法

2.1 分組：將48只大鼠隨機分為空白組、模型組、對照組，蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量組，每組8只。空白組自由飲食進水，15d后處死取材；除空白組外，其余各組大鼠均于適應性飼養3d后行造模術，模型組于術后第4d處死取材；各治療組均于術后低4d開始灌胃，連續灌胃15d；15d后各治療組一起處死取材。

2.2 動物模型制作與給藥：參照陳奇的文獻方法。空白組8只除外，其余40只大鼠均用文獻方法。注射0.05ml醋酸建立消化性潰瘍大鼠模型。造模前大鼠禁食不禁水24h，1%戊巴比妥鈉3ml/Kg(30mg/Kg)腹腔注射麻醉，約10min后，大鼠麻醉，將其仰臥固定于手術臺上，剪掉腹壁毛，用碘酒、酒精常規消毒。劍突下腹部正中切口2 ～ 3cm，用彎止血鉗在右側肝臟下方將十二指腸輕輕勾出，然后將胃部輕輕拉出腹外，在胃的腹側面，胃體部與幽門交界處，將微量注射器平刺入漿膜下0.4 ～ 0.5mm，注入10%醋酸0.05ml，形成丘疹。將胃輕輕送回，縫合腹壁基層，然后縫合皮膚。用碘酒酒精消毒，外涂大棉膠。麻醉大鼠在均在2 ～ 3h內逐漸蘇醒，造模周期為3d，常規飼養。從手術次日起，治療組按分別灌胃阿那日-4散混懸液6ml/Kg，陽性對照組灌胃枸櫞酸鉍鉀17mg/kg，2次/d，對照組給予等容量的生理鹽水，連續治療15d。

2.3 標本采集與測定

2.3.1 標本采集：大鼠連續灌胃給藥15d，于末次給藥后禁食24h，自由飲水，第16d將大鼠頸椎脫臼處死，迅速打開腹腔，腹主動脈取血約5ml，3000r/min離心10min，分離血漿，-20℃冰箱保存備用。

2.3.2 血清SOD活力及NO、MDA含量檢測：各項檢測指標均嚴格按試劑盒說明進行，UV-2000型紫外可見分光光度計比色。血清中，SOD活力及NO、MDA含量分別黃嘌呤氧化酶法、硝酸還原酶法和硫代巴比妥酸法測定。

2.3.3 胃黏膜大體標本觀察及潰瘍面積測定：處死大鼠取血結束后，開腹，結扎幽門和賁門，取胃浸于0.01ml/ml甲醛溶液中，固定10分鐘。沿胃大彎切開，將胃外翻，倒掉內容物，再用乳頭吸管輕輕洗掉食物殘渣，于手術彎盤中展平，放大鏡下肉眼觀察。用潰瘍的最長徑和最短徑的均值表示潰瘍指數，進行統計處理，計算潰瘍愈合百分率，評定藥物對潰瘍愈合的促進作用。

2.4 實驗統計方法：本實驗所有數據均用均屬±標準差()表示，并使用SPSS10.0軟件倉促進行統計學分析，組間差異比較采用兩樣均數比較的t檢驗，P<0.05為差異顯著性。

3 結果

3.1 胃黏膜大體標本觀察：空白組：胃黏膜光整完好、呈淡紅色、無充血、水腫，潰瘍及瘢痕組織增生等異常變化。模型組：胃竇區漿膜表面充血水腫和肝臟和周圍組織有少許粘連，胃竇黏膜可見一個或多個潰瘍點，潰瘍中心被黃白色膿性分泌物覆蓋。枸櫞酸鉍鉀組：漿膜面少許粘連，胃竇區黏膜表面粗糙，周圍偶見充血糜爛點。蒙藥阿那日-4散高劑量組愈合較佳，胃黏膜僅見小范圍瘢痕增生，胃竇區粘膜表面粗糙。蒙藥阿那日-4散中劑量和低劑量組：漿膜面少量充血，胃竇區黏膜可見不規則潰瘍點或瘢痕組織增生。

3.2 潰瘍面積比較：與模型組相比，枸櫞酸鉍鉀組和蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量大鼠潰瘍面積顯著縮小(P<0.01)，結果見表1。

表1 各組大鼠潰瘍面積比較

與模型組比較*P<0.05

3.3 血清SOD活力比較：模型組大鼠血清SOD活力明顯低于空白組(P<0.05)，與模型組相比，蒙藥阿那日-4散中劑量組大鼠血清SOD活力明顯升高(P<0.05)，與對照組相比，蒙藥阿那日-4散中劑量大鼠血清SOD活力明顯升高(P<0.05)，結果見表2。

3.4 血清NO含量比較：與模型組相比，蒙藥阿那日-4散各劑量組大鼠血清NO含量明顯降低(P<0.01)；與枸櫞酸鉍鉀組相比，蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量組大鼠血清NO含量明顯降低(P<0.01)，結果見表2。

3.5 血清MDA含量比較：與模型組相比，蒙藥阿那日-4散各劑量大鼠血清MDA含量明顯降低(P<0.01)；結果見表2。

表2 各組大鼠血清SOD活力及NO、MDA含量比較

與模型組比較*P<0.05 **P<0.01，與枸櫞酸鉍鉀比較P<0.05

4 討論

胃潰瘍是消化系統常見病，多發病，屬于蒙醫學“胃寶日病”的范疇，是因“寶日”熱邪滯留于胃，蘊積不消而產生的胃復合性慢性病[1]。胃潰瘍中脾胃虛寒者居多，治療則以溫中助陽，祛腐生肌促進潰瘍修復的藥物。西醫學認為胃潰瘍的發病機制是由于多種原因導致攻擊性因子增強和(或)黏膜防御功能減弱所致。

近年研究結果表明，由于胃腸特殊的生理學特點，很容易產生大量的氧自由基，當氧自由基大量產生，超過機體清除能力時，就會溢出細胞外，對周圍組織造成損害，導致胃潰瘍的發生。

蒙藥阿那日-4散有石榴、肉桂皮、白豆蔻、蓽茇4味藥組成，研究發現[2]，許多蒙藥都有抗氧作用，其抗氧化活性成分主要有：黃酮類化合物、酚類化合物、皂苷類、多糖類等。方中石榴可調理胃火，祛巴達干寒癥、消食、開胃、止瀉，其主要成分單寧(鞣質)能明顯抑制大鼠幽門結扎型胃潰瘍的形成[3]，單寧具有提高SOD活力、抑制MDA劑NO含量的升高作用[4]。

肉桂皮功能具有祛寒赫依、調理胃火、止瀉、斂膿。對肉桂皮的現代藥學表明，肉桂提取物具有良好抗氧化作用，清除自由基的能力[5]。肉桂提取物對應激性潰瘍、幽門結扎潰瘍等潰瘍模型均有明顯的或較強的抗潰瘍作用[6]。白豆蔻有祛胃寒、抗赫依、調胃火、消食、開胃、止吐。白豆蔻提取物具改善胃腸蠕動和胃潰瘍[7]。蓽茇有調理胃火、祛巴達干赫依、調節體素、止痛。蓽茇主要成分胡椒堿除了抗心律失常、抗心肌缺血、抗缺氧、抑菌、抗潰瘍作用外，消除DPPH自由基[8]。

本實驗采用醋酸性潰瘍，只要把醋酸準確注射于胃黏膜下，潰瘍發生率100%，與人的慢性胃潰瘍極相似，此種法造模成率高，重復性好，潰瘍深淺可控，自愈時間長達60d左右。是一種規范且較常用的造模方法[9]。

本實驗結果顯示，蒙藥阿那日-4散高中低劑量組和枸櫞酸鉍鉀組與模型組相比較，均具有顯著的統計學意義(P<0.01)，說明蒙藥阿那日-4散和枸櫞酸鉍鉀對胃潰瘍的愈合均有明顯的促進作用。

SOD是存在于生物內機制和防御自由基損傷的主要酶類之一。其功能是催化氧自由基的歧化反應，即將超氧陰離子自由基歧化為過氧化氫和氧氣，消除超氧陰離子自由基的作用，從而消減過量的超氧陰離子對人體的損傷作用。NO在正常情況下，NO的正常分泌可以調節胃腸黏膜血流量，維持黏膜完整性和防御功能，而NO異常大量合成時與HP的感染有相關性。MDA是長鏈脂肪酸發生氧化作用后的終末產物，可作為氧化作用后的標志，它的含量變化可間接反映組織受自由基損傷的成程度。

本實驗發現，蒙藥阿那日-4散中劑量組大鼠血清SOD活動明顯高于模型組(P<0.05)，可見中劑量的蒙藥阿那日-4散可明顯提高實驗性胃潰瘍大鼠血清中SOD 的活力、減少脂質過氧化反應、保護胃黏膜、促進潰瘍愈合。蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量組大鼠血清NO 含量顯著低于模型組(P<0.01)。蒙藥阿那日-4散高劑量組大鼠血清NO含量顯著低于枸櫞酸鉍鉀組(P<0.01)。說明蒙藥阿那日-4散減少NO生成，減輕NO對胃黏膜損傷；減少黏膜攻擊和增強胃黏膜保護。蒙藥阿那日-4散高、中、低劑量組大鼠血清MDA含量顯著低于模型組(P<0.01)，說明蒙藥阿那日-4 散能清楚實驗性胃潰瘍大鼠體內氧自由基的含量，抑制脂質過氧化反應，降低體內MDA含量，保護組織免受氧自由基損傷。

本實驗通過大體標本，潰瘍面積、血清SOD活力及NO、MDA含量進一步研究對比發現，蒙藥阿那日-4散對大鼠實驗性胃潰瘍具有良好的治療作用，推測其治療機制可能與清除體內氧自由基含量，提高血清SOD活力，降低NO，MDA含量有關，NO異常大量合成時，可以加重細胞毒性作用，促進潰瘍的發生，并提高NO 的異常合成與幽門螺旋桿菌的感染有相關性[11]。它給研究消化性潰瘍的防治以諸多啟迪。

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△內蒙古自然基金項目2013MS1146

R291.2

A

1006-6810(2017)08-0051-03

2017年6月9日收稿