多發性骨髓瘤患者血清miR-193b表達變化及臨床意義

蘇建友，趙虬旻，申嫻娟，鞠少卿

(南通大學附屬醫院，江蘇南通226001)

·臨床研究·

多發性骨髓瘤患者血清miR-193b表達變化及臨床意義

蘇建友，趙虬旻，申嫻娟，鞠少卿

(南通大學附屬醫院，江蘇南通226001)

目的探討多發性骨髓瘤(MM)患者血清miR-193b表達變化及臨床意義。方法選取MM患者42例(MM組)，其中IgG型16例、IgA型9例、其他17例，體檢健康者35例(對照組)。采用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測血清miR-193b相對表達量；采用Spearman相關分析法分析MM患者血清miR-193b表達與β2微球蛋白(β2M)、輕鏈κ、輕鏈λ和乳酸脫氫酶(LDH)水平的關系；采用受試者工作特征(ROC)曲線評估各指標單獨及聯合檢測對MM的診斷效能。結果MM組和對照組血清miR-193b相對表達量分別為6.904±2.782、4.454±2.553，組間比較P<0.01。IgG型MM患者血清miR-193b相對表達量為8.001±2.479，IgA型為5.268±1.849，其他為6.396±3.132；IgG型高于IgA型(P<0.01)，其余各型比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。MM患者血清miR-193b表達與血清β2M、輕鏈κ、輕鏈λ和LDH水平均無相關性(P均>0.05)。血清miR-193b診斷MM的敏感性、準確性均高于輕鏈κ、輕鏈λ、β2M和LDH，血清miR-193b聯合輕鏈κ、輕鏈λ、β2M或LDH診斷MM的敏感性、準確性均高于各單項指標。結論MM患者血清miR-193b表達上調;檢測血清miR-193b表達變化可用于MM的輔助診斷及臨床分型。

多發性骨髓瘤；微小RNA-193b；實時熒光定量PCR；受試者工作特征曲線

多發性骨髓瘤(MM)是以骨髓中漿細胞克隆性增殖并分泌大量單克隆免疫球蛋白為特征的惡性血液疾病[1]，其發病率約占惡性血液系統腫瘤的13%[2]，患者5年生存率低[3]。MicroRNA(miRNA)是一類長度約為22 nt的非編碼小RNA，通過抑制或降解特定靶基因mRNA，在轉錄后水平調控基因表達，在腫瘤中常發揮癌基因或抑癌基因作用，參與腫瘤的發生、發展及耐藥等行為[4,5]；其可作為新的生物標志物，用于疾病的診斷及患者預后判斷[6～9]。研究發現，MM發生、發展的不同階段均伴隨miRNA表達變化[10]；miRNA亦可通過調控抑癌基因或促凋亡基因表達而影響MM的病理進程[11]。但目前關于miR-193b與MM發生、發展的關系尚未明確。為此我們進行本研究，現將研究過程及結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年6月～2016年12月南通大學附屬醫院收治的MM初診患者42例(MM組)，均符合《血液病診斷及療效標準》第2版中的診斷標準[12]?；颊吣?2例、女20例，年齡(60±11)歲，IgG型16例、IgA型9例、其他17例，血清輕鏈κ為(1 209.0±728.1)mg/mL、輕鏈λ為(1 290.0±876.1)mg/mL、β2微球蛋白(β2M)為(2.4±1.4)μg/mL、乳酸脫氫酶(LDH)為(179.0±84.3)U/L。選取同期體檢健康者35例(對照組)，男20例、女15例，年齡(58±9)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 血清miR-193b水平檢測 采用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法。采用帶有分離膠的真空采集管收集兩組血液標本，1 000 r/min離心10 min，將上層血清分裝于無酶離心管中，置于-80 ℃冰箱保存備用。采用RNA提取試劑盒(美國Life公司)提取血清總RNA，紫外分光光度計測量濃度和純度合格后，保存于-80 ℃冰箱。采用逆轉錄試劑盒將RNA逆轉錄成互補DNA。收集逆轉錄產物，采用SYBR GreenⅠ混合液(德國羅氏公司)和7500實時定量PCR擴增儀(美國ABI公司)進行熒光定量PCR檢測。miR-193b引物序列：正向：5′-ACACTCCAGCTGGGAACTGGCCCTCAAAGT-3′； 反向：5′-TGGTGTC-GTGGAGTCG-3′。U6(內參)引物序列：正向：5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向： 5′-AACGCTTCAC-GAATTTGCGT-3′。反應體系：SYBR Green Ⅰ 混合液 10 μL，互補DNA 6 μL，正反向引物各1 μL，無RNA酶水2 μL。反應條件：95 ℃ 10 min、95 ℃ 15 s、58 ℃ 31 s，共40個循環。每個樣本做3個復孔，結果取其均值。以2-ΔΔCt法計算miR-193b相對表達量。

2 結果

2.1 兩組血清miR-193b表達比較 MM組和對照組血清miR-193b相對表達量分別為6.904±2.782、4.454±2.553，組間比較P<0.01。IgG型MM患者血清miR-193b相對表達量為8.001±2.479，IgA型為5.268±1.849，其他為6.396±3.132；IgG型高于IgA型(P<0.01)，其余各型比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。

2.2 MM患者血清miR-193b表達與β2M、輕鏈κ、輕鏈λ和LDH水平的關系 相關性分析結果顯示，MM患者血清miR-193b表達與血清β2M、輕鏈κ、輕鏈λ和LDH水平均不相關(P均>0.05)。

2.3 各指標單獨及聯合檢測對MM的診斷效能 ROC曲線結果顯示，血清miR-193b診斷MM的敏感性、準確性均高于輕鏈κ、輕鏈λ、β2M和LDH，血清miR-193b聯合輕鏈κ、輕鏈λ、β2M或LDH診斷MM的敏感性、準確性均高于各單項指標，但血清miR-193b單項或聯合診斷的特異性低于輕鏈κ、輕鏈λ、β2M或LDH。

表1 各指標單獨及聯合檢測對MM的診斷效能(%)

3 討論

研究發現，miRNA除了通過改變自身表達水平參與MM的發生、發展外，還可通過調控抑癌基因或促凋亡基因表達影響MM的病理進程[15]。本課題組前期通過基因芯片技術對MM患者和健康對照者骨髓miRNA表達水平進行高通量分析。結果顯示，相對于健康對照者，MM患者骨髓中有54種miRNA高表達，28種miRNA低表達。根據miRNA表達差異的倍數和P<0.05原則，選取了miR-193b作為本研究目標因子。miR-193b編碼基因位于人16p13.12，是一種非編碼的小分子，與腫瘤細胞增殖、遷移、血管形成及患者預后等多種生物學行為相關[14]。研究表明，miR-17-92簇的表達和調節與Myc基因相關，沉默Myc基因可誘導MM細胞死亡、抑制細胞生長、增加前凋亡蛋白Bim表達，且miR-17-92簇表達改變與MM患者預后相關[13]。但由于其靶基因眾多，在不同類型腫瘤中miR-193b的確切生物學作用及調控機制還有待進一步研究。

本研究我們采用qRT-PCR法檢測血清miR-193b，結果顯示，MM患者血清miR-193b相對表達量明顯高于健康對照者，提示miR-193b在MM中可能發揮癌基因作用，可能用于MM的輔助診斷和疾病監測。IgG型與IgA型MM患者血清miR-193b相對表達量比較差異有統計學意義，提示檢測miR-193b水平可在一定程度上協助判斷IgG、IgA分型。血清輕鏈λ、輕鏈κ、β2M水平與MM患者腫瘤負荷密切相關，血清LDH水平反映腫瘤細胞增殖活性，上述指標對腫瘤療效及患者預后判斷均具有重要價值。但本研究MM患者血清miR-193b相對表達量與血清LDH、β2M、輕鏈λ和輕鏈κ水平均不相關，可能與標本量較小，未將MM患者按病情分級有關。

本研究ROC曲線分析發現，血清miR-193b診斷MM的敏感性、準確性均高于血清輕鏈κ、輕鏈λ、β2M和LDH；血清miR-193b聯合輕鏈κ、輕鏈λ、β2M或LDH診斷MM的敏感性、準確性均高于各單項指標檢測，其中miR-193b和輕鏈λ聯合檢測的診斷敏感性和準確性最高。提示血清miR-193b可能在MM的輔助診斷方面發揮一定作用，與輕鏈λ等指標進行聯合時其診斷敏感性、準確性均提高。但血清miR-193b單項或聯合診斷的特異性低于輕鏈κ、輕鏈λ、β2M或LDH，后期仍需擴大樣本量來進一步驗證。

綜上所述，MM患者血清miR-193b表達上調，檢測血清miR-193b表達變化可用于MM的輔助診斷及臨床分型。

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國家自然科學基金面上項目(81672099)；江蘇省重點研發專項(BE2015654)；江蘇省“科教強衛”工程青年醫學人才項目(QNRC2016695)；南通市民生科技創新和示范推廣計劃項目(MS120170008-6)。

鞠少卿(E-mail: jsq814@hotmail.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.48.015

R733.3

B

1002-266X(2017)48-0046-03

2017-07-19)